全 文 ：辽东楤木叶中皂苷 CongmuyenosideB(2)的分离与鉴定
张雷 1　陈燕萍 1　王志才＊ 1　马兴元1　杨帆 2　徐芳菲 3
1(吉林大学化学学院 ,长春 130021)　　2(中国科学院长春应用化学研究所 , 长春 130022)
3(集安益盛药业有限公司 ,集安 134200)
摘　要　本研究实现了对辽东楤木叶中 CongmuyenosideB(2)的分离与鉴定。研究中采用大孔吸附树脂提取
法和硅胶柱层析法对其分离 ,应用 HPLC色谱法和薄层色谱法对纯度进行分析 , 利用电喷雾多级串联质谱结
合核磁共振和红外光谱对该化合物的结构进行分析鉴定。 本提取分离法操作简便 , 提高了分离化合物的纯
度。 HPLC色谱法灵敏度高 , 结果准确 、减少了质谱及其它色谱中的杂质峰对化合物鉴定的干扰 , 结构准确 ,
可靠。
关键词　辽东楤木叶 , CongmuyenosideB(2),高效液相色谱 ,电喷雾串联质谱
　 2006-12-14收稿;2007-05-14接受
本文系吉林省科技发展计划项目(No.990302)
＊ E-mail:wzc@jlu.edu.cn
1　引　言
辽东楤木别名龙牙楤木 ,俗称刺嫩芽 Araliaselata(Miq.)Seem,为五加科楤木属植物 。具有补气安
神 、强精滋肾 、祛风活血 、除湿止痛的功能 [ 1] 。长期以来对辽东楤木的根皮 、树皮中的皂苷类成分研究
较多[ 2 ～ 5] ,而对于叶中皂苷成分研究较少 [ 6] 。皂苷类化合物分子量大 、极性大 、结构复杂 ,给分离纯化及
结构鉴定带来很大的困难 。本实验采用大孔吸附树脂对辽东楤木叶提取液吸附的方法 ,避免了溶剂萃
取法的杂质多的缺点 ,通过 HPLC色谱法结合正反相薄层法监测纯度比只应用正相薄层监测的准确度
高 [ 7] 。采用多级串联质谱研究皂苷类化合物的特征碎裂与化合物的结构的关系[ 8, 9] 。应用薄层色谱法
和 HPLC色谱法对其化合物的纯度进行分析 ,利用电喷雾多级串联质谱对其进行跟踪检测 [ 10] ,从而获
得该皂苷化合物的结构信息 ,简化了分离 、纯化及结构鉴定的过程 。
2　实验部分
2.1　仪器与试剂
MATLCQTM型电喷雾串联质谱仪(美国 Finnigan公司);IMPACT410型红外光谱仪(美国 Nicolet公
司);1100Series高效液相色谱仪(美国 Agilent公司)。
生药辽东楤木叶采自吉林省集安市 ,经吉林大学药学院生药教研室王广树教授鉴定为 Araliaelate
叶;大孔吸附树脂(天津南开大学);反相硅胶薄层板 OUYA-RP18(瑞士);薄层色谱硅胶 H/T2354-92
(青岛海洋化工有限公司);乙腈为色谱纯(美国 Tedia公司);乙醇 、三氯甲烷 、乙酸乙酯 、正丁醇为分析
纯(北京精细化工厂);水为二次蒸馏水。
2.2　实验方法
2.2.1　皂苷类化合物的提取分离　称 4 kg辽东楤木叶以水浸泡 ,加热煎煮 3次 ,每次 2 h,合并水提
液 ,过滤 。滤液上大孔吸附树脂 ,水洗脱糖脱色 ,乙醇洗脱液浓缩至干 ,得总皂苷粉 52 g。取 10 g总皂
苷粉 , 以薄层硅胶 H干法装柱 , 分别用 3个溶剂系统作洗脱剂 , a:CHCl3 -MeOH-EtOAc-H2O
(15∶22∶40∶10, V/V)、b:CHCl3-MeOH-H2O(65∶35∶10, V/V)、c:BuOH-EtOAc-H2O(4∶1∶2 , V/V),进行柱
色谱分离 ,结合反相硅胶薄层板检查 ,用 10%H2SO4喷雾加热显色 ,直到用 3个溶剂系统检查薄层上均
出现单一斑点为止 ,合并单一斑点的流分 ,浓缩至干 ,得白色粉末 132 mg,暂命名为化合物 。该化合
物溶于水 、甲醇 、乙醇 ,不溶于丙酮 、乙酸乙酯等弱极性溶剂。由于 Liebermann-Burchard、Molish反应均呈
第 35卷
2007年 8月　　　 　　　　　　　　
分析化学 (FENXIHUAXUE)　研究简报
ChineseJournalofAnalyticalChemistry 　　　　　　　 　　　　
第 8期
1221 ～ 1224
阳性反应 ,表明该化合物为皂苷类物质。
2.2.2　色谱质谱条件　采用电喷雾离子源 ,在离子阱质量分析器中进行多级碰撞诱导解离(CID),氦
气为碰撞气 ,喷雾电压 5.2 kV,毛细管温度 200℃,流动相为甲醇 ,流速 3 μL/min;HypersilC18色谱柱
(250mm×4.6 mm, 5μm,大连依利特公司),流动相 CH3CN∶H2O(3∶7, V/V),检测波长 208 nm,流速
1.0mL/min,柱温 40℃,进样量 10 μL。
3　结果与讨论
3.1　薄层色谱分析和 HPLC色谱分析
以 3种溶剂系统 a、b、c薄层展开 ,紫外灯照射未见荧光斑点 , 10%硫酸乙醇溶液喷雾加热显色 ,均
为紫红色单一斑点 ,无杂质斑点 ,反相硅胶薄层板展开(MeOH∶H2O=7∶3),硫酸显色亦为紫红色单一斑
