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HPLC法测定蒙药蒙古山萝卜根、茎、叶、花中绿原酸的含量



全 文 :△基金项目:国家自然科学基金(编号:81260659) ;内蒙古自然
科学基金(编号:2014MS0860)
* 通讯作者
HPLC法测定蒙药蒙古山萝卜根、茎、叶、花中绿原酸的含量△
王旭瑞1 刘 芳1 周雪梅2* 董珉翔3 李德良3 任晓伟3 张栓珍3
(1.内蒙古自治区人民医院,内蒙古 呼和浩特 010017;
2.内蒙古自治区食品药品检验所,内蒙古 呼和浩特 010070;
3.内蒙古自治区中医药研究所,内蒙古 呼和浩特 010020)
摘 要:目的:HPLC 法测定蒙古山萝卜不同部位中绿原酸的含量。方法:HPLC 法测定;色谱柱 Kromasi - C18 (4. 6mm ×
200mm,5μm) ;流动相:乙腈 - 3mLL -1磷酸溶液(12 ﹕ 88) ;检测波长 328nm。结果:HPLC 法绿原酸标准曲线浓度在 7 ~
140 gmL -1范围内呈线性关系(r = 0. 999) ,平均回收率为 101. 2%,RSD为 2. 63%,蒙古山萝卜不同部位中含有绿原酸。结
论:蒙古山萝卜根、茎、花、叶中均含有绿原酸成分,绿原酸含量在 0. 17% ~ 0. 46%之间,根与花卉绿原酸含量相等,叶含量
最低。
关键词:蒙药;蒙古山萝卜;不同部位;绿原酸 ;HPLC
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)01 - 0045 - 02
蒙古山萝卜 Scabiosa comosa Fisch的花卉,为蒙医药治
疗肝病的药材。蒙医认为该药微甘、性凉,入肝、肺,有清肝
明目,祛火消积功效。用于肝热症、肝中毒、肝性消瘦、黄疸
性肝炎,该药与其它药材配伍可治疗多种肝脏疾病的[1]。
实验发现,该药可以提高小鼠血清溶菌酶、巨噬细胞溶菌
酶、巨噬细胞酸性磷酸酶和巨噬细胞杀伤李斯特杆菌的活
性;降低大肠杆菌内毒素的毒力;有解热、消炎作用;抗氧化
防治肝损伤与纤维化作用[1]。现已证明,绿原酸是主要有
效成分[1]。本文在此基础上对该药材根、茎、叶、花中绿原
酸含量进行测定,报道如下。
1 仪器与试药
1. 1 仪器:高效液相色谱仪 1100 型(美国安捷伦公司) ,,
TJ - 912 型色谱分析平台(太极计算机公司) ,IN - 180 型柱
温箱(上海英泰科技研究所) ,SH6150D 超生波清洗器(上
海昆山) ,电子天平(梅特勒)。
1. 2 试药:绿原酸标准品由中国药品生物制品检定所提
供;乙腈、甲醇为色谱纯,其余试剂为分析纯。研究用蒙古
山萝卜 2013 年 8 月采自呼和浩特市圣水梁村。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件:色谱柱 Kromasi - C18 (4. 6mm × 200mm,
5μm) ;流动相:乙腈 - 3mLL -1磷酸溶液(12 ﹕ 88) ;流速:
1mL·min -1;温度:30℃;检测波长 328nm;进样量 10?L,
在此条件下待测组分可达到基线分离,样品中绿原酸与其
它组分有较好的分离,见图 1。
2. 2 标准曲线测定:精密称取干燥至恒质量的绿原酸对照
品适量,置棕色量瓶中,甲醇溶解,配制成 1mL 含 0. 28 mg
绿原酸溶液,作为对照品溶液。分别精密量取绿原酸对照
品溶液 0. 25,0. 5,1,2,3,4 和 5mL,置于 10mL量瓶内,用甲
醇稀释至刻度,按上述色谱条件进行测定。结果,在 7 ~
140gmL -1浓度范围内以峰面积(A)与对照品质量浓度(C)
进行回归,其线性关系良好。回归方程为:A = 5452. 5 +
7008. 4 C,r = 0. 999。
2. 3 供试品溶液制备:精密称取蒙古山萝卜根、茎、叶、花
粉末(100 目)各 0. 2g,分置 50mL 具塞磨口瓶内,加甲醇
10mL,称质量,超声处理 0. 5h ,放冷,称重,用甲醇补足减
失的质量,摇匀,滤过,取续滤液备用,即得。
图 1 HPLC图谱
A.绿原酸对照品;B.供试品;1.绿原酸
2. 4 精密度实验:精密抽取对照品溶液 10mL,按上述色
谱条件,连续进样 6 次,测得绿原酸峰面积的 RSD 为 0.
41%。
2. 5 稳定性实验:取同一供试品溶液(花提取物) ,分别于
0,1,2,4,8 和 12h进样,以绿原酸峰面积值计算 RSD 为 0.
