全 文 ：收稿日期:2013-12-14; 修订日期:2014-06-03
基金项目:“十二五”农村领域国家科技计划课题(No． 201004029)
作者简介:张京京(1989-) ，女(汉族) ，河南鹤壁人，河南大学药学院在读
硕士研究生，主要从事生药活性成分研究工作．
* 通讯作者简介:李 钦(1965-) ，男(汉族) ，河南中牟人，河南大学药学
院教授，博士学位，主要从事中药质量控制和中药新药研究工作．
不同产地和品种柿叶中
熊果酸和齐墩果酸的含量测定
张京京1，2，李 钦1，2* ，陈海莉1，2，韩卫娟3
(1．河南大学药学院，河南 开封 475004; 2．河南大学中药研究所，河南 开封 475004;
3．国家林业局泡桐研究开发中心，河南 郑州 450003)
摘要:目的 测定不同产地和品种柿叶中熊果酸和齐墩果酸的含量。方法 高效液相色谱法，使用 Agilent 1260 高效液相
色谱仪和 Thermo C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm )色谱柱;流动相:甲醇 － 0． 2% 磷酸溶液(87∶ 13) ;柱温:10 ℃ ;检测波
长:210 nm;流速:0． 7 ml /min。结果 上述色谱条件下柿叶中熊果酸、齐墩果酸可完全分离，分离度均大于 1． 5;且斤柿中
熊果酸和齐墩果酸含量均最高，其次为麻甜黑柿 2 中，君迁子(河南)中熊果酸和齐墩果酸含量均最低。结论 不同产地
和品种柿叶中熊果酸和齐墩果酸含量不同，且研究中建立的两者含量测定的方法简单，准确，快捷，重现性很好，可以同
时测定柿叶中熊果酸和齐墩果酸的含量，且提供了柿叶药材质量比较的依据。
关键词:HPLC; 柿叶; 熊果酸; 齐墩果酸; 含量测定
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 01． 013
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)01-0033-02
Determination of ursolic acid and oleanolic acid in the leaves of persimmon from different
areas and different breeds
ZHANG Jing-jing1，2，LI Qin1，2* ，CHEN Hai-li1，2，HAN Wei-juan3
(1． Pharmaceutical College，Henan University，Kaifeng 475004，China;2． Institute of Chinese Materia Medica，
Henan University，Kaifeng 475004，China;3． SFA Paulownia Ｒesearch and Development Center，Zhengzhou
450003，China)
Abstract:Objective To determine the content of ursolic acid and oleanolic acid in the leaves of persimmon from different areas
and different breeds．Methods High performance liquid chromatography(HPLC)． Using Agilent 1260 HPLC and Thermo C18(250
mm × 4． 6 mm，5 μ m)column． methanol － 0． 2% phosphoric acid solution (83:17) ;Column temperature:10 ℃;Detection
wavelength:210 nm;Flow rate∶ 0． 7 ml /min． Ｒesults At the chromatographic condition，the ursolic acid and oleanolic acid in
persimmon leaves can be completely separated，the degree of separation was more than 1． 5;and the contents of ursolic acid and
oleanolic acid in Jin persimmon were the highest，followed by Ma sweet black persimmon 2，the contents of ursolic acid and olean-
