全 文 ：* 国家自然科学基金项目(81202919);国家中医药管理局中医药行业科研专项项目(20110700712)
＊＊ 通讯作者:Tel:(0411)87586499;E － mail:jiatz@ lnutcm． edu． cn
第一作者:Tel:18909816763;E － mail:95142012@ qq． com
HPLC － ELSD法测定茅苍术生品及麸炒品中苍术苷 A的含量*
于艳，才谦，贾天柱＊＊
(辽宁中医药大学，沈阳 110032)
摘要 目的:建立测定茅苍术中苍术苷 A含量的方法，比较茅苍术生品及麸炒品中苍术苷 A含量的差异。方法:采用高效液
相色谱蒸发光散射检测(HPLC － ELSD)法，使用 Agilent TC － C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，以乙腈(A)－水(B)为流动
相，梯度洗脱(0 ～ 10 min，2%A→8%A;10 ～ 15 min，8%A→15%A;15 min之后维持 15%A)，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，
蒸发光散射检测器漂移管温度 50 ℃，雾化气体为氮气，氮气压力 3. 0 × 105 Pa。结果:苍术苷 A 进样量在 0. 2390 ～ 4. 7800 μg
(r = 0. 9998)范围内线性关系良好;平均回收率为 97. 84%，ＲSD为 1. 0%。样品测定结果为 0. 0474% ～0. 0852%。结论:本方
法经过方法学验证，可为茅苍术的质量控制提供实验依据。
关键词:茅苍术;生品;麸炒品;苍术苷 A;愈创木烷型倍半萜苷类化合物;高效液相色谱;蒸发光散射检测
中图分类号:Ｒ917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2014)09 － 1601 － 04
Determination of atractyloside A in raw and bran fried
rhizome of Atractylodes lancea by HPLC － ELSD*
YU Yan，CAI Qian，JIA Tian － zhu＊＊
(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China)
Abstract Objective:To establish a method for determination of the content of atractyloside A in rhizome of Atrac-
tylodes lancea and compare the content of atractyloside A in raw and bran fried rhizome of Atractylodes lancea．
Methods:The HPLC － ESLD was carried out on an analytical C18 column(Agilent TC － C18，4. 6 mm × 250 mm，5
μm)at a column temperature of 30 ℃ and a flow rate of 1. 0 mL·min －1 ． The mobile phase was gradient elution(0
－10 min，2%A→8%A;10 － 15 min，8%A→15%A;after 15 min，15%A)with mixture liquid of acetonitrile(A)
and water(B)． The drift tube temperature for the ELSD was set at 50 ℃ with the nebulizing gas(nitrogen)pressure
of 3. 0 × 105 Pa． Ｒesults:The calibration curve of atractyloside A was linear in the ranges of 0. 2390 － 4. 7800 μg
(r = 0. 9998)． The average recovery of the method for atractyloside A was 97. 84%with ＲSD 1. 0% ． The sample de-
termination result was 0. 0474% － 0. 0852% ． Conclusion:After the methodology validation，this method can pro-
vide the experimental basis for the quality control of rhizome of Atractylodes lancea．
Key words:rhizome of Atractylodes lancea;raw product;bran fried product;atractyloside A;guaiane type sesquiter-
pene glycosides;HPLC;ELSD
茅苍术为菊科植物茅苍术 Atractylodes lancea
Thunb． DC．的干燥根茎，始载于《神农本草经》［1］，
味甘、苦，性温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风
散寒、明目之功效［2］。现代药理研究表明茅苍术具
有抑菌、抗炎、抗病毒、抗血管增生、保肝，治疗胃溃
疡、高血糖、类风湿性关节炎等多种生物活性［3 － 6］。
