全 文 ：·药品检验· 2013 年 5月第 10卷第 15期
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
蒙药四味土木香散是临床中常见的一种药物，主要由
土木香和苦参以及珍珠杆与山柰等药物精制而成的，临床
上具有清热解表的效果。 但是，在对其进行质量控制时，如
何采取有效的方法进行测定显得尤为重要。 临床中采取测
定的方法也比较多， 常见的采取高效液相色谱法（HPLC）
测定苦参碱的含量，但是这种测定方法中被测峰面积比较
小，而且存在拖尾和保留时间长等不足[1]。 随着人们对其质
量控制的不断研究，有资料采取 HPLC 法进行测定其中的
氧化苦参碱，且具有较好的应用效果。 因此，本文对这种测
定方法进行深入的探讨，具体的方法如下：
1 材料与方法
1.1 研究材料
仪器：岛津 LC-6A 液相色谱仪和 CR-3A 记录仪以及
SPD-6AV 检测器与 SIL 自动进样器。
试剂：甲醇作为色谱纯，其他的试剂为分析纯。 氧化苦参
碱对照品（由中国药品生物制品检定所提供），蒙药四味土
木香散（由内蒙古蒙药股份有限公司提供）。
1.2 方法
本次研究对于测定蒙药四味土木香散中的氧化苦参
碱含量采取 HPLC 法进行测定，条件如下 [2]：色谱柱：Shim-
pack CLC-ODS 色谱柱（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流动相：
0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液-甲醇-高氯酸钠（750∶250∶20）；
流速：1.0 mL/min；波长：215 nm；温度：室温。
2 结果
2.1 系统适用性试验
通过上述的条件下分析，选取供试品和对照品以及阴
性空白样品溶液均取 20 μL。 结果显示， 供试品溶液的色
谱被测峰和其他的峰分离较好，而且理论塔板数均按照氧
化苦参碱峰计算＞4000[3]。 具体的图像显示见图 1。
2.2 溶液制备
取样品溶液 0.5 g，并采取精密进行称定，然后将其进
HPLC法对蒙药四味土木香散中
氧化苦参碱含量的测定分析
邓清平 1 吕玉光 2
1.湖南省长沙市四医院，湖南长沙 410006；2.佳木斯大学药学院，黑龙江佳木斯 154003
[摘要] 目的 探讨临床中采取高效液相色谱法（HPLC）测定蒙药四味土木香散中氧化苦参碱含量的准确性和临床
意义。 方法 将选取的蒙药四味土木香散标本采取 HPLC法测定其氧化苦参碱的含量。 色谱柱：Shim-pack CLC-
ODS 色谱柱（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流动相：0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液-甲醇-高氯酸钠（750∶250∶20）；流速：
1.0 mL/min；波长：215 nm；温度：室温。 结果 通过检测分析，氧化苦参碱在 0.2～1.6 μg的范围内和峰面积的线性
关系良好，而且平均加样回收率达到了 99.6%，RSD = 0.5%。 结论 临床中对于测定蒙药四味土木香散中氧化苦
参碱含量采取 HPLC法具有较好的应用效果，而且这种方法操作简单，准确性高，值得在临床中推广与应用。
[关键词] 蒙药四味土木香散；氧化苦参碱；HPLC 法
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）05（c）-0144-03
Determination and analysis of oxymatrine content in Mongolian Medicine
Four-Flavor Elecampane Powder by HPLC
DENG Qingping1 LU Yuguang2
1.Changsha Fourth Hospital, Hu′nan Province, Changsha 410006, China; 2.School of Pharmacy, Jiamusi University,
Heilongjiang Province, Jiamusi 154003, China
[Abstract] Objective To investigate the accuracy and clinical significance of using HPLC method for the determina -
tion of oxymatrine content in Mongolian Medicine Four-Flavor Elecampane Powder. Methods HPLC method was used
to determine the oxymatrine content in Mongolian Medicine Four-Flavor Elecampane Powder. Chromatographic col -
umn: Shim-pack CLC-ODS chromatographic column (6.0 mm×150 mm, 5 μm); mobile phase: 0.05 mol/L sodium di-
hydrogen phosphate solution-methanol-sodium perchlorate (750 ∶250∶20); flow rate: 1.0 mL/min; wavelength: 215 nm;
temperature: room temperature. Results Through detection and analysis, it was found that oxymatrine had a good linear
relationship with peak area within the range of 0.2-1.6 μg, and the average recovery rate reached 99.6% , RSD =
0.5% . Conclusion The HPLC method has a good application effect in the determination of oxymatrine content in
Mongolian Medicine Four-Flavor Elecampane Powder, and this method is easily operated and highly accurate, thereby
worthy of clinical promotion and application.