olic acid in Diospyros lotus (Henan)were all the lowest． Conclusion The content of ursolic acid and oleanolic acid in the leaves
of persimmon from different areas and different breeds was different，and this determination method is simple，accurate，fast，and of
good repeatability，can be simultaneously determined the content of ursolic acid and oleanolic acid in persimmon leaves，and pro-
vides a basis for comparing the quality of persimmon leaf．
Key words:HPLC; Leaves of persimmon; Ursolic acid; Oleanolic acid; Determine the content
柿叶为柿树科(Ebenaceae )柿树属(Diospyros)植物柿 Dio-
spyros kaki Linn． f ．的干燥叶，中医传统认为，其性味苦、酸、涩、
凉，具有镇咳润肺、清热解毒、利尿降压、抗菌止血等功效。据统
计全世界柿科植物大约有 3 属五百多种，主要分布于热带地区，
其中我国仅有柿属一属，大约有六十多种，主要有柿、油柿和君迁
子等，其中最为常见的是柿，在我国南北各地均普遍栽培。柿叶
化学成分比较复杂，主要含有萜类、酚类、黄酮类等化合物，熊果
酸与齐墩果酸是其中的三萜类化合物，两者极性相似，互为同分
异构体，很难分离，且具有较广的生物活性和很低的细胞毒性。
本文参考相关文献，通过对流动相、柱温与流速的摸索建立了一
种高效液相色谱法可以同时测定柿叶中熊果酸与齐墩果酸含量
的方法，为不同产地和品种柿叶药材提供了质量控制依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 Agilent 1260 高效液相色谱仪;KQ5200DA 型超声波
清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;AB135 － S 型电子分析天平
(百万分之一，瑞士 Mettler Toledo仪器公司) ;VP30 真空泵(北京
莱伯泰科仪器有限公司)。
1． 2 药品与试剂 柿叶［君迁子(湖北)、君迁子(河南)和斤柿于
2012 年 7 月 21 日采自国家林业局泡桐研究开发中心原阳柿种
质资源圃，罗田甜柿 1、罗田甜柿 3、罗田甜柿 4、罗田甜柿 5 和麻
田黑柿 2 于 9 月 4 日采自国家林业局泡桐研究开发中心原阳柿
种质资源圃］;熊果酸和齐墩果酸对照品(购自中国药品生物制
品检定所，批号分别为:110742 － 200517，110709 － 200505，供含
量测定用) ;甲醇(色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司) ;水
为超纯水;其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备 精密称取熊果酸对照品 3． 52 mg 和齐
·33·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 1 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 1 期
墩果酸对照品 2． 12 mg，置于同一 25 ml容量瓶中，加色谱甲醇溶
解，并稀释至刻度，即得。
2． 2 供试品溶液的制备 干燥柿叶样品粉碎后精密称取约 1g，
置于 50 ml带塞锥形瓶中，加入 30 ml 90%乙醇，超声辅助萃取
45 min(超声功率为 200 W) ，真空泵抽滤，滤渣再用 90%乙醇洗
涤 3 次，合并 4 次滤液于 50 ml 棕色容量瓶中，用 90%乙醇定容
至刻度，滤液用有机微孔滤膜(0． 22 μm)过滤，取续滤液即得。
2． 3 色谱条件 Thermo C18柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;流动
