全 文 ：附作用。中国药典的试剂衍生过程复杂、检测灵敏
度及重现性受人为因素影响较大。本实验采用光化
学衍生技术，以流动相中的水作为衍生剂，对黄曲霉
毒素进行衍生化处理，使流动相中的水与黄曲霉毒
素作用，生成荧光特性更强、更稳定的化合物，从而
解决了黄曲霉毒素在水溶液中发生荧光淬灭的问
题，而且增加了黄曲霉毒素的荧光强度［１１］，没有任
何毒害作用。同时蛤蚧定喘丸中以原粉直接入药，
处方中共有１４味药材，药味较多，组成较复杂，会出
现假阳性的情况，因此进一步的确证实验就显得非
常必要。先采用 ＨＰＬＣ－柱后光化学衍生法直接测
定，出现阳性样品时，再用ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法进行对阳
性结果进行确证，可保证结果的准确、可靠。
参考文献：
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［收稿日期］２０１５－０５－２８
［基金项目］福建省自然科学基金海洋经济发展专项重点项目（编号：２０１４Ｎ００１７）；泉州市科技计划项目（编号：２０１４Ｚ１２９）资助，泉州市第二批
科技项目（编号：２０１３Ｚ１２６）；福建省大学生创新创业计划项目（编号：２０１４１０３９９０２７） ［作者简介］黄晓冬，男，副教授，硕士，研究方向：天然产
物化学与资源植物学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｘｄ６０２＠１６３．ｃｏｍ
海藻铁钉菜抑制α－ 葡萄糖苷酶活性部位的筛选及其反应动力学研究
黄晓冬，蔡琼瑶，王远花，蔡建秀，戴聪杰 （泉州师范学院近海资源生物技术福建省高校重点实验室，福建 泉州
３６２０００）
［摘要］ 目的：探讨海藻铁钉菜提取物对α－葡萄糖苷酶活性的影响及其反应动力学。方法：萃取法获得铁钉菜甲醇提取物的
石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位等５个部位，采用ＰＮＰＧ筛选其中具有α－糖苷酶酶抑制的活
性部位，通过酶促动力学方法与Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ曲线，推断酶抑制类型。结果：包括甲醇提取物在内的６种铁钉菜提取物均
具有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，其中乙酸乙酯部位、石油醚部位、正丁醇部位、二氯甲烷部位的抑制活性均较强，ＩＣ５０分别
为３．４，４．４，５．１，７．８μｇ·ｍＬ
－１，均远强于阳性对照阿卡波糖Ａｃａｒｂｏｓｅ（ＩＣ５０１ ０７５．８μｇ·ｍＬ
－１）。抑制动力学分析显示，乙酸乙
酯部位、石油醚部位、正丁醇部位、二氯甲烷部位等对α－葡萄糖苷酶抑制作用均属于混合Ⅰ型抑制类型。结论：铁钉菜提取物
具有作为新型α－葡萄糖苷酶抑制剂的药用开发价值，特别是乙酸乙酯部位。
［关键词］ 铁钉菜；提取物；α－葡萄糖苷酶抑制；活性部位；抑制动力学
［中图分类号］Ｒ９３１．７１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１－５２１３（２０１６）０１－００１６－０５ ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１６．０１．０５
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ ａｎｄ ｉｔｓ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ
ＨＵＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｄｏｎｇ，ＣＡＩ Ｑｉｏｎｇ－ｙａｏ，ＷＡＮＧ Ｙｕａｎ－ｈｕａ，ＣＡＩ Ｊｉａｎ－ｘｉｕ，ＤＡＩ Ｃｏｎｇ－ｊｉｅ（Ｆｕｊｉａｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｅｄｕｃａ－
ｔｉｏｎ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｓｈｏｒｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｑｕａｎｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ Ｑｕａｎｚｈｏｕ ３６２０００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｓｅａｗｅｅｄ Ｉｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ ｏｎα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔ－
ｉｃｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ Ｆｉｖｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｎ－ｂｕ－
ｔａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｉｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅｍ，α－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉ－
ｔｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｂｙ ＰＮＰＧ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｂｙ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ
·６１· 中国医院药学杂志２０１６年１月第３６卷第１期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｊａｎ ２０１６，Ｖｏｌ ３６，Ｎｏ．１
ｃｕｒｖｅ ｍｅｔｈｏｄｓ．ＲＥＳＵＬＴＳ Ｓｉｘ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ，ｈａｄ ｃｅｒｔａｉｎα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎ－
ｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｎ－ｂｕｔａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｈａｄ
ｓｔｒｏｎｇ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ３．４，４．４，５．１，７．８μｇ·ｍＬ
－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｍｏｒｅ ｐｏｔｅｎｔ ｔｈａｎ ａｃａｒｂｏｓｅ（ＩＣ５０１０７５．８
μｇ·ｍＬ
－１），ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ
ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｎ－ｂｕｔａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｌ ｃｌｏｓｅ ｔｏ ｍｉｘｅｄ ｔｙｐｅⅠｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．
ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ Ｉｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ ｈａｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｖａｌｕｅｓ ａｓ ｎｅｗα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ
ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ．
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｉｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ；ｅｘｔｒａｃｔ；α－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ；ａｃｔｉｖｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ；ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｋｉｎｅｔｉｃｓ
