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不同加工工艺对三叶青抗炎作用影响的比较研究



全 文 :书不同加工工艺对三叶青抗炎作用影响的比较研究*
严余明1 王忆黎2△ 童晔玲2 戴关海2 杨 锋2
( 1浙江中医药大学·杭州 310053 2浙江省中医药研究院·杭州 310007)
摘 要 目的: 观察不同工艺加工的三叶青的抗炎作用。方法: 三叶青采用传统的水煎、饮片打粉与冻干
粉三种不同工艺加工制成供试品,分别进行二甲苯小鼠耳廓肿胀、小鼠毛细血管通透性、角叉菜胶大鼠足
跖肿胀抗炎实验。结果: 三叶青冻干粉中、高剂量及饮片粉高剂量对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显的
抑制作用( P < 0. 05) ;三种工艺三叶青对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增强均有一定的抑制作用,
其中高剂量三叶青冻干粉抑制作用最为明显; 致炎后 1 小时,三叶青冻干粉中、高剂量对角叉菜胶致大鼠
足肿胀均有明显的抑制作用,; 致炎后 4 小时三叶青冻干粉中、高剂量和三叶青水煎剂高剂量、三叶青饮
片粉高剂量均有明显的抑制作用,致炎后 6 小时,三叶青冻干粉中、高剂量均有明显的抑制作用。结论:
三叶青冻干粉的抗炎作用明显优于水煎剂与饮片粉。
主题词 炎症 /中医药疗法 三叶青水煎剂 /治疗应用 三叶青饮片粉 /治疗应用 三叶青冻干粉 /治疗
应用 比较研究
* 浙江省科技计划项目 No. 2011C23038
△ 通讯作者
三叶青又名金线吊葫芦,为葡萄科植物三叶爬藤(Tet-
rastigma hemsleyanum Diels et Gilg)的干燥块根,主要含黄酮
类如槲皮素及三萜类化合物蒲公英萜醇等化学成份,具有清
热解毒、祛风化痰、活血止痛之功效,用于治疗高热惊厥、肺
炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调等。本研究对传统的水煎工
艺、饮片打粉工艺与冻干粉新工艺进行了抗炎作用的药效比
较研究,现将结果报告如下。
1 实验材料
1. 1 实验动物 ICR小鼠,体重 18 ~ 22g,由上海斯莱克实
验动物中心提供,雌性 110 只,动物合格证号:2008 -
001619934;雄性 110 只,动物合格证号:2008 - 001620192。
SD大鼠,体重 170 ~ 200g,雌性 110 只,动物合格证号:2008
- 001624785。
1. 2 实验药品 吲哚美辛肠溶片:山西云鹏制药有限公司
提供,25mg /片 × 100 片,批号:A110103。强的松:浙江仙居
制药股份有限公司提供,5mg /片,批号:110845。
三叶青冻干粉:1kg粉相当于 6. 5kg鲜药材,由杭州天惠
医药科技有限公司提供。三叶青饮片粉:1kg 粉相当于
4. 5kg鲜药材,将三叶青饮片打粉,200 目过筛备用。三叶青
水煎液:取饮片 400g水浸 5 小时(3200ml)后煎煮 1 小时,共
2 次,合并 2 次煎液,浓缩至 1000ml,使成 0. 4g 生药 /ml 浓
度,冰箱保存备用。
1. 3 实验试剂 二甲苯:成都市科龙化工试剂厂;伊文思
蓝:瑞士 Fluka公司;角叉菜胶:Sigma公司。
2 实验方法与结果
2. 1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用 取雌性 ICR小
鼠 110 只,随机均分为 11 组,即空白对照组(水,30ml /kg)、
吲哚美辛对照组(15mg /kg)、三叶青水煎液高剂量组
(10. 32g /kg,相当于新鲜药材 46. 44g /kg)、水煎液中剂量组
(5. 16g /kg,相当于新鲜药材 23. 22g /kg)、水煎液低剂量组
(2. 58g /kg,相当于新鲜药材 11. 61g /kg)、三叶青粉高剂量组
(10. 32g /kg,相当于新鲜药材 46. 44g /kg)、三叶青粉中剂量
组(5. 16g /kg,相当于新鲜药材 23. 22g /kg)、三叶青粉低剂量
组(2. 58g /kg,相当于新鲜药材 11. 61g /kg)、三叶青冻干粉高
剂量组(7. 16g /kg,相当于新鲜药材 46. 44g /kg)、冻干粉中剂