相:甲醇 － 0． 2%磷酸溶液(87∶ 13) ;柱温:10 ℃;检测波长:210
nm;流速:0． 7 ml /min。在上述条件下分别取对照品溶液和供试
品溶液 10 μl进样，色谱图结果见图 1，对照品与供试品溶液中熊
果酸(tＲ = 44． 8 min)和齐墩果酸(tＲ = 42． 5 min)的分离度大于
1． 5。
1．齐墩果酸 2．熊果酸
图 1 对照品溶液(A)和供试品溶液(B)HPLC 图谱
2． 4 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液(熊果酸和齐
墩果酸质量浓度分别为 0． 1412 mg /ml、0． 0848 mg /ml)1，2，4，6，
8，10，12 μl，进样，测定熊果酸和齐墩果酸峰面积。以对照品进
样量(μg)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，进
行线性拟合，得回归方程为:
熊果酸 Y = 593． 180 9X + 6． 700 0，r = 0． 999 7;
齐墩果酸 Y = 662． 971X + 10． 926 7，r = 0． 999 1
结果表明熊果酸在 0． 141 2 ～ 1． 694 4 μg，齐墩果酸在
0． 084 8 ～ 1． 017 6 μg 范围内线性关系良好。
2． 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 10 μl，连续重复进样 6
次，结果测得熊果酸、齐墩果酸峰面积积分值的 ＲSD 值分别为
0． 26%、0． 74%，表明 Agilent 1260 高效液相色谱仪精密度很好。
2． 6 重复性试验 精密称取 6 份同一批柿叶［君迁子(湖北) ］样
品粉末，每份约 1 g，分别按“2． 2”项下供试品溶液的制备方法制
备供试品溶液，分别进样 10 μl 测定熊果酸和齐墩果酸含量，结
果熊果酸和齐墩果酸含量分别为 3． 0913 mg /g、0． 6173 mg /g，
ＲSD分别为 0． 40%、0． 40%，表明该法重复性好。
2． 7 稳定性试验 取柿叶［君迁子(湖北) ］供试品溶液，分别于0，
3，6，9，12，18，24 h进样10 μl，测得熊果酸、齐墩果酸峰面积积分值
的 ＲSD分别为 0． 10%，0． 60%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2． 8 加样回收率试验 精密称取熊果酸对照品 1． 98 mg 和齐墩
果酸对照品 0． 51 mg，置于同一 10 ml 容量瓶中，加 90%乙醇溶
解，并稀释至刻度，摇匀，备用。
精密称取 6 份柿叶［君迁子(湖北) ］样品(熊果酸和齐墩果
酸含量分别为 3． 0913 mg /g和 0． 6173 mg /g) ，每份约 1 g，均加入
上述对照品溶液(熊果酸和齐墩果酸对照品溶液浓度分别为
0． 1980 g /L、0． 0510 g /L)1 ml，按“2． 2”供试品溶液的制备方法制
备加样样品溶液，分别精密吸取 10 μl，进样，测定各色谱峰峰面
积，计算回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收率实验结果
成分
样品称量
/g
样品含量
/mg
加入对照品
/mg
实测总量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
熊果酸 1． 0037 3． 1028 0． 1980 3． 2966 97． 88
1． 0023 3． 0985 0． 1980 3． 2953 99． 39
1． 0032 3． 1012 0． 1980 3． 2987 99． 75 99． 36 0． 75
1． 0021 3． 0978 0． 1980 3． 2951 99． 65
1． 0041 3． 1040 0． 1980 3． 3013 99． 65
1． 0002 3． 0920 0． 1980 3． 2897 99． 85
齐墩果酸 1． 0037 0． 6197 0． 0510 0． 6717 101． 96
1． 0023 0． 6188 0． 0510 0． 6701 100． 59
1． 0032 0． 6194 0． 0510 0． 6708 100． 78 100． 88 0． 55
1． 0021 0． 6187 0． 0510 0． 6699 100． 39
1． 0041 0． 6199 0． 0510 0． 6713 100． 78
