全 文 ：实 验 研 究
辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠抑瘤作用
的实验研究
尹丽颖，边晓燕，肖洪彬
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:研究辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠抑瘤作用的效果，初步探讨其体内抑瘤作用机制。方
法:采用小鼠 H22肝癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验，测定肿瘤生长抑制率，利用光镜、电镜等方法
进行形态学观察，是否产生凋亡小体。结果:辽东楤木叶总皂苷对小鼠的 H22实体瘤生长具有明显的抑
制作用，形态学观察显示，治疗组与对照组比较，肿瘤团块较小，异型性不明显，病理性核分裂和间质血
管较少，淋巴细胞浸润明显。电镜下可见凋亡小体形成，其中以总皂苷组最明显。结论:辽东楤木叶总
皂苷对荷瘤小鼠具有较强的体内抗肿瘤作用，作用机制可能与其能够抑制肿瘤细胞分裂、增殖及能够诱
导肿瘤细胞凋亡有关。
关键词:辽东楤木叶;H22肝癌细胞实体瘤;光镜;电镜
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2010)03 － 0107 － 03
The Study of the Anti － tumor Effect of the Total Saponine of Aralia
Elata Seem Leaves in the Rats with H22
YIN Li － ying，BIAN Xiao － yan，XIAO Hong － bin
(Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
Abstract:Objeetive:To study the anti － tumor effect of the total saponine of Aralia Elata Seem Leaves in the
rats and to explore the anti － tumor mechanism in vivo. Methods:H22 hepatoma carcinoma cell (HCC)tumor
model was established on rats in order to carry on anti － tumor experiment. The suppression ratio of the tumor
growth was determined. The morphologic and apoptotic body were observed by light microscope and electron
microscope. Results:The growth of H22 tumor could be inhibited obviously by the total saponine of Aralia Ela-
ta Seem Leaves. To compare with the control group，in the treatment group the tumor were smaller;the atypia
was not obvious;pathologic nuclear division and interstitial vessel were less and lymphocyte infiltration was
distinct. The forming of apoptotic body could be seen under the electron microscope. And the total saponine
group was the most obvious. Conclusion:The anti － tumor effect of the total saponine of Aralia Elata Seem
Leaves in the rats was strong. And the mechanism may have relationship with which inhibit the fission and pro-
liferation of tumor cell or induce the apoptosis of tumor cell.
Key words:Aralia Elata Seem Leaves;H22 hepatoma carcinoma cell (HCC)tumor;light microscope;electron
microscope
基金项目:国家自然科学基金(30772779);科技部国际科技合作项目
(2007DFA30930);黑龙江中医药大学基金资助项目(99322)
作者简介:尹丽颖(1979 －)，女，助理研究员，主要从事透射电子显微技
术工作。
通讯作者:肖洪彬(1957 －)，男，教授，博士研究生导师，主要研究方向:
中药有效成分的研究。
收稿日期:2009 － 11 － 25
修回日期:2010 － 01 － 15
中药辽东楤木系五加科楤木属植物，具有补气安
神、强精补肾、祛风活血、除湿止痛之功效。其化学成
分以皂苷类为主，总皂苷成分具有抗变态反应、保肝、
降血脂、耐缺氧等多种药理活性［1，2］。本课题组在前
期研究中发现，辽东楤木叶的总苷成分还具有较强的
抗肿瘤作用［3，4］。因此，采用 H22荷瘤小鼠为研究对
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象，从形态学角度进一步研究辽东楤木叶总皂苷对抑
制癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用，并阐明其作用机
理。
1 材料与方法
1. 1 动物与瘤株
清洁级昆明种小鼠 30 只，体重(20 ± 2)g，由黑龙
江中医药大学实验动物中心提供，雌雄各半;H22腹水