近年来，糖尿病的发病率随着人们生活水平的提
高和饮食结构的变化逐年增加，已然成为一个日益严
重的公共卫生问题［１］。２型糖尿病是人群中糖尿病
的主要类型，以餐后高血糖为重要体征［２］。在控制糖
尿病发展及并发症发生的医疗实践中，降低餐后血糖
浓度是重要的有效的措施。研究［３］发现，位于小肠绒
毛上的α－葡萄糖苷酶由于是碳水化合物消化为葡萄
糖的关键酶，可作为降低餐后血糖的分子靶点，通过
抑制α－葡萄糖苷酶活性，可延缓和阻碍碳水化合物的
消化，延迟葡萄糖的吸收［４］，并且该作用过程温和持
久、毒副作用小。因此，α－葡萄糖苷酶抑制剂被推荐
为降餐后血糖的首选药物，如阿卡波糖、伏格列波糖
等［５］。寻找新的更为安全、有效的α－葡萄糖苷酶抑制
剂的研究受到广泛的关注，其中，植物源α－葡萄糖苷
酶抑制剂的筛选越来越受到学者的青睐［６－７］。
大型海藻自古以来是海峡两岸沿海居民药食两
用的食材，作为一种生长于海洋中的低等隐花植物，
由于生境的特殊性使其具有与陆岸植物差异较大的
化学组成，如海藻多糖、海藻多酚等。研究［８］发现，
许多大型海藻提取物具有较强的α－葡萄糖苷酶抑
制活性。褐藻铁钉菜（Ｉｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ Ｙｅｎｄｏ）系
北太平洋西部特有的亚热带性海藻，广泛分布于我
国东南沿海的中、高潮带岩礁，民间用于喉炎、淋巴
结炎、甲状腺肿等的治疗［９－１０］。研究发现铁钉菜具
有海藻甾醇［１１］、多糖［１２］、凝集素［１３］、糖脂类与脂肪
酸类［１４］等化学成分，其８０％甲醇提取物可通过改变
肝葡萄糖代谢酶活性、改善胰岛素抵抗起到降低血
糖的作用［１５］。然而，对铁钉菜α－葡萄糖苷酶抑制活
性部位的研究尚未见文献报道。本文以福建围头湾
铁钉菜为材料，制备铁钉菜甲醇提取物以及石油醚、
二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水等５个萃取部位，
通过体外抑制α－葡萄糖苷酶活性法分别检测这些
提取物的α－葡萄糖苷酶抑制活性，并进行抑制动力
学分析，揭示铁钉菜提取物作为α－葡萄糖苷酶抑制
剂开发利用的药用价值。
１ 材料与方法
１．１ 仪器与试剂 主要仪器：ＪＪ－２组织捣碎机
（金坛市城东新瑞仪器厂），连续波长酶标仪（ＡＳＹＳ
ＵＶＭ３４０）。主要试剂：α－葡萄糖苷酶（α－ｇｌｕｃｏｓｉ－
ｄａｓｅ）、４－硝基苯－α－Ｄ－吡喃葡萄糖苷（ＰＮＰＧ）均购自
Ｓｉｇｍａ公司，对硝基苯酚（ＰＮＰ）标准品（纯度≥
９９．５％），阿卡波糖（Ａｃａｒｂｏｓｅ）（含量 ＨＰＬＣ≥９８％，
成都瑞芬思生物有限公司）；二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）等
其他试剂均为国产分析纯。
１．２ 铁钉菜提取物制备 取去杂的新鲜海藻，洗净
沥干后剪碎，用组织捣碎机搅碎，取甲醇按１∶１０（ｇ∶
ｍＬ）料液比浸泡提取３次，每次３ ｄ，合并滤液，用
０．２２μｍ滤膜超滤，得甲醇提取液。提取液经小于
４０℃旋转浓缩，干制后得到铁钉菜甲醇提取物。取
部分甲醇提取物以纯化水混悬，混悬液依次用石油
醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇充分萃取，各萃取液
旋转浓缩并干制得到石油醚部位、二氯甲烷部位、乙
酸乙酯部位、正丁醇部位以及水部位等５个部位的
铁钉菜提取物，作为供测样本。
１．３ 铁钉菜提取物抑制α－葡萄糖苷酶活性的测定
底物（ＰＮＰＧ）可被α－葡萄糖苷酶催化分解为对硝基
苯酚（ＰＮＰ）和葡萄糖，ＰＮＰ是一种有色物质，最大
吸收峰在波长４０５ ｎｍ左右。当加入样品后，样品
的酶抑制能力可根据反应体系的颜色深浅与吸光值
变化加以评价，体系颜色越浅、吸光值越低说明其酶
抑制活性越强［１６］。本实验参照Ｌｉ等［１７］的微孔板方
法测定α－葡萄糖苷酶抑制活性，略加修改。具体方
法如下：在９６孔微孔板上先加入１１２μＬ ｐＨ６．８的
０．１ ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ，然后再加入２０μＬ０．２ Ｕ·ｍＬ
－１α－
ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ（以ｐＨ６．８的０．１ ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ配制），８
μＬ样液（ＤＭＳＯ为溶媒），３７℃恒温１５ ｍｉｎ后加入