1． 0002 0． 6175 0． 0510 0． 6689 100． 78
2． 9 样品的含量测定 取不同产地和品种的干燥柿叶粉末先制
备供试品溶液，再按上述色谱条件测定，结果见表 2。
表 2 不同产地和品种柿叶中熊果酸和齐墩果酸的含量
mg·g － 1
产地和品种 熊果酸含量 齐墩果酸含量
君迁子(湖北) 3． 091 3 0． 617 3
君迁子(河南) 3． 023 7 0． 569 9
斤柿 6． 137 4 1． 630 9
罗田甜柿 1 5． 193 6 1． 499 4
罗田甜柿 3 5． 041 3 1． 386 3
罗田甜柿 4 5． 370 6 1． 628 4
罗田甜柿 5 4． 787 7 1． 294 0
麻田黑柿 2 5． 706 8 1． 626 5
3 小结与讨论
3． 1 色谱条件选择 熊果酸和齐墩果酸极性相近，性质也相似，
且常常同时存在于中药中，较难分离，因此在测定两者含量时，必
须使两峰达到完全分离［3 ～ 9］。考虑到在中性环境中三萜酸类易
电离，笔者参考甲醇 － 0． 2%磷酸溶液(87∶ 13)［10］体系，通过试
验摸索，调整甲醇和 0． 2%磷酸溶液的比例，调节柱温和流速，确
定出以甲醇 － 0． 2%磷酸溶液(87∶ 13)为流动相，柱温为 10 ℃，
流速为 0． 7 ml /min时，峰型很好，基线平稳，且达到了分离度的
要求［11 ～ 16］。
3． 2 不同产地和品种柿叶中熊果酸和齐墩果酸测定结果 结果
表明，不同产地和品种柿叶中熊果酸和齐墩果酸的含量范围分别
为 3． 023 7 ～ 6． 137 4 mg /g 和 0． 569 95 ～ 1． 630 90 mg /g，含量差
异较大，其中斤柿中熊果酸和齐墩果酸含量分别为 6． 137 45 mg /
g和 1． 63090 mg /g均为最高，而君迁子(河南)中两者含量均最
低。通过实验结果可知，斤柿最适进一步开发利用。
3． 3 含量测定方法评价 本文采用 HPLC 法同时测定柿叶中
熊果酸与齐墩果酸的含量，样品处理简单，方法稳定性、重现
性好，加样回收率高，可以为柿叶的质量对比优选提供准确、
稳定的方法。
参考文献:
［1］ 姜红波，赵卫星，冯国栋，等．柿叶的主要有效成分及药理作用研究
·43·
时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 1
进展［J］．化工时刊，2010，24(6) :38．
［2］ 吴 睿，陈蔚文，覃仁安，等．柿叶提取物对 SD 大鼠的致畸作用研
究［J］．中药药理与临床，2012，28(2) :93．
［3］ 宋娟娜，李 楠，刘景明，等．反相离子对高效液相色谱法测定柿叶
和柿蒂中的熊果酸与齐墩果酸［J］．中国药师，2012，15(3) :341．
［4］ 周江煜，黄天静，甄汉深，等．正交试验优选柿叶中熊果酸和齐墩果
酸的提取工艺［J］．广西中医药，2011，34(4) :60．
［5］ 邹盛勤，孙 伟．反相高效液相色谱法同时测定柿叶中齐墩果酸和
熊果酸［J］．分析试验室，2009，28(4) :18．
［6］ 黄家伟． HPLC 测定广西柿叶齐墩果酸含量［J］． 亚太传统医药，
2012，8(9) :15．
［7］ 王东东．新疆红枣化学成分与抗氧化活性的研究［D］．新疆医科大
学硕士论文，2011．
［8］ 范杰平，何潮洪，傅鹏飞．柿叶中总三萜的提取以及熊果酸分离、纯
化研究［J］．中国药学杂志，2007，42(16) :1258．
［9］ 王丽峰，彭敬东，刘丽敏．高效液相色谱法同时测定柿叶和连翘中
黄酮和三萜类化合物的含量［J］．分析试验室，2008，27(S1) :176．
［10］ 钟 辉． 不同产地白花蛇舌草中熊果酸和齐墩果酸的含量测定
［J］．中医药学报，2010，38(2) :105．
［11］ 张 瑜，谈献和，崔小兵，等． HPLC 法测定不同产地白花蛇舌草中
熊果酸和齐墩果酸的含量［J］．北京中医药大学学报，2010，33(4) :
274．
［12］ 韦建华，李耀华，蔡少芳，等． HPLC 测定柿子中齐墩果酸与熊果酸
的含量［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16(13) :48．
［13］ 王 蓉，邹时英，李艳清，等．反相高效液相色谱法同时测定车前草
中熊果酸和齐墩果酸［J］．光谱实验室，2011，28(4) :1922．
［14］ 赵韶华，刘敏彦，王玉峰，等． HPLC － ELSD 法同时测定连翘叶中齐
墩果酸和熊果酸［J］．食品科学，2012，33(2) :224．
