全 文 ：HPLC测定楤木叶中绿原酸的含量 *
何 兵，田 吉，肖顺汉
（泸州医学院药学院，四川泸州 646000）
摘 要 目的： 建立 HPLC 测定楤木叶中绿原酸含量的方法。 方法： 色谱柱为 Dikma Kromasil C18柱 （250 mm×4.6 mm，
5μm）；流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液（12∶88），检测波长 326 nm。 结果：绿原酸在 0.654～6.536μg 范围内具有良好的线性关系（r＝
0.9999），平均回收率为 98.73％，RSD 为 0.78％。 结论：该方法简便、快速、准确、具有良好的重复性和回收率，可作为楤木叶中绿
原酸含量测定方法。
关键词 HPLC；楤木叶；绿原酸
中图分类号 R927.2 文献标识码 A 文章编号 1000-2669（2010）3-02229-03
HPLC DETERMINATION OF CHLOROGENIC ACID IN
ARALIA CHINENSIS LEAF
He Bing，et al
(Institute of Materia Medica ， Luzhou Medical College)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for determination of chlorogenic acid in Aralia chinensis
leaf．Methods:The separation was carried out on a Dikma Kromasil C18 column （250 mm×4.6mm，5μm）．The mo-
bile phase was acetonitrile -0.1% phosphoric acid （12∶88）．The detective wavelength was set at 326 nm．Results：
The calibration curve showed good linearity over the range of 0.654～6.536μg （r＝0.9999）. The average recovery
was 98.73％ with RSD 0.78％. Conclusion:This method is simple，rapid，accurate and with good repeatability and
recovery，it can be used as a quantitative analysis method for Aralia chinensis leaf．
Key words HPLC； Aralia chinensis leaf； Chlorogenic acid
* 四川省教育厅重点项目（No.2005A076）
作者简介：何 兵（1978-），男，助理研究员
通讯作者：肖顺汉（1952-），男，教授
楤木叶为五加科楤木属植物楤木 Aralia chi-
nensis L.的干燥叶，性甘、微苦、平，具有利水消肿功
效，主要用于治疗水肿及臌胀[1]。目前，国内文献关于
楤木叶作者尚未发现有相关成分研究及含量测定报
道。作者在研究楤木叶中皂苷类时，发现楤木叶中富
含绿原酸，而绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗白
血病、降血脂、降糖等生物活性 [2]，故试验尝试采用
HPLC对楤木叶中所含的绿原酸进行了定量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
戴安高效液相色谱仪（P680A 四元低压梯度泵，
PDA-100 二极管阵列检测器 ，TCC-100 柱温箱 ，
Chromeleon 色谱工作站 ）； 瑞士 Precisa 电子天平
（XR 205SM-DR）；CQX25-06超声波清洗器（上海必
能信超声有限公司，功率 250 W，频率 25 kHz）。
1.2 试药
绿原酸对照品（110753-200212），中国药品生物
制品检定所提供。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析
纯，水为重蒸馏水。 楤木叶，2008 年 7月采自四川泸
州纳溪龙车乡，野生，经作者鉴别为五加科楤木属植
物楤木 Aralia chinensis L.的叶。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Dikma Kromasil C18 （250 mm×4.6 mm，
5μm）；流动相：乙腈-0.1％磷酸（12∶88）；检测波长：
论著
229
泸州医学院学报 2010 年 第 33 卷 第 3 期
Journal of Luzhou Medical College Vol.33 No.3 2010
326 nm；柱温 ：30℃；流速 ：1.0ml·min-1；进样量 ：10
μl。
2.2 试液的制备
2.2.1 对照品溶液
取经五氧化二磷减压干燥至恒重的绿原酸对照
品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加 50％甲醇制成
每 1 ml 含绿原酸 0.3268 mg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液
取本品细粉约 1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，精密加入 50％甲醇 50 ml，称定重量，超声处理
45 min，取出，放冷，再称定重量，用 50％甲醇补足减
失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.3 系统适应性试验
分别精密吸取对照品溶液 、 供试品溶液各
10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果见图