２．５ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＰＮＰＧ（以ｐＨ６．８的０．１ ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ
配制）２０μＬ，继续３７℃恒温反应１５ ｍｉｎ，随后加入
８０μＬ０．２ ｍｏｌ·Ｌ
－１的Ｎａ２ＣＯ３溶液。反应体系终体
积为２４０μＬ，其中含ＤＭＳＯ３．３３％，酶标仪４０５ ｎｍ
波长下测样液组吸光值（Ａ１）。以阿卡波糖为阳性
对照；ＰＢＳ溶液代替酶溶液测样液组背景吸光度
（Ａ２）；以 ＤＭＳＯ 代替样液测空白对照组吸光度
（Ａ３）；以ＤＭＳＯ代替样液与ＰＢＳ溶液代替酶溶液
·７１·中国医院药学杂志２０１６年１月第３６卷第１期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｊａｎ ２０１６，Ｖｏｌ ３６，Ｎｏ．１
测空白对照组背景吸光度（Ａ４）。酶抑制率（Ｉ％）按
公式Ｉ％＝［１－（Ａ１－Ａ２）／（Ａ３－Ａ４）］×１００％计
算，重复实验３次，取平均值。测定不同浓度样液对
α－葡萄糖苷酶抑制活性的影响，以抑制率对浓度作
图并进行回归方程拟合，求得半数抑制浓度（ＩＣ５０）。
１．４ 铁钉菜提取物对α－葡萄糖苷酶的抑制动力学
分析 参照Ｌｉ等［１７］的的方法稍加修改。具体步骤
为：将铁钉菜提取物分别取抑制率低于５０％的３个
不同浓度，改变底物ＰＮＰＧ的浓度［ｓ］使其分别为
０．６２５，１．２５，２．５，５．０，１０．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，按“１．３”的
方法分别测定不同浓度样液在不同底物浓度条件下
对α－葡萄糖苷酶活性的影响，以吸光度（Ａ＝Ａ１－
Ａ２）表征反应速率ｖ。将１／ｖ对１／［ｓ］进行 Ｌｉｎ－
ｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ双倒数作图分析，求得米氏常数Ｋｍ
和酶促反应最大速率ｖｍ，由此判断酶抑制类型。
１．５ 数据统计分析 采用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２００３
软件进行数据处理与统计分析，实验数据均为３次
重复的平均值。
２ 结果与分析
２．１ 铁钉菜提取物对α－葡萄糖苷酶的抑制作用
铁钉菜６种提取物的α－葡萄糖糖苷酶抑制活性见表
１。由表１可知，铁钉菜各提取物的α－葡萄糖苷酶抑
制活性表现不一，甲醇提取物和水部位的α－糖苷酶
抑制活性相对较弱。以ＩＣ５０来看，α－糖苷酶抑制活
性由 高 到 低 依 次 为 乙 酸 乙 酯 部 位 （ＩＣ５０３．４
μｇ·ｍＬ
－１）、石油醚部位（ＩＣ５０４．４μｇ·ｍＬ
－１）、正丁
醇部位（ＩＣ５０５．１μｇ·ｍＬ
－１）、二氯甲烷部位（ＩＣ５０
７．８μｇ·ｍＬ
－１），活性均远远高于 Ａｃａｒｂｏｓｅ（ＩＣ５０
１ ０７５．８μｇ·ｍＬ
－１）。
２．２ 铁钉菜提取物的α－葡萄糖苷酶抑制动力学
在测酶活反应体系中，分别测定改变底物ＰＮＰＧ浓
度条件下，具有较高α－葡萄糖苷酶活性的铁钉菜乙
酸乙酯部位、石油醚部位、正丁醇部位、二氯甲烷部
位等不同浓度样液对α－葡萄糖苷酶活力的影响，结
果以１／ｖ对１／［ｓ］进行Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ双倒数作
图（图１～４），相应的动力学参数见表２。
Ａ．石油醚部位的Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ作图；Ｂ．斜率对样液浓度作图；
Ｃ．截距对样液浓度作图
Ａ．Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ；Ｂ．ｃｕｒｖｅ ｏｆ
ｓｌｏｐｅ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ；Ｃ．ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ ａｎｄ
ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
图１ 铁钉菜石油醚部位对α－葡萄糖苷酶活性抑制的动力学分析
Ｆｉｇ １ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｂｙ ｔｈｅ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ
ｆｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ
Ａ．二氯甲烷部位的 Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ作用；Ｂ．斜率对样液浓度作
用；Ｃ．截距对样液浓度作图
Ａ．Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ；Ｂ．Ｃｕｒｖｅ ｏｆ
ｓｌｏｐｅ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ；Ｃ．Ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ ａｎｄ
ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
图２ 铁钉菜二氯甲烷部位对α－葡萄糖苷酶活性抑制的动力学分析
Ｆｉｇ ２ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｂｙ ｔｈｅ ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ
ｆｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ
表１ 铁钉菜提取物的α－葡萄糖苷酶抑制活性
Ｔａｂ １ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ ａｇａｉｎｓｔα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ
样品 提取物
抑制率／％
１μｇ·ｍＬ－１ ２μｇ·ｍＬ－１ ４μｇ·ｍＬ－１ ６μｇ·ｍＬ－１ １０μｇ·ｍＬ－１ ６０μｇ·ｍＬ－１
ＩＣ５０
石油醚部位 １０．９０±２．５９ ２７．３７±７．９２ ５１．９９±３．０５ ７５．７６±３．４４ ８２．５２±０．３０ ９７．１５±２．９５ ４．４
二氯甲烷部位 １７．５０±５．３０ ２９．９５±３．６６ ３８．７０±７．８７ ４２．７０±５．４４ ５８．６３±０．７４ ９６．１６±２．６１ ７．８
铁钉菜 乙酸乙酯部位 １４．３７±３．３４ ３５．５２±６．１９ ６９．１６±１．８３ ９０．５０±１．８９ ９２．７０±３．５９ ９７．２９±３．９４ ３．４
正丁醇部位 １２．８６±２．４５ ２２．９７±８．４１ ３３．４１±３．５２ ６５．７９±１．７６ ９３．５９±２．２６ ９８．７８±４．６４ ５．１
水部位 未测 未测 未测 未测 －０．９８±５．５６ ９．８０±６．２５ 未测
甲醇提取物 未测 未测 未测 未测 ８．３５±３．４７ １２．２６±０．０１ 未测
阿卡波糖 １ ０７５．８
·８１· 中国医院药学杂志２０１６年１月第３６卷第１期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｊａｎ ２０１６，Ｖｏｌ ３６，Ｎｏ．１
Ａ．乙酸乙酯部位的 Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ作图；Ｂ．斜率对样液浓度作
图；Ｃ．截距对样液浓度作图
Ｂ．Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ；Ｂ．Ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｓｌｏｐｅ
ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ；Ｃ．Ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
图３ 铁钉菜乙酸乙酯部位对α－葡萄糖苷酶活性抑制的动力学分析
Ｆｉｇ ３ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｂｙ ｔｈｅ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃ－
ｔｉｏｎ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ
Ａ．正丁醇部位Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ作图；Ｂ．斜率对样液浓度作图；Ｃ．
截距对样液浓度作图
