全 文 ：汞不得过百万分之二;铜不得过百分之二十。
3.4 　在狼毒的有害元素研究中 ,因狼毒有害元素
的含量较低 ,测定过程易被污染 ,尤其是铅 ,因此对
实验环境和实验材料有较高要求。
3.5 　狼毒作为毒性药材 ,从研究结果分析 ,其毒性
与铅 、砷 、镉 、铜和汞 5种有害元素无关 ,且其生长环
境良好 ,被重金属及有害元素污染程度较轻。
参 考 文 献
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RP-HPLC-ELSD同时测定山茱萸中马钱苷 、
齐墩果酸与熊果酸的含量
胡　荣1, 2 ,陈小虎 3 ,邓　君 1＊ ,谈　锋 2
(1西南大学药学院 ,重庆 400716;2西南大学生命科学学院 ,重庆 400715;3重庆市药品检验所 ,重庆 401121)
　　摘要　目的:建立同时测定山茱萸中马钱苷 、齐墩果酸和熊果酸含量的方法。方法:通过单因素考察试验确定
样品溶液制备方法 , 运用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法(RP-HPLC-ELSD)分析 , 采用含等量醋酸(0.05%)
的甲醇-水梯度洗脱 , 对所用含量测定方法进行方法学考察。结果:马钱苷 、齐墩果酸和熊果酸测定的线性关系良
好 , 加样回收率均在 95% ～ 100%之间 , 重现性好。结论:该方法简便 、快速 、准确 、重现性好 , 可作为山茱萸药材质
量控制的常规含量测定方法。
　　关键词　高效液相色谱-蒸发光散射检测;山茱萸;马钱苷;齐墩果酸;熊果酸
　　中图分类号:R284.1　　文献标志码:A　　文章编号:1001-4454(2010)02-0070-03
收稿日期:2009-03-25作者简介:胡荣(1982-), 女 ,硕士研究生 , 研究方向:药用植物生物技术与生化工程;Tel:13752959623, E-mail:hur@swu.edu.cn。＊通讯作者:邓君 , Tel:13637701279, E-mail:dengjcq@163.com。
　　山茱萸是常用补益保健药 ,临床用于眩晕耳鸣 、
肝虚寒热 、内热消渴 、腰膝酸痛 、阳痿遗精 、尿遗尿
频 、崩漏带下 、大汗虚脱等症。现代药理研究表明 ,
山茱萸具有调节免疫 、抗菌消炎 、降血糖 、保肝 、抗
癌 、抗休克 、强心等作用 〔1-7〕。山茱萸中的活性成分
包括马钱苷等环烯醚萜苷类和齐墩果酸 、熊果酸等
有机酸类 ,分别表现出不同的生理活性。中国药典
2000年版对山茱萸的质量控制是测定熊果酸的含
量 , 2005年版改指标性成分为马钱苷 。笔者认为同
时测定马钱苷 、齐墩果酸和熊果酸的含量对评价山
茱萸药材的质量更合理。而至今文献报道的山茱萸
中该 3种成分的含量测定是分别制样 、分别测定 ,操
作繁琐 。本实验通过摸索新的制样条件 、采用梯度
洗脱 ,实现了一次制样 、同时测定 3种物质含量的目
的 。
1 　仪器与试药
　　Waters1525型高效液相色谱仪 (美国 );Wa-
ters2420型蒸发光散射检测器(美国);电热恒温水
浴锅 (北京市长风仪器仪表公司);电子分析天平
(SatoriusBS124S, 0.1mg, 德国;METTLERTOLEDO
AB135-S, 0.01 mg);微孔滤膜(希波式 , 0.22μm)
　　马钱苷 、齐墩果酸 、熊果酸对照品 (批号:
111640-200503, 110709-200304 , 110742-200313)购
自中国药品生物制品检定所;甲醇(色谱纯 ,天津科
密欧化学试剂有限公司);水(娃哈哈纯净水),其余
试剂均为分析纯 ,高纯氮气。实验用山茱萸药材为
购自六省市的市售药材 ,经西南大学药学院邓君博
士鉴定为山茱萸科植物山茱萸 Cornusoficinalis
Sieb.etZucc的干燥成熟果肉 ,样品来源见表 2。
2　方法与结果
2.1　液相色谱条件和 ELSD参数
2.1.1 　色谱条件:色谱柱为 LichrospherC18柱(250