量组(3. 58g /kg,相当于新鲜药材 23. 22g /kg)、三叶青冻干粉
低剂量组(1. 79g /kg,相当于新鲜药材 11. 61g /kg)。各组动
物连续给予相应受试物 3 天,末次给药后 30 分钟,小鼠右耳
廓内外用二甲苯均匀涂抹(用量 0. 1ml)以引起炎症反应。
致炎后 1 小时将小鼠脱颈椎处死,将右、左耳廓剪下,制成圆
耳片(直径 9mm) ,分析天平称重,每只动物右、左耳片重量
差即反映炎症肿胀程度。多组间均数比较采用方差分析,所
有数据用(珋x ± s)表示,均由 SPSS 17. 0 统计软件进行处理
(下同)。结果见表 1。
表 1 不同工艺三叶青对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(x ± s)
组别 剂量(/kg) n 两耳差值(mg) 抑制率(%)
空白 — 10 8. 97 ± 2. 39 —
吲哚美辛 15mg 10 5. 82 ± 1. 51* 35. 1
水煎剂 2. 58g 10 8. 05 ± 3. 48 10. 3
水煎剂 5. 16g 10 8. 43 ± 2. 73 6. 0
水煎剂 10. 32g 10 8. 56 ± 2. 40 4. 6
饮片粉 2. 58g 10 8. 20 ± 2. 68 8. 6
饮片粉 5. 16g 10 7. 09 ± 2. 68 21. 0
饮片粉 10. 32g 10 5. 97 ± 2. 97* 33. 4
冻干粉 1. 79g 10 8. 08 ± 1. 66 9. 9
冻干粉 3. 58g 10 6. 10 ± 2. 62* 32. 0
冻干粉 7. 16g 10 5. 93 ± 2. 65* 33. 9
与空白照组比较* P < 0. 05
由表 1 可见,三叶青水煎剂对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀
抑制率为 4. 6% ~ 10. 3%,饮片粉对二甲苯所致小鼠耳廓肿
·173·中国中医药科技 2013 年 7 月第 20 卷第 4 期 July 2013 Vol. 20 No. 4
书胀抑制率为 8. 6% ~ 33. 4%,三叶青冻干粉对二甲苯所致小
鼠耳廓肿胀抑制率为 9. 9% ~ 33. 9%。三叶青冻干粉中、高
剂量及饮片粉高剂量对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有明显的
抑制作用,与空白对照组比较差异显著(P < 0. 05) ,说明三
叶青冻干粉和饮片粉均有明显的抗炎作用,而三叶青冻干粉
中剂量组的抗炎作用明显(P < 0. 05) ,表明冻干粉的作用优
于饮片粉。
2. 2 对小鼠毛细血管通透性的影响 取雄性 ICR 小鼠 110
只,随机均分为 11 组,分组同上。各组动物连续给相应受试
物 3 天,末次给药后 30 分钟,小鼠尾静脉注射 0. 5%依文思
蓝 0. 1ml /kg,并立即腹腔注射 0. 6%醋酸 0. 2ml /只,30 分钟
后将小鼠脱颈椎处死,剪开腹腔,用 5ml 生理盐水冲洗腹腔
2 次,合并冲洗液,离心 3000r /min × 10 分钟。取上清液于
721 分光光度计 590nm处比色,测定其 OD 值。比较各组差
异。见表 2。
2. 3 对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制作用 取雌性 SD
大鼠 110 只,体重 170 ~ 200g,随机分为 11 组,即空白对照组
(水,30ml /kg)、强的松组(5. 4mg /kg)、三叶青水煎高剂量组
(7. 2g /kg,相当于新鲜药材 32. 4g /kg)、三叶青水煎液中剂量
组(3. 6g /kg,相当于新鲜药材 16. 2g /kg)、三叶青水煎液低剂
量组(1. 8g /kg,相当于新鲜药材 8. 1g /kg)、三叶青饮片粉高
剂量组(7. 2g /kg,相当于新鲜药材 32. 4g /kg)、三叶青饮片粉
中剂量组(3. 6g /kg,相当于新鲜药材 16. 2g /kg)、三叶青饮片
粉低剂量组(1. 8g /kg,相当于新鲜药材 8. 1g /kg)、三叶青冻
干粉高剂量组(5. 0g /kg,相当于新鲜药材 32. 4g /kg)、三叶青
冻干粉中剂量组(2. 5g /kg,相当于新鲜药材 16. 2g /kg)、三叶