Ａ．Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｎ－ｂｕｔａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ；Ｂ．Ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｓｌｏｐｅ
ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ；Ｃ．Ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
图４ 铁钉菜正丁醇部位对α－葡萄糖苷酶活性抑制的动力学分析
Ｆｉｇ ４ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｂｙ ｔｈｅ ｎ－ｂｕｔａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ
ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ
分析发现，铁钉菜不同极性部位的Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－
Ｂｕｒｋ曲线均是一组相交于第二象限的直线，抑制动
力学参数均表现为随样液质量浓度增加 Ｋｍ值增
大、ｖｍ值减小，这与可逆的混合Ⅰ型抑制的特点相
符［１８－１９］。进而以Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ双倒数图的斜率
与截距对相应的样液浓度二次作图分析（图１～４），
发现各提取物相应的二次作图曲线均呈直线（图１
～４），经线性回归计算出各提取物对游离酶的抑制
常数Ｋｉ与对酶－底物络合物的抑制常数Ｋｉｓ，结果如
表３。由表３可知，各提取物的Ｋｉ均小于Ｋｉｓ，说明
不同极性的铁钉菜提取物与游离酶（Ｅ）的亲和力均
大于其与酶－底物络合物（ＥＳ）的亲和力。
表２ 铁钉菜提取物对α－葡萄糖苷酶抑制的动力学参数
Ｔａｂ２ Ｋｉｎｅｔｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆα－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕｒａｉ
样液
样液浓度
／μｇ·ｍＬ－１
Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ
方程
Ｋｍ
／μｇ·ｍＬ－１
ｖｍ
石油醚部位 ０．０ １／ｖ＝１．４２６［ｓ］＋０．５１１ ２．７９１ １．９５７
４．０ １／ｖ＝１．６３０［ｓ］＋０．５７２ ２．８５０ １．７４８
６．０ １／ｖ＝１．９４５［ｓ］＋０．６４９ ２．９９２ １．５３８
８．０ １／ｖ＝２．４０１［ｓ］＋０．７７８ ３．０８６ １．２８５
二氯甲烷部位 ０．０ １／ｖ＝１．４２６［ｓ］＋０．５１１ ２．７９１ １．９５７
４．０ １／ｖ＝１．６５１［ｓ］＋０．５７２ ２．８８６ １．７４８
６．０ １／ｖ＝２．１６４［ｓ］＋０．７０２ ３．０８３ １．４２５
８．０ １／ｖ＝２．４３５［ｓ］＋０．７７５ ３．１４２ １．２９０
乙酸乙酯部位 ０．０ １／ｖ＝１．４２６［ｓ］＋０．５１１ ２．７９１ １．９５７
２．０ １／ｖ＝１．８１３［ｓ］＋０．６３１ ２．８７３ １．５８５
４．０ １／ｖ＝２．３２１［ｓ］＋０．７７２ ３．２１５ １．３８５
６．０ １／ｖ＝２．７２２［ｓ］＋０．９０３ ３．０１４ １．１０７
正丁醇部位 ０．０ １／ｖ＝１．４２６［ｓ］＋０．５１１ ２．７９１ １．９５７
２．０ １／ｖ＝１．９３６［ｓ］＋０．５７２ ３．３８５ １．７４８
４．０ １／ｖ＝２．３３９［ｓ］＋０．６０９ ３．７５４ １．６１６
６．０ １／ｖ＝３．１００［ｓ］＋０．７１０ ４．３６６ １．４０８
表３ 铁钉菜提取物对游离酶的抑制常数 Ｋｉ 与对酶－底物
络合物的抑制常数Ｋｉｓ
Ｔａｂ ３ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｃｏｎｓｔａｎｔｓ ｆｏｒ ｆｒｅｅ ｅｎｚｙｍｅ（Ｋｉ）ａｎｄ ｅｎ－
ｚｙｍｅ－ｓｕｂｔｒａｔｅ（Ｋｉｓ）ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍＩｓｈｉｇｅ ｏｋａｍｕ－
ｒａｉ
提取物 Ｋｉ Ｋｉｓ Ｋｉｓ／Ｋｉ
石油醚部位 ０．０１１ ０．０１５ １．３６
二氯甲烷部位 ０．０１０ ０．０１４ １．４０