[Key words] Mongolian Medicine Four-Flavor Elecampane Powder; Oxymatrine; HPLC method
[基金项目] 黑龙江省自然科学基金项目（编号 B201015）。
[作者简介] 邓清平（1969.8-），女，湖南涟源人，副主任药师；研究方向：
中药的临床应用。
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2013 年 5月第 10卷第 15期 ·药品检验·
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行置入锥形瓶中，并进行滴加 0.5 mL 的浓氨试液，精密加
入 20 mL 的三氯甲烷，并对其质量进行称定，采取超声进
行处理 40 min，并放冷，再次称定其质量。然后，加入三氯甲
烷补足原来的质量，经虑过和精密量取后，取续滤液 5.0 mL，
并进行蒸干处理，在残渣中加入无水乙醇溶液进行稀释并
进行摇匀。 最后采取微孔膜进行过滤，所得的溶液即为供
试品溶液；然后依据处方的比例进行制备缺苦参阴性样品
溶液，并采取同样的方法制备阴性对照品溶液。 同时，精密
称取氧化苦参碱对照品， 并利用甲醇制成 0.198 mg/mL 的
溶液作为对照品溶液[4]。
2.3 线性关系
本次研究对于线性关系的考察如下：精密称取对照品
溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，并将抽取的溶液置入 25 mL
的量瓶之中，加入流动相稀释到刻度，并摇匀处理。然后按
照上述的色谱条件进行测定峰面积，其中，纵坐标为峰面
积的积分值，横坐标为进样量 [5]。 并绘制标准的曲线图，得
出回归性方程：Y=1 118 990X+13 871，r = 0.9999。其中，线
性范围值为 0.2～1.6 μg。
2.4 精密度试验
首先， 精密量取 2.0 mL 的对照品溶液， 并将其置入
25.0 mL 的量瓶之中，并采取流动相进行稀释到刻度，进行
摇匀，重复进样 5 次，每次进行测定 20 μL，得峰面积积分
值的 RSD = 0.3%。然后，采取同样的方法量取 2.0 mL 的供
试品溶液，并将其置入 25.0 mL 的量瓶之中，并采取流动
相进行稀释到刻度，进行摇匀，重复进样 5 次，每次进行测
定 20 μL，得峰面积积分值的 RSD = 0.8%。
2.5 稳定性试验
称取同一批的供试品溶液，并且进行分别在 2、4、6、8 h
时进行进样 1 次，而且每次进样为 20 μL，并详细记录峰面
积积分值，其结果显示，在 8 h 内，氧化苦参碱峰面积无任
何的改变，并且其 RSD = 2.0%。
2.6 重复性试验
称取同一批号的供试品溶液 0.5 g，并取 5 份，同时进
行精密称定，并按照样品含量的测定方法进行测定，结果，
氧化苦参碱的平均含量值为 2.825 mg/g，RSD = 1.2%，n = 5。
2.7 加样回收试验
选取样品 0.5 g，并进行精密称定，加入 3.0 mL 的对照品
溶液，并且按照供试品溶液的制备方法进行制备，并计算
有效回收率情况，具体的结果见表 1。
2.8 样品测定
精密称取供试品溶液和对照品溶液均 2.0 mL，并将其
置入 25.0 mL 的量瓶之中， 并采取流动相进行稀释到刻
度，摇匀，按照外标法计算氧化苦参碱的含量。 具体的数据
分析见表 2。
3 讨论
蒙药四味土木香散的质量控制中，常常采取 HPLC 法
进行测定苦参碱的含量，但是这种测定的方法并不是很理
想，在实际的操作中存在被测峰面积比较小、拖尾和保留
时间长等不足点，从而使得整个应用效果并不理想 [6-8]。 随
着人们对其测定的不断研究， 采取 HPLC法进行氧化苦参
碱含量的测定，具有较好的应用效果[9-10]。 而且通过本次的
临床研究分析，采取 HPLC 法测定蒙药四味土木香散中氧
化苦参碱的含量具有较好的应用效果， 而且资料显示，氧
化苦参碱在 0.2～1.6 μg 的范围内和峰面积的线性关系良
好， 而且平均加样回收率达到了 99.6%，RSD = 0.5%。 因
此，采取这种方法可行，具体的分析如下：
3.1 波长选择
由于紫外分光的光度计测得的样品最大吸收波长在
220 nm， 而本次研究中采取测定氧化苦参碱样品溶液在
220 nm内均具有较好的吸收效果。 因此，本次研究选取检
测的波长为 215 nm，从而有效地提高了试验的准确性[11-12]。
3.2 提取条件
本次研究中对于溶液的制备主要依据 《中国药典 》
2010 年版苦参药材含量的测定方法进行制备[13]。 文章采取
0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液-甲醇-高氯酸钠（750∶250∶20）这
