全 文 ：3.2 　目前 ,色谱指纹图谱的相似度评价技术主要
有夹角余弦法 、相关系数法 、Nei系数法 、改进 Nei系
数法等 〔4〕。本实验采用国家药典委员会颁布的 《中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版 》软件 ,
用夹角余弦法计算相似度 。相似度的评价标准由国
家药典委员会规定:一般成品的相似度计算结果在
0.9 ～ 1.0之间即符合要求。将 10批灰毡毛忍冬和
黄芩水提物的指纹图谱导入 《中药色谱指纹图谱相
似度评价系统 2004A版 》软件 ,结果表明 10批水提
物的色谱图相似度均大于 0.96,相似度较好 ,且用
了 10批药材 ,保证了本实验所建立的指纹图谱的代
表性。说明不同批次灰毡毛忍冬和黄芩水提物指纹
图谱很相似 ,可通过制定标准指纹图谱来控制其质
量;用此方法来评价灰毡毛忍冬和黄芩水提物的质
量是可行 、有效的 。
3.3 　中国药典通过控制绿原酸和黄芩苷的含量来
控制银黄制剂的质量 ,故全国大部分药厂在进行银
黄制剂的生产时 ,综合成本和绿原酸含量来考虑 ,均
以灰毡毛忍冬(山银花)作为原料来生产银黄制剂。
本实验所用的实验材料和全国大部分药厂所生产的
银黄制剂所用的原料是一样的 ,提取物制备方法也
近似 ,故本研究的方法和结果为建立银黄制剂的指
纹图谱等质量控制体系提供了参考。
参 考 文 献
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(2008-05-21收稿)
基金项目:成都市科技局研究项目(06GGYB084SF-034);四川省农作物育种攻关项目(2006yzgg12-82)作者简介:李敏 ,女 ,教授 ,硕士生导师 ,长期从事中药材品种质量评价和中药材 GAP研究;Tel:13980038316, E-mail:028limin@ 163.com。
蓬莪术 HPLC指纹图谱研究
李　敏 1, 2 ,张钰苓1 ,贾君君 1 ,田　蜜 1 ,兰泽伦 1 ,刘德军 2
(1.成都中医药大学 ,四川成都 610075;2.温州医学院 ,浙江温州 325035)
　　摘要　目的:建立蓬莪术药材的指纹图谱。方法:采用 HPLC法 , 色谱柱:KromasilODS-1(250 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相:乙腈-水(梯度洗脱);流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;检测波长:210 nm。结果:建立了蓬莪术 HPLC指
纹图谱共有模式 , 并对不同产地的莪术药材进行了相似度比较。结论:蓬莪术药材中各成分均得到了较好的分离 ,
可作为蓬莪术药材专属性的指纹图谱。
关键词　蓬莪术;HPLC;指纹图谱
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1806-04
StudyonHPLCFingerprintofCurcumaephaeocaulis
LIMin1 , 2 , ZHANGYu-ling1 , JIAJun-jun1 , TIANMi1 , LANZe-lun1 , LIUDe-jun2
(1.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine, Chengdu 610075, China; 2.MedicalcollgegofWenzhou, Wenzhou
325035, China)
Abstract　Objective:ToestablishthefingerprintofCurcumaephaeocaulisbyHPLC.Methods:Thechromatographicconditions
wereasfollows:Chromatographiccolumn:KromasilODS-1(250 mm×4.6mm, 5μm), mobilephase:acetonitrileandwater(gradi-
entelution), flowrate:1.0 ml/min, columntemperature:25℃, detectionwavelength:210 nm.Results:WeestablishedtheHPLC
fingerprintcommonmode, andcomparedCurcumaephaeocauliswhichwereproducedindifferenthabitats.Conclusion:Eachcompo-
nentofRhizomaCurcumaeiswelisolated, andcanbeaspecificityfingerprintofCurcumaephaeocaulis.
