全 文 ：梅花冰片 3种剂型体外抗菌活性研究＊
★　黄晓敏　廖玲军　曾松荣　郑秋华　曾晓君　(韶关学院英东生物工程学院　韶关 512005)
摘要:目的:比较梅花冰片 3种不同剂型的体外抗菌活性。方法:采用平板打孔法 , 微量琼脂对倍稀释法 ,测定梅花冰片的 3 种
不同剂型的抗菌活性。结果:梅花冰片对金黄色葡萄球菌 、耐药性金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌均有较强的抑菌作用 , 其
中油剂的抗菌活性最强 , 对前 2 种菌的最低抑菌浓度(MIC)为 0.625 mg/m L , 其次是粉剂 ,MIC 为 1.25 mg/ mL;对白色葡萄
球菌 , 油剂的 MIC 为 0.312 5 , 粉剂为 0.625。结论:梅花冰片油剂 、粉剂具有良好的体外抗葡萄球菌活性 , 但还需进行药物配
方和临床用药研究。
关键词:梅花冰片;剂型;体外抗菌活性;M IC
中图分类号:R 965　　文献标识码:A
　　梅花冰片 (Bo rneolum),为天然右旋龙脑(d-
Bo rneol),常用的异名还有龙脑 、冰片 、正梅片 、机
片 、龙脑香等 。它是一种名贵的中药材和辛香料 ,为
龙脑香科植物龙脑香树脂中析出的天然结晶化合
物 ,如砍取其树干及枝条 ,切碎 ,经高压蒸馏 、冷却后
而凝成的结晶物为白色半透明粉末状结晶 ,气清香 ,
味辛 、苦 ,性凉 ,具挥发性和开窍消炎止痛痒的功
效[ 1] 。龙脑香科植物适应在热带雨林地区生长 ,分
＊广东省韶关市 2003年重点科研计划项目(No.2003.504-080184)
作者简介:黄晓敏 ,教授 , 主要从事微生物学教学和研究工作。
胸腺 、脾脏指数测量。
2.2　胸腺和脾脏指数的测定　在处死小鼠前先称
量每只小鼠的重量 ,然后将小鼠断颈处死后 ,立即取
其离体胸腺和脾脏 ,用万分之一电子分析天平分别
称量其湿重。胸腺和脾脏指数的计算公式为:胸腺
或脾脏指数=湿重(mg)/体重(g),然后用 spss统
计软件处理测量结果 ,进行方差分析 ,比较组间差
异 。结果见表 1。
表 1　六味地黄汤及白介素-2 对
小鼠胸腺和脾脏指数的影响(x±s)
分组 N/只 胸腺指数 脾脏指数
①正常组 12 2.8962±0.5881＊＊ 5.1232±1.0368＊＊
②造型组 12 1.6977±0.5274 2.8327±0.8205
③六味地黄汤低剂量组 12 1.7435±0.3357 2.9916±0.7300
④六味地黄汤高剂量组 12 2.7708±0.6159＊＊■■ 5.0138±1.0365＊＊■■
⑤白介素-2组 12 2.0604±0.5834 3.8086±1.1601＊
　　注:＊与②比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05;■与⑤比较 , ■■P
<0.01 , ■P<0.05。
3　讨论
我们通过测定胸腺和脾脏指数结果表明 ,六味
地黄汤具有抗胸腺和脾脏萎缩的作用 ,而且呈现剂
量效应关系 ,且高剂量组效果优于淋巴细胞生长因
子白介素-2组作用效果。由于淋巴细胞凋亡与胸
腺和脾脏萎缩的密切关系 ,上述结果提示六味地黄
汤可能具有抑制糖皮质激素引起的淋巴细胞凋亡的
作用 。为进一步验证该方具有淋巴凋亡的干预作
用 ,提供了有力的佐证。
六味地黄汤作为滋阴补肾的代表药物 ,在临床
上治疗肾阴虚证的疗效是肯定的 。而肾阴虚证患者
常伴有肾上腺皮质分泌功能亢进和糖皮质激素水平
升高 。糖皮质激素水平升高常引起机体免疫功能的
紊乱 ,从而导致机体疾病的发生 。而这类疾病与淋
巴细胞的凋亡有着重要的关系。我们通过实验研究
也证实了该方对免疫系统的淋巴细胞凋亡具有明显
的拮抗作用。但我们的研究只是做了一些初步的定
性探讨 ,其半定量或定量的检测以及其作用部位的
机理需进一步研究和探讨。如在某些方面我们的研
究还不够深入 ,如流式细胞仪的定量分析 ,以及通过
生化的手段定位某些凋亡相关基因(如 fas 、bcl-2 、
p53等)的作用部位和含量测定(如 Ca2+离子等在
细胞内外含量变化等)需进一步深入研究。相信随
着我们技术的进步和研究手段的不断深入将来完全
能够完成这些工作 。
(收稿日期:2004-10-18)
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江西中医学院 学报 2 0 0 5 年 2 月第 1 7 卷第 1 期