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mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为 0.05%醋酸甲醇溶
液(A)-0.05%冰醋酸水溶液(B),梯度洗脱的程序
为 0 min(40%A)※ 10 min(40%A)※ 11 min
(92.5%A)※45min(92.5%A)※46 min(40%A),
流速 0.8 mL/min,柱温为 27 ℃。
2.1.2　ELSD参数:漂移管温度 90 ℃;雾化气体
N2 ,压力 172 375 Pa;光电倍增管电压 70 V。
2.2 　对照品溶液的制备　精密称取马钱苷 、齐墩
果酸 、熊果酸对照品 10.07、 10.26、 10.14 mg,置于
10mL容量瓶中 ,用甲醇溶解并定容 ,作为对照品贮
备液;取对照品贮备液 1 mL,用甲醇稀释至 10 mL,
作为对照品溶液 A;取对照品溶液 A1 mL,用甲醇
稀释至 10 mL,作为对照品溶液 B。
2.3　样品溶液制备　取过 80目筛的山茱萸样品
粉末 1 g,精密称定 ,置于 100 mL具塞锥形瓶中 ,加
入 30 mL甲醇 ,称重 ,超声 1 h,取出 ,用甲醇补足原
重 ,摇匀 , 0.22 μm微孔滤膜过滤 ,弃初滤液 ,取续滤
液 10 μL进样。色谱图见图 1。
图 1　对照品(A)与山茱萸样品(B)的 HPLC图谱
1.马钱苷　2.齐墩果酸　3.熊果酸
2.4 　线性关系考察　精密吸取对照品溶液 B5、
10、15、20 μL,对照品溶液 A5、10、13、15、20 μL,对
照品贮备液 3、5、10 μL进样 ,按 “2.1”项下条件测
定 ,记录各对照品峰面积。以峰面积(A)为因变量 ,
以进样量(X)为自变量 ,求线性方程 ,分别为:马钱
苷:A1 =15281684.367X1 +877852.191, r1 =0.9999,
线性范围:0.1511 ～ 2.0140 μg;齐墩果酸:A2 =
25709818.915X2 -3298461.597 , r2 =0.9999,线性范
围: 0.2052 ～ 1.3338 μg;熊 果 酸:A3 =
26313989.078X3 -3595768.565 , r3 =0.9999,线性范
围:0.2028 ～ 1.3182μg。
2.5 　样品溶液制备方法考察　通过对提取溶剂 、
提取方式和时间 、样品溶液制备的料液比 、超声提
取为提取温度的考察最终确定样品溶液制备方
法为:甲醇为提取溶剂 , 料液比 1∶30 , 60 ℃超声
45 min。
2.6 　精密度试验　精确吸取马钱苷 、齐墩果酸 、熊
果酸对照品溶液 A3、7、12 μL和一份样品溶液 10
μL,分别进样 3次 ,测定各成分的峰面积 ,分别计算
RSD。结果对照品在低 、中 、高进样量时 , RSD值分
别为 0.56%、 0.73%、 0.18%, 样品的 RSD值为
0.89%,表明仪器及进样精密度良好 。
2.7　稳定性试验　取上述山茱萸药材样品溶液一
份 ,每隔 3 h进一针样 ,进 5针 ,每次进样 10 μL,分
别测定 3种成分的峰面积 ,计算 RSD。同一个样品
溶液 4℃冷藏 ,每天进样 1次 ,每次进样 10μL,测定
各峰面积 ,计算 RSD。马钱苷 、齐墩果酸和熊果酸
在天内的 RSD值分别为 0.11%、0.54%、0.72%,天
间的 RSD值分别为 0.16%、0.88%、0.74%。实验
结果表明 ,样品溶液在 5 d内稳定。
2.8　重现性试验　按拟定的马钱苷 、齐墩果酸和
熊果酸含量测定方法 ,用相同山茱萸药材粉末制备
样品溶液 5份 。测定马钱苷 、齐墩果酸和熊果酸的
RSD值分别为 0.43%、0.87%、 0.29%。表明该含
量测定方法重现性优良 。
2.9　加样回收率试验　精密称取药品粉末 0.2 g
左右 ,按照样品中所含马钱苷 、齐墩果酸和熊果酸的
量的 80%、100%、120%加入各对照品 ,按上述含量
测定方法测定各样品中所含 3种成分的含量 ,计算