Keywords　Curcumaephaeocaulis;HPLC;Fingerprint
　　莪术来源于姜科植物蓬莪术 Curcumaphaeo-
caulisVal.、广西莪术 CurcumakwangsiensisS.G.Lee
etC.F.Liang或温郁金 CurcumawenyujinY.H.Chen
etC.Ling的干燥根茎。其味辛 、苦 ,性温 ,归肝 、脾
·1806· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.12.016
经;具有行气破血 、消积止痛之功效 ,用于症瘕痞块 、
瘀血经闭 、食积胀痛;对于早期宫颈癌等症有良好的
疗效〔1〕。蓬莪术主产于四川省 ,又名文术 。在四川
有一千多年的栽培历史 ,产于岷江河流域沿岸各县 ,
尤以成都双流 、崇州为道地产地。其主要成分为挥
发油和姜黄素类挥发油中所含 β -榄香烯 、吉马酮 、
莪术二酮 、莪术酮等成分具有较强的生理活性 ,在抗
肿瘤 、抗菌 、抗病毒等方面有较好的作用;姜黄素类
成分主要为蓬莪术活血化瘀的物质基础 〔2, 3〕。本文
根据指纹图谱技术要求 ,采用 HPLC法建立温莪术
药材的指纹图谱 ,可作为其内在质量的控制标准。
1 　材料与仪器
1.1 　样品来源　见表 1。
1.2 　仪器与试药　仪器:VARIAN高效液相色谱
仪 。对照品:吉马酮对照品(中国药品生物制品检
定所 ,批号 111665-200401);莪术二酮对照品(由澳
门大学李绍平教授提供 ,纯度 >98%)。试剂:乙腈
为色谱纯 ,用水为重蒸水 ,其余试剂均为分析纯 。
　表 1 　样品来源
编号 来源
1 2006年 12月购于四川省崇州市三江镇宋桥村(晒干)
2 2006年 12月购于四川省崇州市三江镇三桥村(晒干)
3 2006年 12月购于四川省双流县金桥镇舟渡村(晒干)
4 2006年 12月采收于四川省崇州市三江镇宋桥村(烘干)
5 2006年 12月采收于四川省崇州市三江镇三桥村(烘干)
6 2006年 12月采收于四川省双流县金桥镇舟渡村(烘干)
7 2006年 12月购于五块石中药材市场
8 2006年 10月采收于四川省崇州市三江镇三桥村(烘干)
9 2006年 11月采收于四川省崇州市三江镇三桥村(烘干)
10 2006年 12月采收于四川省崇州市三江镇三桥村(烘干)
11 2006年 12月采收于四川省崇州市三江镇宋桥村(贮藏三个月)
12 2006年 12月采收于四川省崇州市三江镇宋桥村(贮藏半年)
13 2006年 12月采收于四川省崇州市三江镇宋桥村(贮藏一年)
　　注:以上样品经笔者鉴定均为姜科植物蓬莪术 Curcumaphaeo-
caulisVal.的干燥根茎
2 　方法与结果 〔4-6〕
2.1 　色谱条件 　KromasilODS-1(250 mm×4.6
mm, 5μm)色谱柱;检测波长:210nm;流速:1.0ml/
min;柱温:25℃;流动相:A.乙腈 , B.水。梯度洗
脱:0 ～ 25 min乙腈比例为 45% ～ 50%;25 ～ 40 min
乙腈比例为 50% ～ 75%;40 ～ 60 min乙腈比例为
75% ～ 80%;60 ～ 70 min乙腈比例为 80% ～ 90%;
70 ～ 80 min乙腈比例为 90% ～ 95%。
2.2 　对照品溶液的制备　精密称取吉马酮对照
品 、莪术二酮对照品适量 ,加甲醇制成每 1 ml含吉
马酮 60 μg,莪术二酮 0.25mg的溶液 ,即得 。
2.3　供试品溶液的制备　取蓬莪术细粉 0.5 g,精
密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25 ml,称定
重量 ,超声提取 1h,静置放冷 ,再称定重量 ,加甲醇
补足减失的重量 ,摇匀 ,静置 ,取上清液用微孔滤膜
滤过 ,即得 。
2.4　测定方法　分别吸取对照品溶液和供试品溶
液各 20 μl,注入液相色谱仪 ,结果见图 1、图 2。另
吸取溶液 20 μl作为空白溶液注入高效液相色谱
仪 ,结果表明 ,溶剂对蓬莪术指纹图谱的检出无干
扰。
图 1　对照品溶液 HPLC色谱图
1.莪术二酮　2.吉马酮
图 2　供试品溶液 HPLC色谱图