青冻干粉低剂量组(1. 25g /kg,相当于新鲜药材 8. 1g /kg)。
各组大鼠连续给相应受试物 5 天,于注射前先测定大鼠右后
足跖的厚度,末次给药后 1 小时,给各组大鼠右后足跖皮下
注射 1%角叉菜胶 0. 1ml致炎,分别测量致炎后 1、2、4、6、24
小时右后足跖的厚度。见表 3。
表 2 不同工艺三叶青对小鼠毛细血管通透性的影响(x ± s)
组别 剂量(/kg) n 吸光度值(590nm)抑制率(%)
空白 — 10 0. 432 ± 0. 148 —
吲哚美辛 15mg 10 0. 280 ± 0. 067* 35. 2
水煎剂 2. 58g 10 0. 392 ± 0. 187 9. 3
水煎剂 5. 16g 10 0. 375 ± 0. 095 13. 2
水煎剂 10. 32g 10 0. 401 ± 0. 140 7. 2
饮片粉 2. 58g 10 0. 376 ± 0. 116 13. 0
饮片粉 5. 16g 10 0. 354 ± 0. 171 18. 1
饮片粉 10. 32g 10 0. 353 ± 0. 130 18. 3
冻干粉 1. 79g 10 0. 365 ± 0. 072 15. 5
冻干粉 3. 58g 10 0. 355 ± 0. 149 17. 8
冻干粉 7. 16g 10 0. 288 ± 0. 076* 33. 3
与空白组比较* P < 0. 05
表 3 不同工艺三叶青对角叉菜胶致炎大鼠足跖厚度的影响(x ± s)
组别 剂量(/kg) n
基础值
(mm)
致炎后不同时段足跖厚度(mm)
1h 2h 4h 6h 24h
空白 — 10 3. 25 ± 0. 15 5. 39 ± 0. 27 5. 80 ± 0. 29 5. 96 ± 0. 21 5. 23 ± 0. 31 4. 14 ± 0. 34
强的松 5. 4mg 10 3. 20 ± 0. 07 4. 82 ± 0. 20* 5. 51 ± 0. 25* 5. 53 ± 0. 31* 4. 85 ± 0. 20* 3. 87 ± 0. 33
水煎剂 1. 8g 10 3. 20 ± 0. 07 5. 35 ± 0. 33 5. 85 ± 0. 24 5. 92 ± 0. 29 5. 25 ± 0. 26 4. 11 ± 0. 27
水煎剂 3. 6g 10 3. 24 ± 0. 10 5. 33 ± 0. 35 5. 82 ± 0. 22 5. 86 ± 0. 21 5. 18 ± 0. 45 3. 95 ± 0. 37
水煎剂 7. 2g 10 3. 23 ± 0. 24 5. 31 ± 0. 29 5. 77 ± 0. 24 5. 63 ± 0. 27* 5. 01 ± 0. 22 3. 88 ± 0. 24
饮片粉 1. 8g 10 3. 22 ± 0. 06 5. 32 ± 0. 24 5. 87 ± 0. 25 5. 97 ± 0. 18 5. 23 ± 0. 32 4. 19 ± 0. 20
饮片粉 3. 6g 10 3. 19 ± 0. 04 5. 28 ± 0. 23 5. 81 ± 0. 25 5. 93 ± 0. 28 5. 22 ± 0. 27 4. 10 ± 0. 33
饮片粉 7. 2g 10 3. 18 ± 0. 03 5. 25 ± 0. 30 5. 79 ± 0. 17 5. 70 ± 0. 30* 5. 13 ± 0. 21 4. 02 ± 0. 31
冻干粉 1. 25g 10 3. 18 ± 0. 12 5. 24 ± 0. 23 5. 88 ± 0. 24 5. 86 ± 0. 33 5. 13 ± 0. 25 4. 12 ± 0. 33
冻干粉 2. 5g 10 3. 21 ± 0. 08 4. 99 ± 0. 34* 5. 78 ± 0. 37 5. 67 ± 0. 26* 4. 68 ± 0. 34* 4. 06 ± 0. 25
冻干粉 5. 0g 10 3. 17 ± 0. 21 4. 87 ± 0. 24* 5. 72 ± 0. 26 5. 66 ± 0. 30* 4. 63 ± 0. 29* 3. 91 ± 0. 23
与空白组比较* P < 0. 05
3 讨论
现代药理实验已证实,三叶青具有良好的抗炎和抗肿瘤
作用。如杨学楼等报道中药三叶青在小鼠体内和鸡胚成纤
维细胞上均有不同程度的抗病毒作用[1]。黄真等报道三叶
青提取物具有抗炎、镇痛及解热作用[2],能明显抑制小鼠腹
