全 文 ：山高粱中总生物碱的提取 、鉴定 、分离及总量测定
张乐华1 , 于敬海2 , 董陆陆2 , 张 萱3
(1.哈尔滨医科大学药学院 无机及物理化学教研室;2.有机化学教研室;黑龙江 哈尔滨 150086;
3.哈尔滨医科大学第一临床医学院 检验科 , 黑龙江 哈尔滨 150001)
[ 摘要] 目的 研究山高粱中总生物碱的提取 、鉴定 、分离及总量测定方法。方法 采用回流提取与氯仿萃取相
结合的方法。结果 从山高粱中得到了黄色生物碱晶体。 结论 本实验所采用的从山高粱中提取生物碱的方法
行之有效。
[ 关键词] 山高粱;生物碱;薄层层析法
[ 中图分类号] R284.2 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1000-1905(2002)05-0395-01
[收稿日期] 2002-04-05
[作者简介] 张乐华(1964-),女 ,黑龙江齐齐哈尔人 ,副教授,硕士。
生物碱是天然产的含氮有机化合物 。近年来 ,
对生物碱的研究比较多 ,无论从数量上或生物活性
方面。生物碱是一类存在于中药中的重要化学成
分 ,在治疗疾病和药物发掘方面都起了很大作用 。
截至 1980年 ,从植物中分离出来的生物碱就有5 500
多个 ,其中应用于临床的有 80多个 ,有的还是重要
的药物。本世纪中期以来 ,在抗癌药物研究过程中 ,
更发现一些生物碱具有较好的抗癌活性 ,如长春新
碱 、美登木碱等 。鉴于上述原因 ,本实验从山高粱中
提取出了生物碱 ,并对其进行了初步鉴定 、分离及含
量测定。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器:十万分之一天平(北京光学仪器厂);
超级恒温水箱(上海实验仪器总厂);烘箱;SHB-B95
型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公
司);离心机(天津医疗器械厂 ,4 000r min);薄层层
析板(浙江黄岩化工厂);新华层析用滤纸。
1.1.2 药材:山高粱(1998年从黑龙江省帽儿山采
集地上部分)。
1.1.3 试剂:所用试剂均为国产分析纯 。
1.2 实验方法
将山高粱全草晾干 、粉碎 ,得粗粉。取 30.0000g
粗粉 ,加 10倍量 95%乙醇回流提取 2h 。将所得提
取液于减压下回收溶剂 ,即得生物碱粗品。在所得
生物碱粗品中 ,加入一定量 5%的 HCl搅拌 、溶解 ,
过滤除去不溶于水的亲脂性杂质。将酸性水溶液碱
化后 ,用氯仿萃取 5次 ,回收氯仿 ,即得较纯的总生
物碱 ,称重。取少量总生物碱观察其性状 、颜色 、水
溶性 ,使总生物碱的氯仿溶液分别与 I2 —KI 试剂 、
10%硅钨酸试剂 、10%磷钼酸试剂和饱和苦味酸试
剂反应 ,观察现象 。
薄层层析法分离 、鉴定生物碱[ 1] :将硅胶板
105℃活化30min。以碘蒸气为显色剂 ,氯仿为展开
剂 ,取少量所得较纯的总生物碱 ,加无水乙醇配成溶
液后点样。
2 结果
山高粱中总生物碱的含量为:0.2960g
30.0000g ×100%
≈0.9867%。总生物碱的一般性质见附表 。
附表 总生物碱的一般性质
成分 状态 颜色 I2-KI 10%硅钨酸
10%磷
钼酸
饱和苦
味酸
总 生
物碱
晶体 黄色 CHCl3 层变
为粉红色
没有 明 显
变化
CHCl3 层变
为白色
CHCl3 层变
为淡黄色
经薄层层析法分离所得总生物碱 ,共分离出 6
种成分 ,见附图。
附图 山高梁中分离出 6种生物碱
(下转 397页)
395
第 36卷 第 5期
2002年 10月
哈尔滨医科大学学报
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
Vol.36 , No.5
Oct., 2002
溶液 。结果表明 ,随着亚甲基蓝用量增加 ,配合物的