型小鼠肝癌细胞由哈尔滨医科大学肿瘤研究所提供。
1. 2 药物与试剂
辽东楤木叶总皂苷(ETS)由黑龙江中医药大学中
药化学教研室提供;环磷酰胺(CTX)由江苏恒瑞制药
厂生产，批号 06111521。
1. 3 仪器
荷兰 TECNAIG2 型透射电子显微镜;德国莱卡超
薄切片机;OLYMPUS(COVER －018 型)生物显微镜。
1. 4 动物造模与分组
取体重(20 ± 2)g昆明种小鼠 30 只，雌雄各半，无
菌条件下取第 8d 转移癌 H22腹水(计活细胞大于
95%)，用 0. 9%生理盐水 1∶ 3 稀释后，每只鼠右侧腋
部皮下注射 0. 2mL瘤细胞悬液，然后将荷瘤鼠随机分
为三组即模型组、ETS组、CTX组，每组 10 只。
1. 5 给药方法与剂量
模型组:生理盐水灌胃 20mL·(kg·d)－ 1，腹部
皮下注射生理盐水 10mL·(kg·d)－ 1。
ETS组:ETS灌胃 100mg·(kg·d)－ 1，腹部皮下
注射生理盐水 10mL·(kg·d)－ 1。
CTX组:生理盐水灌胃 20mL·(kg·d)－ 1，腹部
皮下注射 CTX 30mg·(kg·d)－ 1。
以上各组均在实验第 2d 开始用药，每日 1 次，连
续 10d，禁食 12h后处死小鼠，剥离瘤组织。
1. 6 取材
小鼠断颈处死后，剥离肿瘤组织，剔净周围的结缔
组织，称重后迅速分别放入 4%多聚甲醛和 3%戊二醛
固定液中固定。
光镜样品制备:常规石蜡包埋，切片，二甲苯脱蜡，
HE染色，待光镜观察。
电镜样品制备:戊二醛前固定，PBS 缓冲液冲洗，
1%锇酸后固定，PBS 缓冲液冲洗，乙醇、丙酮梯度脱
水，环氧树脂 812 浸透、包埋、聚合，半薄切片定位，超
薄切片，醋酸双氧铀、枸橼酸铅双重染色，待透射电镜
观察。
1. 7 观察指标
瘤体取出后依次称重，计算抑瘤率，抑瘤率 =(对
照组平均瘤重 －治疗组平均瘤重)∕对照组平均瘤重
× 100%。肿瘤组织的病理形态学及细胞超微结构
观察。
1. 8 统计学处理
应用 SPSS 14. 0 软件进行统计学处理，两组间比
较用 t检验，结果以(珋x ± s)表示。
2 结果
2. 1 小鼠瘤质量和抑瘤率 结果见表 1。
表 1 对 H22荷瘤小鼠体内肿瘤生长的抑制情况(珋x ± s)
分组 n 平均瘤重(g) 抑瘤率(%)
模型组 10 0. 94 ± 0. 36
ETS 组 10 0. 43 ± 0. 12 54. 3
CTX 组 10 0. 24 ± 0. 09 74. 5
注:与模型组比较，* P < 0. 05，P < 0. 01。
2. 2 肿瘤病理形态学观察
模型组:瘤细胞生长旺盛，细胞体积大，核染色深
大小不一，病理核分裂相较多，瘤组织内新生微血管丰
富。见图 1。
图 1 HE 模型组 400X
CTX组:肿瘤组织较局限，细胞体积变小，瘤体中
央可见片状坏死，部分可见结缔组织包绕，瘤组织内微
血管较少见。见图 2。
图 2 HE CTX组 400X
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ETS组:瘤组织呈小片状生长，瘤细胞体积较小，
大面积坏死核碎裂，瘤体边缘较整齐，周围组织少有侵
袭，瘤组织内及其周围微血管明显减少或偶见。瘤周
和间质内有许多淋巴细胞浸润。见图 3。
图 3 HE ETS组 400X
2. 3 肿瘤透射电镜观察
模型组:瘤细胞多呈圆形或不规则形，排列紧密，
间隙正常，细胞表面可见微绒毛丰富，细胞核较大，结
构完整，核膜清晰，核仁明显。见图 4。
图 4 模型组 4200 ×
CTX 组:肿瘤细胞大部分发生崩解、坏死现象，细
胞膜破裂、不完整，胞质内无明显细胞器结构，细胞固
缩，间隙增宽，呈溶解样改变。其中可见凋亡细胞，染
色质凝集成块，细胞膜融合。见图 5。
图 5 CTX组 4200 ×
ETS组:瘤细胞体积明显变小，细胞表面微绒毛减
少或消失，核异染色质浓缩成块，向核周边凝集，核周
隙增宽，可见凋亡小体形成。见图 6。
图 6 ETS组 4200 ×
3 讨论
随着社会和自然环境的变化，恶性肿瘤的发病率
逐年升高，已经成为威胁人类生命健康的第二大疾病，
全世界每年有 600 多万人死于恶性肿瘤。西医治疗肿
瘤主要是通过放疗、化疗、手术等手段，虽然有较好的
疗效但毒副作用较大，常出现免疫功能下降、骨髓抑制
等不良反应，并且化疗药物在治疗过程中出现的耐药
性已成为目前临床治疗中的难题之一。因此迫切需要
寻求疗效好、副作用小的药物和方法来抵制肿瘤对人
类的侵害。肿瘤的发生发展不仅是由细胞增殖失控引
起，也与细胞凋亡受阻密切相关。诱导肿瘤细胞的凋
亡是抗肿瘤药物研究及应用的重要策略之一。
本实验研究结果证明:与模型组比较，CTX 组和
ETS 组瘤重显著低于模型组的瘤(P < 0. 01)，表明
ETS具有抑制肿瘤细胞生长的作用。形态学观察结果
显示，CTX 组、ETS 组均可见肿瘤组织较局限，瘤细胞
体积变小，细胞表面微绒毛减少甚至消失，内膜结构完
好，核膜清晰，细胞核固缩，染色质团块状散布核内或
边集核膜下，并可见不规则凋亡小体，线粒体嵴等细胞
器结构未见改变。进一步证明了辽东楤木叶总皂苷的
抗肿瘤作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。
参考文献:
［1］ 孙桂波，徐慧波.去葡萄糖竹节参皂苷 IVa 对缺氧复氧心肌细胞
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424 － 427.
［2］ 钮旭升，陶树青，马志强，等.辽东楤木的化学成分研究［J］.中医
药学报，2009，37(3):52 － 54.
［3］ 肖洪彬，匡海学.龙牙楤木叶抗肿瘤作用机理的实验研究［J］. 中
药药理与临床，2000(增刊):16.
［4］ 尹丽颖，边晓燕，肖洪彬，等. 辽东楤木叶总皂苷对 H22荷瘤小鼠
p53 及 PCNA 蛋白表达的影响［J］. 中医药学报，2010，38(1):
18 － 20.
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