腔毛细血管炎性渗出,抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及蛋清
致大鼠足跖肿胀,减少醋酸致小鼠扭体次数,提高热板法小
鼠痛阈值,并降低干酵母和 2,4 -二硝基苯酚致大鼠发热模
型的体温。钟晓明等探讨三叶青提取物对烫伤大鼠肠道局
部和全身免疫功能的影响,结果表明,三叶青提取物对烫伤
引起的肠道局部和全身免疫功能紊乱有纠正作用[3]。杨雄
志等研究证实三叶青提取物对乙肝病毒具有较强的抑制作
用,能明显降低 HBV 的 DNA 复制水平,具有较强的抑制作
用[4]。徐彩菊等研究结果表明三叶青提取物能提高 ConA
诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖能力、溶血空斑数、小鼠碳廓
清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数,具有增强
小鼠免疫力的作用[5]。李华美等研究证实三叶青乙酸乙酯
提取物具有抗肿瘤及免疫增强作用[6]。
本文实验结果表明,三叶青冻干粉和饮片粉高剂量对二
甲苯所致小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶致大鼠足跖肿胀均有明
显的抑制作用(P < 0. 05) ,而水煎剂高剂量仅对大鼠足跖肿
胀有明显的抑制作用(P < 0. 05) ;实验结果还表明,饮片粉
和水煎剂仅高剂量在致炎后 4 小时对角叉莱足肿胀大鼠产
生明显的抗炎作用,而冻干粉高、中剂量均产生明显的抗炎
作用,并且在致炎后 1、4、6 小时均具有明显的抗炎作用。说
明冻干粉在抗炎作用持续时间和作用剂量均明显优于水煎
·273· 中国中医药科技 2013 年 7 月第 20 卷第 4 期 July 2013 Vol. 20 No. 4
书剂和饮片粉。
这可能与水煎剂和饮片粉在加工工艺中采用较高温度,
从而使有效成份活性失活,及传统药材的有效部位被机体吸
收相对较少等因素有关。不同加工工艺对三叶青其它药理
作用的影响有待进一步研究。
参考文献
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湖北中医杂志,1989,11(4) :40.
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用的实验研究 . 中国新药杂志,2005,14(7) :861.
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部和全身免疫功能的影响 . 中药材,2006,29(9) :953.
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中医药大学学报,2009,25(4) :294.
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Lewis肺癌移植性肿瘤的抑制作用及免疫功能的影响 . 中国
中医药科技,2012,19(3) :229.
( 收稿: 2013 - 02 - 19

)
高脂血症患者中医体质分布规律探析*
万生芳 ( 甘肃中医学院·兰州 730000)
* 甘肃省技术研究与开发专项计划 No. 0912TCYA034
1 调查对象 选择甘肃中医学院附属医院健康体检中心 2010 - 04
~ 2011 - 07 参加体检的甘肃省两所普通高等院校的 879 名教师。
其中甘肃中医学院 24 ~ 50 岁男教师 179 名,平均年龄(38. 25 ± 6. 6)
岁,兰州城市学院 24 ~ 52 岁男教师 175 名,平均年龄(39. 05 ± 6. 5)
岁,两校男教师之间平均年龄无差异(P > 0. 05) ;甘肃中医学院 26 ~
55 岁女教师 238 人,平均年龄(36. 96 ± 7. 5)岁,兰州城市学院 24 ~
55 岁女教师 287 人,平均年龄(37. 81 ± 8. 0)岁,两校女教师之间平
均年龄无差异(P > 0. 05)。
2 方法
2. 1 高脂血症诊断标准及纳入标准 参照 1997 年全国“血脂异常
防治建议”中高脂血症的诊断标准,均为单纯患高脂血症而未合并
其它疾病的患者。
2. 2 中医体质辨识 参加体检人员自愿填写中医体质辨识表,由治