点且无杂质斑点 。
化合物 经 HPLC法检测 ,为单一色谱峰 ,保留时间为 52.684 min,峰面积为 465.0,峰高为 2.73。
以面积归一化法计算其相对含量为 100%。
3.2　红外光谱分析
红外光谱中有波数为 3432 cm-1多羟基吸收峰 、2927 cm-1的 C H收缩振动峰 、 1736 cm-1的
C O吸收峰及 1620cm-1和 1457cm-1的 C C伸缩振动峰 、1076cm-1和 1031cm-1的 C O键吸收。
3.3　质谱分析
电喷雾多级串联质谱法直观易懂 ,解析方便 ,克服过去一张谱图多重碎片峰解析时的主观性 。因其
能捕捉上一次激发产生的目标离子 ,进行下一级碰撞诱导解离(CID),不难发现每个碎片峰的来源及去
向 ,从而推断化合物的结构 [ 11] 。
图 1为化合物 的电喷雾多级串联质谱图 。在全扫描一级谱图 1a中主要给出一个 m/z1143的质
谱峰 ,因为在电喷雾正离子谱中一般皂苷类化合物主要形成 [ M+Na] +离子 ,从而可以确定其相对分子
质量 Mr=1120,分子式为 C54H88O24。
图 1　化合物 的电喷雾串联质谱图
Fig.1　PositiveionESImassspectraofcompoundⅠ
a.MS;b.MS2;c.MS3.
　　由图 1可知其裂解规律如下:m/z1143 [ M+Na] +的二级质谱主要给出了 4个碎片离子 m/z1099
[ M-CO2 +Na] +、981[ M– glc+Na] +和 819[ M-(glc+glc)+Na] +。m/z1099对应其母离子丢失质
量数为 44Da的中性碎片 , m/z981对应丢失质量数为 162 Da的六碳糖基 , m/z819对应丢失质量数为
324Da的二个六碳糖基 , m/z689是四糖结晶水(均为六碳糖)的 Na加合离子 ,说明化合物含有一个四
糖链 ,这些都与已知化合物 CongmuyenosidesB(2)结构相一致。 m/z981离子进一步碎裂主要产生了
m/z937[ M -glc-CO2 +Na] +、819[ M-(glc+glc)+Na] +、775[ M-glc+glc-CO2 +Na] +、657[ M-
(glc+glc+glc)+Na] +和 527[ glc(H2O)+glc+glc+Na] +5种碎片离子 。m/z937对应其母离子丢失
质量数为 44 Da的中性碎片 , m/z819对 应丢失质量数为 162Da的六碳糖基 , m/z775对应丢失质量数
为 206Da=162(六碳糖)+44(CO2)的碎片 , m/z657对应丢失质量数为 324 Da的二个六碳糖基 , m/z
527对应三糖(均为六碳糖)的钠加合离子 ,也进一步说明化合物 含有 4个六碳糖 。这些质谱特征都与
1222　　 分 析 化 学 第 35卷
CongmunosideB(2)的结构相一致。这一推断也与化合物 的薄层色谱分析 、HPLC色谱分析和 13CNMR
光谱分析 、红外光谱结果相一致 ,从而证实了化合物 的结构为 3-O-[ β-D-glucopyranosyl(1※2)] -[ β-D-glu-
copyranosyl(1※3)-β-D-glucopyranosyl(1※3)] -β-D-glucopyranosylhederagenin,命名为 CongmunosideB(2)。
3.4　13CNMR光谱分析
化合物 为白色粉末状结晶 , mp.283 ～ 284℃, 13CNMR数据与文献 [ 12]值基本一致 。核磁共振
数据见表 1。
表 1　化合物Ⅰ的 13CNMR数据
Table1　13CNMRspectraldataforcompound
C 文献值Literature 化合物ⅠCompoundⅠ 文献值Literature 化合物ⅠCompoundⅠ C 文献值Literature 化合物ⅠCompoundⅠ 文献值Literature 化合物ⅠCompoundⅠ
1 38.7 38.4 3-O-glc 16 23.8 24.3 104.1 104.8
2 26.2 26.2 103.8 106.0 17 46.5 46.5 74.1 75.9
3 83.4 84.1 79.3 79.2 18 42.2 42.3 87.7 87.6
4 42.2 43.1 88.9 88.5 19 46.7 46.8 69.9 66.6
5 48.1 48.1 70.0 70.1 20 31.0 31.0 78.0 78.1
6 18.3 18.2 77.6 78.9 21 34.3 34.0 63.2 63.2
7 33.0 33.6 62.5 62.9 22 33.2 33.9 1-3-glc
8 39.8 39.7 1-2-glc 23 65.0 59.3 105.2 105.1
9 48.1 48.2 103.6 103.7 24 13.4 12.4 75.0 74.4