［15］ 周晓英，王东东，刘宏炳，等． ＲP － HPLC 法测定新疆 6 种红枣中齐
墩果酸和熊果酸的含量［J］．食品科技，2012，37(2) :288．
［16］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
2010:190
收稿日期:2014-02-19; 修订日期:2014-08-06
基金项目:国家自然科学基金(No． 81160509;No． 81360475) ;
江西省教育厅科学技术研究项目(No． GJJ10552) ;
江西省卫生厅中医药科研基金课题(No． 2009A058)
作者简介:任 刚(1976-) ，男(汉族) ，湖南安乡人，江西中医药大学中药
资源与民族药研究中心副教授，博士学位，主要从事天然药物活性成分的
研究工作．
二色波罗蜜叶挥发油化学成分的
气相色谱-质谱联用分析
任 刚1，相恒云1，李文艳2，程 昊3，彭加兵1，元文君1
(1．江西中医药大学中药资源与民族药研究中心，江西 南昌 330004;
2．江西中医药大学护理学院，江西 南昌 330004;
3．江西中医药大学基础医学院·生命科学院，江西 南昌 330004)
摘要:目的 对二色波罗蜜叶挥发油的化学成分进行分析。方法 采用水蒸气蒸馏法从二色波罗蜜叶中提取挥发油，通过
气相色谱 －质谱(GC － MS)联用技术鉴定挥发油中的化学成分，并用气相色谱面积归一法测定了各成分的相对含量。结
果 分离得到 15 个化学组分峰，并鉴定出其中的 12 个成分，占总挥发油含量的 92． 87%。结论 二色波罗蜜叶挥发油主
要成分为植酮(24． 55%)、香叶基丙酮(16． 15%)、柏木脑(13． 21%)、壬醛(9． 06%)、芳樟醇(8． 81%)、甲位紫罗兰酮
(6． 13%)、乙位紫罗兰酮(4． 78%)、alpha －松油醇(4． 03%)、突厥酮(2． 07%)、金合欢基丙酮(2． 04%)、2，3 －二氢 － 2，
2，6 －三甲基苯甲醛(1． 78%)。
关键词:二色波罗蜜; 挥发油; 植酮; 气相色谱-质谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 01． 014
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)01-0035-02
二色波罗蜜 Artocarpus styracifolius Pierre，又名红枫荷、半枫
荷，为桑科波罗蜜属的一种乔木，产于我国广东、海南、广西、云南
等地，木材较软，可作家具用材，果酸甜，可作果酱，傣族用其树皮
染牙齿［1］。民间以其根入药，具有祛风除湿、舒筋活血的功效，
用于治疗风湿关节炎，腰肌劳损，半身不遂，跌打损伤，扭挫伤等
症［2］。目前有关二色波罗蜜化学及药理的研究主要集中在其茎
皮及根部位。研究表明，二色波罗蜜茎皮中的异戊烯基黄酮类成
分具有明显的抗锥虫活性［3］。另外，本课题组前期研究发现二
色波罗蜜根皮中含有多种多元酚性成分，且对大鼠中性粒细胞呼
吸爆发具有明显的抑制活性［4 ～ 6］。然而，二色波罗蜜叶的相关研
究尚未见报道。本研究首次采用气相色谱 －质谱联用技术(GC
－ MS)对二色波罗蜜叶的挥发性成分进行了分析鉴定，并通过气
相色谱面积归一法测定了各成分的相对含量，以期为进一步认识
和利用该植物资源提供依据。
1 材料与仪器
二色波罗蜜叶，2009 年 10 月采集于广西壮族自治区桂林市
大源林场，由任刚副教授鉴定为 Artocarpus styracifolius Pierre 的
叶。采集后自然阴干，贮存于阴凉、干燥处备用。
Agilent 7890A /5975C 型气相色谱 －质谱联用仪(GC － MS)
(美国安捷伦公司) ;色谱柱为 DB － 5 石英毛细管柱(0． 25 μm ×
250 μm ×30． 0 m) ;NHW 型电热套(河南博爱科技有限公司) ;
MP31001 型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)。乙醚
(西陇化工股份有限公司)、无水硫酸钠(西陇化工股份有限公
司)均为市售分析纯。
2 方法
2． 1 挥发油的提取 按 2010 版《中国药典》提取植物精油的方
·53·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 1 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 1 期