2.5　方法学考察
2.5.1　精密度试验:取供试品溶液(批号 1),连续
进样 6次 ,考察色谱峰保留时间的一致性 ,各主要色
谱峰保留时间的 RSD值均小于 2%,同时考察各色
谱峰的相似度 ,用相似度评价软件计算 ,测得的色谱
指纹图谱与其所得的共有模式图的相似度分别为:
0.997、0.995、 0.997、 0.996、 0.998、 0.998, 均大于
0.99,表明仪器稳定 ,精密度良好。
2.5.2　稳定性试验:取供试品溶液(批号 1),分别
在 0、4、8、12、24 h进行检测 ,考察各色谱峰保留时
间的一致性 ,各主要色谱峰保留时间的 RSD值均小
于 2%,同时考察各色谱峰的相似度 ,用相似度评价
软件计算 ,测得的色谱指纹图谱与其所得的共有模
式图的相似度分别为:0.997、0.996、 0.996、0.997、
0.994 ,均大于 0.99,表明供试品溶液在 24 h内稳
定。
2.5.3 　重复性试验:取蓬莪术药材(批号 1)5份 ,
·1807·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
照 “2.3”项下方法制备供试品溶液 5份 ,依法检测 ,
考察各色谱峰保留时间的一致性 ,各主要色谱峰保
留时间的 RSD值均小于 2%,同时考察各色谱峰的
相似度 ,用相似度评价软件计算 ,测得的色谱指纹图
谱与其所得的共有模式图的相似度分别为:0.996、
0.994、0.995、0.997、0.995,均大于 0.99 ,表明提取
和检测方法重现性好 。
2.6 　指纹图谱的建立　取蓬莪术药材 13批 ,照
“ 2.3”项下方法制备供试品溶液 ,依法检测 ,得到
210nm的 HPLC指纹图谱。采用中药色谱指纹图
谱相似度评价系统 A版进行全谱的相似度评价及
共有图谱拟合 ,参照 《中药注射指纹图谱研究的技
术要求(暂行)》,确定了 13个特征峰构成蓬莪术的
指纹图谱 ,其中 5#峰为莪术二酮 , 8#峰为吉马酮 。药
材 1 ～ 13号中位数相关系数依次为 0.939、0.994、
0.967、 0.994、 0.527、 0.929、 0.986、 0.957、 0.940、
0.995、0.979、0.972、0.980。蓬莪术 5号由于其 11#
特征峰丰度太低导致其相似度小于 0.9,其余样品
相关系数均大于 0.90,相关性良好 。色谱图见图 3、
图 4。
图 3　13批次药材 HPLC色谱图
S1 ～ S13.1 ～ 13批蓬莪术药材　R.共有模式图
图 4　共有模式图
3 　小结与讨论
3.1 　本研究首次建立了蓬莪术 HPLC指纹图谱 ,
并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统 A版对
不同产地的蓬莪术药材的 HPLC指纹图谱进行相似
度评价 ,结果表明其指纹图谱相互间较为吻合 ,虽然
由于样品的个体差异 ,特征峰的相对含量存在一定
的差异 ,但整体轮廓均符合共有特征。同时从药材
整体色谱图入手 ,选取了 13个特征峰构成了蓬莪术
的指纹图谱 ,以共有模式作为蓬莪术的鉴别标准 ,能
提供更全面的质量控制信息 。实验证明该方法操作
性强 ,重现性好 ,可作为蓬莪术内在质量控制的评价
方法 。
3.2　实验中对提取溶剂(甲醇 、乙醇及不同比例的
醇和水)、提取方法(超声 、回流)等进行了考察 ,确
定了以上供试品溶液的制备方法 。
3.3　不同采收期 、加工方法及贮藏时间的蓬莪术
样品虽然各峰面积大小不同 ,存在成分含量的差异 ,
但其色谱概貌基本一致 ,符合蓬莪术药材的指纹特
征。
3.4　由于本实验样品均为四川几个道地产区的不
同采收期 、加工方法及贮藏时间的药材 ,故样品具有
代表性 ,能够较好地反映蓬莪术指纹图谱研究的全
面性 。
·1808· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
参 考 文 献
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[ 6] 李敏 , 李校堃 .中药材市场动态与应用前景 .北京:中
国医药科技出版社 , 2005:277-280.