10 36.9 36.7 76.3 75.6 25 16.0 16.1 78.5 78.7
11 23.9 23.9 78.6 78.9 26 17.5 17.4 71.6 71.5
12 122.6 124.3 72.2 73.0 27 26.0 25.9 78.0 78.2
13 144.9 145.4 77.6 78.1 28 180.2 178.5 62.5 63.3
14 42.0 43.0 62.1 62.9 29 33.6 33.5
15 28.4 29.4 1-3-glc 30 23.7 23.4
　
　　综上所述 ,从辽东楤木叶中分离提取的皂苷类化合物 Ⅰ ,经薄层与 HPLC色谱分析证明其纯度较
高 ,通过多级串联电喷雾质谱分析 ,可简便 、快速鉴定其结构 ,并与红外光谱分析 、13CNMR光谱分析一
致 ,故可确定化合物的分子式为 C54H88O24 ,相对分子质量为 1120,其结构为 3-O-[ β-D-glucopyranosyl
(1※2)] -[ β-D-glucopyranosyl(1※3)-β-D-glucopyranosyl(1※3)] -β-D-glucopyranosylhederagenin。其结
构式为:
故鉴定化合物Ⅰ为 CongmuyenosidesB(2)。
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1223第 8期 张 雷等:辽东楤木叶中皂苷 CongmuyenosideB(2)的分离与鉴定 　　
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SeparationandIdentificationofCongmuyenosideB(2)
FromLeavesofAraliasElate
ZhangLei1 , ChenYan-Ping1 , WangZhi-Cai＊1 , MaXing-Yuan1 , YangFan2 , XuFang-Fei3
1(ColegeofChemistry, JilinUniversity, Changchun130021)
2(ChangchunInstituteofAppliedChemistry, ChineseAcademyofSciences, Changchun130022)
3(Ji′anYishengPharmaceuticalCo.Ltd134200)
Abstract　ThesaponinwasisolatedandcharacterizedfromleavesofAraliaelata.Thelargeporeadsorption
resinandsilicagelcolumnchromatographicmethodwereusedtoextractandseparatethesaponin.HPLCand
TLCwereusedtoanalyzethepurity.Theelectrospraytandemmassspectrometry, combinedwithIRand
NMR, wasusedforthestructuredetermination.ThecompoundwasidentifiedasCongmuyenosideB(2).The
purificationmethodissimple.andtheHPLCmethodhastheadvantageofaccuracyandhighsensitivity, and
theinterferenceofimpurityontheMSandothercharacterizationmethodwasreduced.
Keywords　 LeavesofAraliaelata, congmuyenosideB(2), highperformanceliquidchromatography,
electrospraytandemmassspectrometry
(Received14December2006;accepted14 May2007)
《恶臭的评价与分析 》
　　该书全面地介绍了恶臭评价理论 、暴露评价的数学模式及此模式在城市垃圾和污水风险管理中的应用 , 讨论了恶臭
治理原理 , 并详细论述了畜牧业恶臭物质的资源化问题。书中比较完整地描述了恶臭的嗅觉测定 、仪器分析方法及恶臭
污染源调查的采样布点技术 , 以及恶臭的风险管理和污染控制。该书作者长期从事长江三角洲的污染调查 、控制与资源
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员应对环境恶臭污染事件时作参考。
该书由沈培明 、陈正夫 、张东平等编著 ,化学工业出版社出版 , 定价 38.00元。
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