乙酸乙酯部位 ０．００６ ０．００８ １．３２
正丁醇部位 ０．００５ ０．０１６ ３．１５
３ 讨论
应用α－葡萄糖苷酶抑制剂降低餐后血糖是预
防糖尿病，减少并发症和降低死亡率的重要措施之
一。目前，α－葡萄糖苷酶抑制剂主要有天然动植物、
微生物的提取物，微生物代谢物和人工合成等３种
来源途径［２０］。以ＰＮＰＧ为底物测定天然产物提取
物抑制α－葡萄糖苷酶活性的大小是目前最常用的
经典的α－葡萄糖苷酶抑制剂筛选方法［２１］，李宪璀
等［８］应用此方法发现青岛沿海２０种常见大型海藻
的脂溶性提取物（７９．６μｇ·ｍＬ
－１）对α－葡萄糖苷酶
均有一定的抑制活性，其中，红藻提取物的酶抑制活
性相对较强，褐藻提取物相对较弱。在此研究中，褐
藻铁钉菜并没有纳入研究对象。本实验采用体外
α－葡萄糖苷酶抑制的微孔板筛选模型对铁钉菜甲醇
提取物及其石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部
位、正丁醇部位、水部位的α－葡萄糖苷酶抑制活性
进行比较，发现６种提取物均具有一定的α－葡萄糖
苷酶抑制活性，其中，乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、二
氯甲烷部位对α－葡萄糖苷酶活性的抑制呈现明显
的量效正相关，ＩＣ５０均远低于阳性对照Ａｃａｒｂｏｓｅ，尤
·９１·中国医院药学杂志２０１６年１月第３６卷第１期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｊａｎ ２０１６，Ｖｏｌ ３６，Ｎｏ．１
以乙酸乙酯部位的α－葡萄糖苷酶抑制活性最为突
出，ＩＣ５０为３．４μｇ·ｍＬ
－１。
酶抑制剂类型根据抑制剂与酶作用的特点可分
为可逆抑制与不可逆抑制，前者包括竞争性抑制、非
竞争性抑制、反竞争抑制与混合型抑制等４种类型，
而混合型抑制又分为混合Ⅰ型与Ⅱ型。已有研究发
现，植物源α－葡萄糖苷酶抑制剂的抑制机理大多表
现为竞争性抑制、非竞争性抑制和混合性抑制等类
型［２１］。铁钉菜提取物对α－葡萄糖苷酶抑制的动力
学分析表明铁钉菜乙酸乙酯部位、石油醚部位、二氯
甲烷部位、正丁醇部位等提取物的酶抑制类型均为
混合Ⅰ型，均表现出与底物竞争游离酶、与酶－底物
络合物（ＥＳ）亲和的双重作用，兼具竞争性和非竞争
性作用的双重特点；分析发现各提取物对酶－底物络
合物的抑制常数Ｋｉｓ均高于其对游离酶的抑制常数
Ｋｉ，提示各提取物对酶促反应的抑制以对游离酶的
抑制作用为主，作用强于其对酶－底物络合物的亲
和作用。综上所述，铁钉菜提取物具有作为一种海
藻源α－葡萄糖苷酶抑制剂的潜在开发价值，后续的
研究可对相应活性部位进行活性追踪，分离鉴定出
高效治疗糖尿病的活性组分或单体成分。
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［收稿日期］２０１５－０６－１７
［基金项目］广东省中医药强省科研课题研究项目（编号：２０１５１２００）；广州中医药大学创新基金研究项目（编号：１１ＣＸ０６９） ［作者简介］李得
堂，男，主管中药师，硕士研究生，研究方向：中药新制剂的开发与评价，电话：１５９１８７２７６９７，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｄｅｔａｎｇ２００２＠１６３．ｃｏｍ
应用电导率 －含水量曲线法研究广东王不留行提取物为模型药物的Ｏ／
Ｗ型微乳
李得堂１，张丽娟２，唐洪梅１，蔡庆群１，丘振文１，司徒杰３，房财富４ （１．广州中医药大学第一附属医院，广东 广州
５１０４０５；２．广州中医药大学附属中山医院，广东 中山５２８４００；３．广州中医药大学，广东 广州５１０４０５；４．中山大学附属肿瘤医
院，广东 广州５１００６０）
［摘要］ 目的：建立广东王不留行提取物为模型药物的Ｏ／Ｗ 型微乳处方筛选及制备成型的一种方法。方法：选取文献及本
实验室１５个处方空白微乳建立电导率－含水量曲线，同时与目测法进行对比研究，选取其中４个稳定的微乳处方，分别建立以
广东王不留行提取物为模型药物的Ｏ／Ｗ型微乳的电导率－含水量曲线，进行其方法学考察及微乳质量评价。结果：Ｏ／Ｗ 型空
白及含药微乳成型的临界点均是电导率－含水量曲线的顶点，进一步验证其值显著高于目测法测定的临界值，目测法所测定的
Ｏ／Ｗ型微乳临界值在双连续区域内，通过电导率－含水量曲线确定的空白及含药Ｏ／Ｗ 型微乳方法学实验ＲＳＤ＜１％，空白及
·０２· 中国医院药学杂志２０１６年１月第３６卷第１期Ｃｈｉｎ Ｈｏｓｐ Ｐｈａｒｍ Ｊ，Ｊａｎ ２０１６，Ｖｏｌ ３６，Ｎｏ．１