种方法比较方便，而且其重现性也比较好[14]，故选取此条件。
3.3 溶剂选择
由于本次研究的样品中含有成膜的物质，而且这种物
质不易溶解于水，而氧化苦参碱比较容易溶于水，因此，本
次研究选取了无水乙醇，而且能够有效地稀释成较大的体
积，并且减小了其体积的变化，从而避免出现误差[15]。
3.4 处理时间
通过本次的临床研究分析，而且对不同的超声处理时
间进行分析， 结果发现超声处理 40 min 后其氧化苦参碱
的含量不再变化，而且比较稳定[16]。 因此，本次研究中选取
超声处理时间为 40 min。
综上所述，临床中采取 HPLC 法进行测定蒙药四味土
木香散中氧化苦参碱的含量具有较好的应用效果。这种方
法比较简单，而且测定的结果也比较准确，重现性和回收
率均比较高 [17]，是临床中测定蒙药四味土木香散中氧化苦
参碱的有效方法，值得在临床中应用。
[参考文献]
[1] 时晓亚，方宝霞，于琳，等.高效液相色谱法测定复方苦参子洗液中苦
A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照品溶液
图 1 高效液相色谱图
0.5211
0.5054
0.5210
0.5012
0.5044
0.5049
1.4664
1.4508
1.4231
1.4417
1.4078
1.4082
2.8564
2.8412
2.8311
2.8482
2.8044
2.8165
99.5
99.8
99.8
99.7
99.4
99.4
99.6 0.5
取样量（g）
样品含量
（mg）
测量量
（mg）
回收率
（%）
平均值
（%）
RSD（%）
表 1 蒙药四味土木香散中氧化苦参碱加样回收试验结果分析（n = 6）
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
2.8233
2.8033
2.8125
1.2
1.5
1.6
批号 含量（mg/g） RSD（%）
表 2 样品的含量测定结果比较（n = 3）
（下转第 148 页）
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·制剂与技术· 2013 年 5月第 10卷第 15期
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
A
B
C
D
误差
260.913
6.507
214.093
372.203
6.510
2
2
2
2
2
130.457
3.253
107.047
186.102
3.253
40.097
1.000
32.902
57.200
< 0.05
> 0.05
< 0.05
< 0.05
因素 离均差平方和 自由度 方差 F 值 P 值
表 3 方差分析表
注：F0.05（2，2）=19.00，F0.01（2，2）=99.00
煮 ，取煎液按 “2.1.4”项下测定二苯乙烯苷含量 ，分别为
41.32、44.11、39.88 μg/mL。 验证试验结果与正交试验结果
基本吻合，说明工艺稳定可行。
3 讨论
在煎煮过程中，粗粉煎液极其浑浊，分离困难，不论是
家庭煎煮，还是医疗机构代煎都难以解决，从粒度因素的
试验数据看， 小块和粗粉的二苯乙烯苷溶出量比较接近，
故应选择小块粒度为最佳。
从理论上讲，浸泡可以使干瘪的组织细胞膨胀，细胞
间隙变大，利于溶剂的穿透浸提，但试验结果显示是否浸
泡对本实验结果影响不显著，这可能是由于制何首乌质地
坚硬，难以浸透，且因煎煮时间较长，因此相对于其他显著
因素来说影响并不大。
二苯乙烯苷为水溶性成分，较长时间的煎煮利于其溶
解渗出，从试验结果来看二苯乙烯苷的溶出率与煎煮时间
呈正相关，与理论相符。
中药煎煮过程中，药材内外溶质与溶剂的浓度差是有
效成分溶出的推动力，更换新溶剂即多次煎煮是保持最大
浓度差最便利的手段，但多次长时间煎煮也会造成高分子
杂质增多，有效成分被破坏，且会造成时间和能源的浪费，
故在二煎和三煎时选定时间为头煎的一半。
综上所述，最佳工艺条件为 A2B2C3D3，即粒度为小块，
浸泡 30 min，煎煮时间 70 min，煎煮 3 次，第 2 次及第 3 次
的煎煮时间和加水量为第 1 次的一半，合并煎液即可。 本
试验通过正交试验优选出最佳提取工艺稳定、可靠，为何
首乌的水提取工艺提供了试验数据，可为获得高质量的何
首乌水煎剂提供参考。
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（收稿日期：2013-01-09 本文编辑：卫 轲）
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（收稿日期：2013-01-18 本文编辑：卫 轲）
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