吸光度值增大 ,但空白值也增大;考虑到空白值不能
太大且应保持较高的灵敏度 ,本文选用亚甲基蓝的
用量为4.0ml。pH 值在 9.0 ～ 9.5之间时 ,配合物的
吸光度达到最大值 ,因此本文选择体系的 pH 值为
9.2 。
附图 双氯芬酸钠与亚甲基蓝所生成配合物在氯仿中的吸收曲线
2.3 配合物的稳定性
取有机相在同一室温条件下测定随时间变化的
配合物的吸光度。结果表明 ,配合物在 5h内其吸光
度值基本不变。
2.4 标准曲线及精密度
依据实验选择的最佳条件绘制标准曲线。双氯
芬酸钠含量在 0.9 ～ 4.0μg ml范围内与吸光度值呈
线性关系 ,其回归方程为 A=4.210C -0.798 ,其相
关系数为 r=0.9198 ,配合物的摩尔吸光系数ε655=
4.6×104 ,检出限为 0.40μg ml。进行 11 次平行测
定 ,相对偏差为 2.31%。
2.5 标准加入实验及药品中双氯芬酸钠的测定
取一市售双氯芬酸钠片剂(标识规格为每片
25mg),用少量水磁力搅拌溶解 ,滤去不溶物 ,将滤液
移入 500ml容量瓶中 ,以水定容 。取该溶液 1.0ml ,
按实验方法进行测定 ,测定结果见附表。
附表 药品中双氯芬酸钠的测定结果及标准加入实验
药品规格
(25mg 片)
取样量
(ml)
测定结果
单次测定
(μg 25ml)
平均值
(μg 25ml)
折合含量
(mg 片)
相对标准偏差
(%)
标准加入量
(μg 25ml)
回收率
(%)
双氯灭痛片
(定容液) 1.0
49.3 , 47.8 ,
48.2 , 47.9
49.2 , 48.3
48.4 24.2 1.8 50.0 95.6
3 讨论
本法相对于其他的分光光度法具有试剂价廉易
得 ,结果也较为准确的特点 。亚甲基蓝在氯仿中对
测定有一定的干扰 ,因此 ,要控制其用量 。如果在保
证测定的精密度的前提下 ,控制好用量 ,其干扰很
小 ,用试剂为空白可消除 。从附图中可以看出 ,方法
的回收率较高 ,说明对实际样品的测定是可行的 ,可
用于实际样品中双氯芬酸钠的测定。
[参考文献]
[ 1] 黄声勇.紫外分光法测定复方双氯灭痛注射液的含量[ J] .药
物分析杂志 , 1990, 10(4):242.
[ 2] 蔡丽玲.三波长光度法测定凝胶剂中 DS的含量[ J] .中国医药
工业杂志 , 1994 ,29(3):228.
[ 3] Julio C , Botello , Guadalupe Caballero.Determination of the diclofenac
sodium with spectrophotometry[ J] .Talanta , 1995, 42:105.
(上接 395页)
3 讨论
通过本实验发现山高粱中不仅含有《中药大词
典》[ 2] 中记载的黄酮类化合物 ,还含有生物碱。为此
探索出从山高粱中提取生物碱比较适合的方法。生
物碱和它的盐都能溶解于甲醇或乙醇 ,但甲醇毒性
较大 ,故本实验采用 95%乙醇回流提取生物碱 ,然
后将所得到的提取液于减压下回收溶剂得到生物碱
粗品 ,但此时得到的生物碱粗品中含有亲脂性杂质 ,
故利用生物碱能溶于酸性水的性质 ,将生物碱粗品
以酸水溶解 ,过滤除去不溶于水的亲脂性杂质 ,再将
酸水溶液碱化使生物碱游离后用氯仿萃取 。实验结
果是由 30.0000g 山高粱全草中得到了0.2960g 总生
物碱的黄色晶体。证明本实验所采用的从山高粱中
提取生物碱的方法行之有效 。将得到的总生物碱经
薄层层析进行分离 ,共分离出 6种成分 ,说明山高粱
中至少含有 6种生物碱 。
[参考文献]
[ 1] 肖崇厚.中药化学[M] .上海:上海科学技术出版社 , 1987.71.
[ 2] 江苏新医学院.中药大词典[M] .上海:上海人民出版社 , 1977.
397第 5期 安 哲 ,等.亚甲基蓝分光光度法测定双氯芬酸钠