近年来，国内外对苍术化学成分研究较多，但主
要集中在挥发性成分的研究，水溶性成分研究较少，
有研究表明苍术的水溶性成分也具有一定的药理活
性，在某些药理作用方面与挥发性成分相似或略
强［7］。苍术苷 A为愈创木烷型倍半萜苷类化合物，
存在于茅苍术的水溶性部位，是其中的代表性成
分［8 － 9］，其结构见图 1。有关茅苍术生品及麸炒品
中苍术苷 A 的含量测定，目前未见有文献报道，本
—1061—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(9)
文采用高效液相色谱 －蒸发光散射检测法(HPLC －
ELSD法)对其进行测定，以期为茅苍术药材及其制
剂中苍术苷 A的含量测定提供参考。
图 1 苍术苷 A的结构
Fig 1 Structure of atractyloside A
1 仪器与试药
1. 1 仪器 美国 Agilent 1100 高效液相色谱仪
(G1379A 真空脱气机，G1311A 四 元 梯 度 泵，
G1313A自动进样器，G1315 柱恒温箱，G4218A蒸发
光散射检测器，Agilent B0403色谱工作站);梅特勒 －
托利多仪器(上海)有限公司 AE － 240 电子分析天
平;昆山禾创超声仪器有限公司 KH － 400DB 型数
控超声波清洗器。
1. 2 试药 对照品苍术苷 A(纯度为 98%以上，
批号 20120722)购自南京春秋生物工程有限公司;
茅苍术药材产地见表 2，经辽宁中医药大学药学院
鉴定教研室李峰教授鉴定为正品，其相应麸炒品
为本课题组严格按照中国药典 2010 年版一部附
录ⅡD炮制通则及“苍术”项下要求经麸炒而成。
乙腈为色谱纯(美国 Fisher 公司)，水为娃哈哈纯
净水(杭州娃哈哈集团有限公司)，其他试剂为分
析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取苍术苷 A 对照
品适量，加水制成每 1 mL含 0. 2 mg的溶液，即得。
2. 2 供试品溶液的制备 取样品粉末(过 3 号
筛)1. 0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水
20 mL，超声(400 W，40 kHz)处理 40 min，离心
(3000 r·min － 1)15 min，精密吸取上清液 10 mL，
浓缩至干，残渣加水溶解并转移至 5 mL 量瓶中，
用水稀释至刻度，摇匀，0. 45 μm滤膜滤过，即得。
2. 3 色谱条件与系统适用性试验 采用 Agilent TC
－ C18色谱柱(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)，以乙腈(A)
－水(B)为流动相，梯度洗脱(0 ～ 10 min，2%
A→8%A;10 ～ 15 min，8%A→15%A;15 min之后维
持 15%A);ELSD检测器，漂移管温度 50 ℃，雾化气
体为氮气，氮气压力 3. 0 × 105 Pa。流速 1. 0 mL·
min －1，柱温 30 ℃。
在上述色谱条件下，苍术苷 A 峰与相邻峰分离
度均大于 1. 5，对称因子符合要求，理论塔板数按苍
术苷 A峰计不低于 5000。
2. 4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液 5 μL和
10 μL，供试品溶液 5 μL，注入液相色谱仪测定，用
外标两点法对数方程计算，即得。色谱图见图 2。
图 2 苍术苷 A对照品(A)、茅苍术生品(B，产地江苏)和茅苍术麸
炒品(C，产地江苏)的 HPLC图
Fig 2 HPLC chromatograms of reference substance(A)，rhizome of raw
Atractylodes lancea(B，cultivated in Jiangsu)and bran fried rhizome of
Atractylodes lancea(C，cultivated in Jiangsu)
1. 苍术苷 A(atractyloside A)
2. 5 检测限和定量限 将对照品溶液逐级稀释，进
样 5 μL，测定。以信噪比 31 时，确定其最低检测
限为 58. 6 ng;以信噪比 101 时，确定其定量限为
175. 8 ng。
—2061— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(9)
2. 6 线性范围考察 精密吸取对照品溶液 1、5、
10、15、20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱峰面
积，进样量的对数 X 与峰面积的对数 Y 经线性回
归，得回归方程为:
Y = 1. 363X + 5. 236 r = 0. 9998
结果表明苍术苷 A 进样量在 0. 2390 ～ 4. 7800
μg范围内线性关系良好。
2. 7 精密度试验 精密吸取对照品溶液 5 μL，连
续进样 6 次，结果峰面积值的 ＲSD为 1. 1%，表明仪
器精密度较好。
2. 8 重复性试验 取样品(产地江苏，生品)6 份，
研细，分别制备成供试品溶液，进样 5 μL进行测定，
结果平均含量为 0. 566 mg·g －1，ＲSD 为 2. 1%，表
明本方法重复性良好。
2. 9 稳定性试验 取同一样品(产地江苏，生品)
的供试品溶液，分别在 0、2、4、6、8、24 h 进样 5 μL
进行测定，结果峰面积的 ＲSD为 2. 0%，表明供试品
溶液 24 h内稳定性良好。