1。 从图中可见，绿原酸的保留时间约为 10.8 min，绿
原酸峰与其前后色谱峰的分离度分别为 2.76、3.09，
拖尾因子为 0.96， 理论塔板数以绿原酸峰计为
19932，绿原酸峰纯度因子为 1000。
A. 绿原酸对照品 B. 供试品
1. 绿原酸
图 1 楤木叶 HPLC 色谱图
2.4 线性关系考察
分别精密吸取绿原酸对照品溶液 （0.3268 mg·
ml-1）2、4、6、8、10、15、20μl，注入液相色谱仪，按上述
色谱条件测定峰面积，以峰面积 A 对进样量 C（μg）
进行回归，得标准曲线方程：A＝32.4316 C + 0.2704，
r＝0.9999。 结果表明，绿原酸在 0.654～6.536 μg范围
内，峰面积值与进样量有良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取“2.2.1”项下对照品溶液，重复进样 6 次，测得
绿原酸面积 RSD 为 0.31％（n=6）， 表明仪器精密度
良好。
2.6 重复性试验
取同一批样品，照“2.2.2”项下方法，平行制备 6
份供试品溶液，分别进样测定，测得绿原酸的平均含
量为 16.5329 mg·g-1，RSD 为 0.49％。 表明本方法重
复性良好。
2.7 稳定性试验
取 本 品 的 供 试 品 溶 液 ， 分 别 于 制 备 后
0，4，8，12，24，48 h进样测定， 测得绿原酸的峰面积
RSD为 0.89％，表明供试品溶液在 48 h内稳定。
2.8 加样回收试验
精密称取已知含量（16.5329 mg·g-1）的本品细
粉 9 份，每份约 0.5 g，分成 3 组，每组 3 份，分别精
密添加绿原酸对照品溶液（2.768 mg·ml-1）2、3、4 ml，
按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条
件测定，并计算回收率。 试验结果见表 1。
表 1 加样回收率试验测定结果(n=9)
测定次数
1
2
3
4
5
6
7
8
9
取样量/g
0.5002
0.5026
0.5012
0.5019
0.5008
0.5021
0.5003
0.5015
0.5037
样品含量/mg
8.2693
8.3090
8.2858
8.2974
8.2792
8.3007
8.2710
8.2908
8.3272
添加对照品量/mg
5.536
5.536
5.536
8.304
8.304
8.304
11.072
11.072
11.072
测出量/mg
13.7012
13.7160
13.7986
16.4661
16.5542
16.4810
19.2201
19.3362
19.1844
回收率/%
98.12
97.67
99.58
98.37
99.65
98.51
98.89
99.76
98.06
平均回收率/%
98.73
RSD/%
0.78
230
试验结果表明，本法具有良好的回收率。
2.9 样品测定
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各
10μl，按上述色谱条件测定并计算绿原酸的含量，结
果见表 2。
表 2 楤木叶中绿原酸含量测定结果（n=3）
3 讨 论
3.1 提取方法的选择
试验中针对含量测定配制供试品溶液的不同提
取方法（超声、回流、索氏提取），不同提取溶剂（甲
醇、75％甲醇、50％甲醇、25％甲醇、 水和流动相），不
同溶剂体积（10、25、50、75、100 ml）及不同提取时间
（15、30、45、60 min）分别考察。 结果以 50 ml50％甲
醇超声提取 45 min含量最高，杂质峰较少。
3.2 测定波长的选择
采用二极管阵列检测器在 190～380 nm 范围内
分别扫描绿原酸对照品、 供试品溶液中绿原酸峰的
紫外吸收， 对照品和供试品中的绿原酸均在 326nm
有最大吸收，故选用 326 nm作为测定波长。
3.3 楤木叶可以作为绿原酸的提取来源
中国药典 2010 版规定，金银花、山银花、菊花、
杜仲叶、忍冬藤、石韦中绿原酸含量限度分别不低于
1.5％、2％、0.2％、0.08％、0.1％、0.2％[3]。 从表 2可知，7
月盛花期采摘的楤木叶中绿原酸的含量较高， 基本
能达到金银花、 山银花这类富含绿原酸中药药典规
定的绿原酸含量下限，且远超过菊花、杜仲叶、忍冬
藤、石韦等药典规定的绿原酸含量下限。而文献[4，5]报
道，金银花及山银花中绿原酸的含量普遍在 2％～4％
之间，文献 [6]报道山东 10 个不同品种的金银花其绿
原酸含量普遍均在 2.0％以下，部分仅有 1.0％。 可见
楤木叶中绿原酸的含量仅约低于以绿原酸含量较高
著称的金银花， 且超过部分金银花品种的绿原酸含
量。楤木叶可以作为绿原酸的提取来源，楤木叶的药
效学研究也不应仅仅局限于治疗水肿， 理论上楤木
叶及其提取物应该具有绿原酸所具有的功效。
参 考 文 献
1. 南京中医药大学．中药大辞典，下册（第二版）[M]．上海：
上海科学技术出版社，2006;3449
2. 吴卫华，康 桢，欧阳冬生，等 ．绿原酸的药理学研究进
展[J]．天然产物研究与开发，2006;18(4)：691
3. 国家药典委员会.中华人民共和国国家药典（一部）[S].北
京：中国医药科技出版社，2010；205，29，292，155，179，83
4. 刘明斌，童巧珍，谢振宇．HPLC 法测定金银花中绿原酸
的含量[J]．医学临床研究，2006;23(5)：759
5. 曹冬红，张贺文，杨 科．高效液相色谱法测定山银花中
绿原酸的含量[J]．中南药学，2007;5(1)：36
6. 周凤琴，冉 蓉，李 佳 ．山东 10 个不同种质金银花中
绿原酸含量及其品质评价[J]．山东中医杂志，2007;26(7)：
478
（2009-10-23 收稿）
批 次
1
2
3
4
5
绿原酸含量/％
1.65
1.92
2.28
2.53
1.47
RSD/％
0.67
0.49
0.52
0.38
0.45
第 3 期 何 兵等：HPLC 测定楤木叶中绿原酸的含量 231