未病中心专家结合中医四诊资料,参照文献[1]对调查对象进行中医
体质辨识。
3 结果
3. 1 高脂血症发病情况 两所高校共检出高脂血症患者 184 人,占
调查总人群 20. 93%。女教师高脂血症发生率为 13. 33%,男教师高
脂血症发生率为 32. 20%。
3. 2 中医体质辨识结果 见表 1。
表 1 总人群与高脂血症人群体质辨识结果〔n(%)〕
组别 全体女教师 全体男教师 总人群 高脂血症人群
(n =525) (n =354) (n =879) (n =184)
平和质 152(28. 95) 125(35. 31) 277(31. 51) 15(8. 15)△△
痰湿质 67(12. 76) 75(21. 19)△ 143(16. 26) 68(36. 96)△△
阴虚质 62(11. 81) 46(12. 99) 108(12. 29) 7(3. 80)△
阳虚质 85(16. 19)△△ 14(3. 09)△△ 99(11. 26) 15(8. 15)
气虚质 68(12. 95) 32(9. 04) 100(11. 38) 26(14. 13)
湿热质 23(4. 38) 32(9. 04) 55(6. 26) 40(21. 74)△△
气郁质 47(8. 95) 14(3. 09)△ 61(6. 94) 10(5. 43)
瘀血质 16(3. 05) 14(3. 09) 30(3. 41) 3(1. 63)
特禀质 4(0. 76) 2(0. 56) 6(0. 68) 0(0. 00)
与总人群比较△P <0. 05,△△P <0. 01
4 讨论 随着社会的进步与发展,人民生活水平逐步提高,人类的
饮食结构和生活习惯等发生了相应的变化,由此带来的高脂血症则
成为当今社会常见病、多发病之一。高脂血症是多种因素综合作用
下形成的慢性病,是一种全身性疾病,其最重要的损害是加速全身动
脉粥样硬化,从而引发许多心脑血管疾病:如动脉硬化、高血压、冠心
病、心肌梗死、中风等;还可导致脂肪肝、肾病等其他器官病变。
中医学认为,人的体质是由先天禀赋与后天因素共同形成,体质
往往决定了个体对某种致病因素的易感性。许多相关疾病发生的
“共同土壤”在于其体质基础,因此体质因素关系到人体是否发病、
发病倾向和既病之后疾病的发展、变化和转归。对高脂血症人群进
行中医体质辨识和分类,可以有效地指导中医药对高脂血症的防治,
根据该人群体质规律给予有效的防治措施,以减少各种并发症的产
生,提高该类人群的生活质量。
课题组前期调查工作表明,高校教师尤其是男性教师身体健康
状况不佳,高校教师总人群体质分布特点以平和体质为主[2 - 3]。本
次调查结果中,高校教师人群中高脂血症比例为 20. 93%,女性教师
高脂血症比例为 13. 33%,男性教师高脂血症比例为 32. 20%,男性
教师高脂血症的比例显著高于女性教师。高校教师总人群中平和体
质比例为 31. 51%,高脂血症人群中平和体质比例为 8. 15%,该比例
显著低于总人群。高脂血症人群中居于前 4 位的体质类型分别是:
痰湿质、湿热质、气虚质、阳虚质。
以上结果可能与高校教师工作、学习、生活压力大,长期情志不
畅,加之缺乏体育锻炼、饮食结构不合理等有关,男性教师还与平时
应酬多、有吸烟、饮酒嗜好,摄食过多高脂、高能量食物等有关,多种
因素共同作用导致高校教师高脂血症发病率高,患者体内痰湿聚集,
酿生湿热,因此该类人群中痰湿体质、湿热体质居多。要想从根本上
降低高校教师高脂血症的发生率,就要对这一人群体质分布规律进
行更深层次的研究,从中医体质特点入手,通过中医治未病方式,有
针对性地进行健康教育、指导养生保健,多种治疗措施(膳食疗法、
经络疗法、运动疗法、情绪疗法等)多管齐下,充分发挥中医治未病
优势,提高高校教师人群中高脂血症患者的生活质量,为建设和谐校
园作出应有的贡献。
参考文献
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[2] 万生芳,张小荣.甘肃 2 所高校教师健康状况调查与分析. 西
部中医药,2011,24(9) :40.
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析.中医研究,2011,24(12) :17. ( 收稿: 2012 - 04 - 27)
·373·中国中医药科技 2013 年 7 月第 20 卷第 4 期 July 2013 Vol. 20 No. 4