2. 10 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品
(产地江苏，生品)0. 5 g，共 6 份，分别置具塞锥形瓶
中，精密加入对照品溶液(含苍术苷 A 0. 2930 mg·
mL －1)1. 0 mL，蒸干溶剂，按“2. 2”项下方法制备供
试溶液，进样 5 μL进行测定，计算回收率，结果平均
回收率(n = 6)为 97. 84%，ＲSD为 1. 0%。
2. 11 含量测定结果 取不同产地的茅苍术及其相
应的麸炒品各 3 份，分别按“2. 2”项下的方法制备
成供试品溶液，再按“2. 3”项下的色谱条件和“2. 4”
项下的测定方法进行测定，用外标两点法对数方程
计算含量，结果见表 1。
表 1 样品中苍术苷 A的含量测定结果(X
—
± S，n =3)
Tab 1 Determination results of atractyloside A
编号(No．) 名称(name) 产地(origin) 含量(content)/%
1
生茅苍术
(raw rhizome of Atractylodes lancea)
浙江
(Zhejiang)
0. 0814 ± 0. 0022
2
麸炒茅苍术
(bran fried rhizome of Atractylodes lancea)
浙江
(Zhejiang)
0. 0744 ± 0. 0013
3
生茅苍术
(raw rhizome of Atractylodes lancea)
湖北
(Hubei)
0. 0852 ± 0. 0021
4
麸炒茅苍术
(bran fried rhizome of Atractylodes lancea)
湖北
(Hubei)
0. 0768 ± 0. 0014
5
生茅苍术
(raw rhizome of Atractylodes lancea)
内蒙古
(Inner Mongolia)
0. 0588 ± 0. 0009
6
麸炒茅苍术
(bran fried rhizome of Atractylodes lancea)
内蒙古
(Inner Mongolia)
0. 0474 ± 0. 0008
7
生茅苍术
(raw rhizome of Atractylodes lancea)
江苏
(Jiangsu)
0. 0835 ± 0. 0009
8
麸炒茅苍术
(bran fried rhizome of Atractylodes lancea)
江苏
(Jiangsu)
0. 0781 ± 0. 0021
9
生茅苍术
(raw rhizome of Atractylodes lancea)
河北承德
(Chengde，Hebei)
0. 0663 ± 0. 0018
10
麸炒茅苍术
(bran fried rhizome of Atractylodes lancea)
河北承德
(Chengde，Hebei)
0. 0572 ± 0. 0017
11
生茅苍术
(raw rhizome of Atractylodes lancea)
安徽
(Anhui)
0. 0812 ± 0. 0016
12
麸炒茅苍术
(bran fried rhizome of Atractylodes lancea)
安徽
(Anhui)
0. 0736 ± 0. 0022
13
生茅苍术
(raw rhizome of Atractylodes lancea)
北朝鲜
(North Korea)
0. 0761 ± 0. 0011
14
麸炒茅苍术
(bran fried rhizome of Atractylodes lancea)
北朝鲜
(North Korea)
0. 0575 ± 0. 0015
—3061—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(9)
3 讨论
3. 1 提取条件的考察 在供试品溶液的制备过程
中，本实验曾分别选用水、50%乙醇溶液和乙醇作为
提取溶剂，结果乙醇为提取溶剂时几乎未检测到苍
术苷 A，以水为溶剂时测得的含量最高;对提取方法
(超声提取、加热回流)进行考察，结果采用超声提
取、加热回流两法的提取效果未见明显差别，故而选
择操作比较简单的超声提取;对提取时间(10、20、
30、40、50 min)进行考察，最终确定提取条件为水超
声 40 min，苍术苷 A可提取完全。
3. 2 检测器的选择 苍术苷 A 为倍半萜苷类化合
物［10］，仅有紫外末端吸收，本实验曾采用 DAD 检
测，以 203 nm为检测波长，当等度洗脱时，样品基线
高，背景干扰严重，峰形差;而当梯度洗脱时，基线漂
移严重，均无法满足分离要求。蒸发光散射检测器
(ELSD)是一种质量型通用检测器，适用于任何挥发
性低于流动相的成分的检测，其响应值不依赖于样
品的光学性质，尤其适用于无紫外吸收或仅有末端
吸收的成分，弥补了紫外检测器在检测此类成分时
灵敏度低或基线漂移等不足［11 － 14］。本实验在改以
ELSD检测后，经过反复调节雾化气体流速、蒸发温
度及增益值等参数，结合递度洗脱，成功实现了苍术
苷 A的基线分离，且检测灵敏，重复性好，可为药材
及制剂中苍术苷 A的含量测定提供参考。
3. 3 炮制对茅苍术中苍术苷 A 含量的影响 从本
文试验结果可以看出，生品茅苍术经麦麸炮制之后
苍术苷 A 的含量有所下降，其减少率由 6. 47%到
24. 44%不等。
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—4061— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2014，34(9)