71%。结果表明,供试品溶液在 12h内稳定。
2. 6 重现性实验:精密称取样品 6 份(花提取物) ,每份约
0. 2g,按 2. 2. 3 项下方法制备供试品溶液,在上述色谱条件
进行分析,并计算含量,绿原酸含量的平均值(n = 6)为 3.
542015 年 1 月第 1 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.01.032
20mgg -1,RSD为 1. 33%。
2. 7 回收率实验:取上述含量的同批样品 6 份(花提取
物) ,每份约 0. 12g,置 50 mL量瓶中,依次精密加入分别加
入 0. 1mL(每 mL 含绿原酸 4. 20 mg)对照品溶液,挥去溶
剂,按供试品溶液的制备操作,测定含量,计算回收率。绿
原酸平均回收率为 101. 2%,RSD为 2. 63%。
2. 8 样品测定:精密称蒙古山萝卜药材不同部位,按以上
确定的方法制成供试品溶液,测定样品中的含量,不同部位
绿原酸含量分别为,根 0. 46%,茎 0. 32%,花 0. 46%,叶 0.
17%。含量范围 0. 17% ~ 0. 46%之间,根与花卉绿原酸含
量相等,叶含量最低。
3 讨 论
蒙古山萝卜是蒙医治疗肝性疾病的特色药材,绿原酸
为主要成分,上述研究表明:根、茎、花及叶中含较高的绿原
酸成分,绿原酸含量 0. 17% ~ 0. 46%,根与花卉中绿原酸
含量相等,叶中含量最低。
蒙古山萝卜仅花卉作为药材使用,其他部位不用。由
于蒙古山萝卜为药用野生资源,产量少,很大程度限制了该
药材的临床使用。本文研究提示,蒙古山萝卜非药用部位
主要成分与药用部位一直,而生物活性与毒性情况有待深
入研究。
参考文献
[1]白音夫,周雪梅,周长凤,等.蒙古山萝卜有效成分的分
离鉴定及含量测定[J].西北药学,2014,29(6)﹕ 564.
2014 年 12 月 21 日收稿
△内蒙古自治区自然科学基金(编号:2014MS0860)
作者简介:李占海,副主任药师,研究方向:临床药学。
* 通讯作者:白音夫
HPLC法测定民族药材广枣中金丝桃苷的含量△
李占海1 白音夫2* 周雪梅3 盛 惟3
(1.内蒙古自治区人民医院,内蒙古 呼和浩特 010017;
2.内蒙古自治区中医药研究所,内蒙古 呼和浩特 010020;
3.内蒙古自治区食品药品检验所,内蒙古 呼和浩特 010070)
摘 要:目的:建立民族药材广枣中金丝桃苷的 HPLC测定方法。方法:采用 HPLC法测定;流动相为甲醇 -水 -磷酸 -三
乙胺溶液(25:30:0. 1:0. 15) ,流速 1. 0mL·min -1,检测波长为 350nm,柱温为 30℃。结果:金丝桃苷在 0. 007 ~ 0. 464μg范
围内呈良好的线性关系,r = 0. 9999;平均回收率 100. 37%,RSD = 1. 68%(n = 6)。结论:药材中金丝桃苷含量高,成分稳定,
测定方法简便、可靠,重现性好。
关键词:HPLC法;广枣;金丝桃苷
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)01 - 0046 - 02
本品系藏蒙医习用药材,蒙药名宁芍沙或珠如很 -芍
沙。为漆树科植物南酸枣 Choerospondiasaxillaris(Roxb.)
BurttetHill的干燥成熟果实。别名:五眼果、山枣、山枣子。
性味甘、酸,平。功能与主治:安神养心,消食开胃。用于气
滞血瘀,胸痹作痛,心神不安,消化不良。已载入中国药
典[1]。文献记载广枣含有没食子酸、原儿茶酸、水杨酸、鞣
花酸、谷甾醇、槲皮素、柚皮素、山奈酚葡萄糖苷等化学成
分[2 - 3]。本文采用高效液相色谱(HPLC)法建立了测定广
枣新发现成分金丝桃苷方法。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器:1100 型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司) ,
TJ - 912 型色谱分析平台(太极计算机公司) ,IN - 180 型柱
温箱(上海英泰科技研究所) ,SH6150D 超生波清洗器(上
海昆山) ,电子天平(梅特勒)
1. 2 试药:金丝桃苷对照品(111521 - 200303)由中国药品
生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯;其他均为分析纯试
剂;水为纯化水;广枣市售(购于不同时间,共计 10 批)。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件:Kromasi - C18 柱(200mm × 4. 6mm,5m) ;
流动相:甲醇 -水 -磷酸 -三乙胺溶液(25:30:0. 1:0. 15) ;
流速:1mL·min -1;温度:30℃;检测波长:350nm nm;进样
量 10L。在此条件下待测组分可达到基线分离。样品中金
丝桃苷与其它组分有较好的分离,见图 1。
图 1 HPLC图谱
A.金丝桃苷对照品;B.供试品;1. 金丝桃苷
64 中国民族医药杂志 2015 年 1 月第 1 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.01.033