(2008-03-24收稿
2008-09-10修回)
甘松药材 HPLC指纹图谱研究
李　莹 ,董小萍 ,杨勇勋 ,刘俊超 ,骆骄阳 ,张　旭＊
(成都中医药大学药学院 ,四川成都 610000)
　　摘要　目的:建立甘松药材 HPLC指纹图谱 , 以便比较完整地反映甘松的内在化学信息 , 全面评价甘松药材质
量 , 与其他药材进行鉴别。方法:应用 HPLC法测定了 10批甘松的指纹图谱 , 甲醇-水为流动相 , 进行梯度洗脱 ,检
测波长 288 nm,流速 1.0ml/min, 柱温 25℃,收集 65 min。结果:建立了甘松 HPLC指纹图谱共有模式 , 并对不同产
地药材进行了相似度比较。结论:该方法稳定可靠 , 信息量大 ,为甘松药材鉴别和质量评价提供了依据。
关键词　甘松;指纹图谱;HPLC
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1809-04
FingerprintsofNardostachyschinenesisbyHPLC
LIYing, DONGXiao-ping, YANGYong-xun, LIUJun-chao, LUOJiao-yang, ZHANGXu
(ChengduUniversitofTCM, Chengdu610000, China)
Abstract　Objective:ToestablishtheHPLCfingerprintsofNardostachyschinenesisforreflectingtheinternalchemicalinforma-
tion, evaluatingitsinternalqualityandidentifyingthemfromdifferentculturalareas.Methods:TheHPLCfingerprintsof10 Nar-
dostachyschinenesissampleswereobtained.TheHPLCseparationwasperformedonaKromasilC18 analyticalcolumnbygradientelu-
tingwithMeOH-H2Oattheflowrateof1.0 ml/min.Thecolumntemperaturewas25℃, theUVdetectionwavelengthwas288 nm,
andthecolectiontimewas65 min.Results:ThemutualmodeofHPLCfingerprintswassetupandsimilardegreestothecrudedrugs
fromdiferentculturalareaswerecompared.Conclusion:Themethodisstable, reliable, andwithfulinformationwhichcanbeused
asaqualitycontrolitemforNardostachyschinenesis.
Keywords　Nardostachyschinenesis;Fingerprint;HPLC
作者简介:李莹 ,女 ,在读硕士 ,研究方向:药物化学与中药质量控制;Tel:13982278150, E-mail:lyingII282@163.com。＊通讯作者:张旭 ,副教授;Tel:13982278150, E-mail:zx91830@126.com。
　　甘松为败酱科甘松属植物甘松 Nardostachys
chinenesisBatal.和匙叶甘松 N.jatamansiDC的根及
根茎。主产于我国青海 、四川 、云南和西藏 。甘松作
为传统中药收载于中国药典 1995版 〔1〕中 ,历代本草
认为甘松性味辛 、甘 、温 ,归脾 、胃经 ,具有行气止痛 、
开郁醒脾之功效 。现代药理研究证明甘松主要有镇
静 、解痉 、抗心律失常 、抗心肌缺血缺氧 、抗溃疡及抑
菌等作用 ,主要成分为挥发油 、萜类成分;临床主要
用于治疗脘腹胀痛 、食欲不振 、呕吐 、牙痛等 〔2, 3〕。
本实验针对甘松药材 ,建立其 HPLC指纹图谱 ,运用
相似度软件进行评价 ,并对不同产地药材进行了初
步研究 ,取得了满意的结果 ,为更好地控制甘松药材
及制剂的质量提供了依据。
1　材料与仪器
1.1　样品　经本院生药教研室郭平教授鉴定为败
酱科甘松属植物甘松 NardostachyschinensisBatal.
的干燥根及根茎 ,符合 2005年版中国药典的规定 ,
见表 1。
1.2　对照品　蒙花苷对照品 ,由中国药品生物制
品检定所提供 ,批号:111528-200606, 供含量测定
用。
1.3　试剂　甲醇(色谱纯 , FisherchemAlert),水为
·1809·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月