加样回收率及 RSD值 ,结果见表 1。
　　表 1　 加样回收率测定结果(n=3)
加样量与样品所含成分量之比
马钱苷
加样回收率 /% RSD/%
齐墩果酸
加样回收率 /% RSD/%
熊果酸
加样回收率 /% RSD/%
80% 98.20±0.56 0.56 96.12±0.87 0.87 96.08±0.75 0.75
100% 98.71±1.23 1.23 95.52±0.60 0.60 96.52±1.31 1.31
120% 98.90±0.74 0.74 96.26±1.09 1.09 96.27±0.61 0.61
平均值 98.60±0.84 95.97±0.85 96.29±0.89
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　　表 1中数据显示 ,该 3种成分的加样回收率均
在 95% ～ 100%之间 ,表明该含量测定方法对于 3
种成分的准确度均较高。
2.10　　样品测定　按拟定的含量测定方法测定
购自 6个省市的山茱萸药材的马钱苷 、齐墩果酸和
熊果酸含量 ,结果见表 2。
　表 2　 样品测定结果(n=3)
地区 含量 /(mg/g)马钱苷 齐墩果酸 熊果酸
河南南阳 10.073±0.196 1.220±0.005 3.346±0.044
陕西汉中 6.131±0.016 1.214±0.012 3.586±0.050
浙江临海 8.418±0.099 1.391±0.008 3.978±0.044
安徽合肥 10.537±0.154 1.264±0.003 3.528±0.050
山东济南 9.006±0.079 1.087±0.009 2.983±0.020
重庆北碚 6.925±0.030 1.274±0.009 3.563±0.010
3 　讨论
　　本文利用 HPLC法同时测定山茱萸药材中的马
钱苷 、齐墩果酸和熊果酸的含量为首次报道。
　　马钱苷属于环烯醚萜苷 ,齐墩果酸和熊果酸属
于有机酸 ,两者分子极性差异很大 ,要同时测定 ,需
选择一种对 3种成分提取效果均较好的提取溶剂来
制备样品溶液 ,本实验经过比较甲醇 、80%甲醇水溶
液 、乙酸乙酯 、乙醚对 3种成分提取效果 ,结果表明
甲醇对 3种成分提取效果均较好 ,可以作为同时测
定 3种成分含量的提取溶剂。此外 ,本文还考察了
不同提取方式(超声 、加热回流 、索氏提取)处理不
同时间以及不同料液比(1∶20、1∶30、1∶40)和不同
超声提取的温度(50、60、70 ℃)对 3种成分提取效
果 ,通过单因素方差分析 ,确定用料液比 1∶30 , 60℃
超声 45 min。
　　分析时 ,为避免分析时间过长 ,本文采用梯度洗
脱;齐墩果酸和熊果酸属于同分异构体 ,为了使两者
有较好的分离效果 ,所用色谱洗脱剂为含醋酸的混
合洗脱剂 ,而醋酸在 250 nm以下有末端吸收 ,所以
如果用 UV检测 ,要求检测波长必须在 250 nm以
上 ,测定结果才不受溶剂影响 。而马钱苷 、齐墩果酸
和熊果酸对 250 nm以上的波长均无吸收 , 不能用
UV-Vis检测器检测 。故本文选用 ELSD———蒸发光
散射检测器检测。 ELSD近乎一种通用检测器 ,对
非挥发性成分均适用 ,而且 ELSD几乎不受洗脱溶
剂的影响 ,故在梯度洗脱全程 ,色谱基线稳定 。
　　方法学考察结果显示 ,本文所用的含量测定方
法线性关系良好 , 精密度和准确度较高 ,重复性较
好 ,而且简便 、快速 ,故该方法适用于山茱萸质量控
制的常规含量测定 。
　　对购自国内不同省市的山茱萸样品进行含量测
定 ,结果显示 ,马钱苷的含量差异较大 ,而齐墩果酸
和熊果酸含量均较接近 。
参 考 文 献
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《中药材 》杂志为国家首批公布的可登处方药广告的专业媒体 。
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