JOURNAL OF JIANGXI UNIVERS ITY OF TCM 2005 Vol.17 No.1
　
○实验研究○
布于南洋群岛 ,广东省韶关地区也有梅花冰片树的
栽种 ,并有专门进行梅花冰片提取的加工工艺厂家 。
从梅花冰片的物理性质可以知道 ,其具有升华的物
性 ,因此不少名贵中成药将梅花冰片作为主要药物
成分之一 ,如冰硼散 、六神丸 、牛黄解毒丸等 ,其功效
主治:开窍醒目 ,清热止痛 ,明目退翳 。内治用于热
病神昏 、痉厥 、中风痰厥 、中风昏迷 ,外用治目赤 、口
疮 、咽喉肿痛 、耳道流脓。其抗菌功能有少量报道 ,
但无药敏的定量报道 。因此 ,我们选用梅花冰片作
为主要的研究对象 ,并对其 3种常见剂型(油剂 、粉
剂和水剂)的体外抗菌活性进行了初步研究比较 ,现
报告如下:
1　实验材料
1.1　试验用药和试剂
梅花冰片生药产于广东省韶关市乳源瑶族自治
区工业园 ,梅花冰片油剂由韶源科技开发有限公司
乳源芳香油精炼厂出品 ,药品:神应油喷雾剂 ,批号
20001210 ,经广东省药品检验所检测合格(药品检验
报告书编号 20010435)。粉剂由韶关市中医院提
供 。梅花冰片水剂由韶关学院微生物学实验室制
备 ,制备方法以 40 g 生药与 400 mL95%乙醇的比
例配合 ,采用乙醇回流提取法获得。把梅花冰片的
粉剂和水剂用肉汤培养基稀释成 1∶10的浓度 ,以此
作为原液 ,油剂以神应油喷雾剂用乙醚稀释成 1∶
10 ,采用 0.08 mPa 的蒸汽压 , 1 000 ℃的温度灭菌
15分钟备用。
1.2　菌悬液的制备
质控菌株金黄色葡萄球菌(S taphylococcus au-
reus)ATCC25923 、 大 肠 埃 希 氏 菌 (E.coli)
ATCC25922来源于中国药品生物制品检定所。临
床分离的金黄色葡萄球菌(Staphy lococcus aureus)、
白 色葡 萄 球菌 (S. albus)、福氏 痢 疾 杆菌
(S.sonnei)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、耐药金
黄色葡萄球菌(resistance of Staphy lococcus aureus)、
伤寒 沙门菌 (S.typhi)、甲型副 伤寒 沙门菌
(S.paratyphi A )、 乙 型 副 伤 寒 沙 门 菌
(S.paratyphi B)、丙型副伤寒沙门菌(S.paratyphi
C)、普通变形杆菌(P.vulgaris)、大肠埃希氏菌
(E.coli)、肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)12种
受试菌菌种 ,来源于粤北人民医院和韶关市第一人
民医院检验科。将液氮保存的质控菌株和临床分离
的实验菌株复活后 ,分别挑选长势较好的受试菌接
种到肉汤培养基 ,置于 37 ℃恒温培养箱培养 18 ～
24小时 ,取适量的菌悬液用肉汤稀释 1 000倍 ,以平
板活菌计数法定量其菌液浓度为 106 CFU/mL ,用
于平板打孔药敏试验和 M IC 的测定。
1.3　培养基
水解酪蛋白琼脂(Mueller-Hinton 培养基):用
于平板打孔药敏试验。肉汤培养基:用于受试菌的
稀释 。营养琼脂培养基:由杭州生物试剂厂生产 ,批
号 010408 ,用于微量琼脂倍比稀释法测定 M IC 。
1.4　仪器设备
恒温培养箱(上海医用仪器设备二厂产品),美
国 SHELLAB 水套式 CO2 培养箱(型号 2306-2),
SA-CJ-2FD超净工作台(苏州净化设备有限公司产
品),高压蒸气灭菌器(上海核子医用仪器厂产品),
光学显微镜油镜等 。
2　方法与结果
2.1　实验方法
本次实验分两步进行 ,第一步用平板打孔药敏
法进行初筛[ 2] ,即从受试的 12种菌中挑选出对梅花
冰片药液敏感的细菌。然后将初筛中明显受梅花冰
片药液抑制的受试菌进一步细筛 ,即用微量琼脂倍
比稀释法测定其 MIC[ 3] 。
2.1.1　平板打孔药敏法　在直径 9 cm 灭菌培养皿
中加入 19 mL 已融化冷却至 50 ℃的 Mueller-Hinton
培养基 ,如此制备 14(受试菌数)×3(梅花冰片剂型
数)×3(实验平行做3组)共 126个培养基平皿 ,立即
旋转混匀 。待琼脂凝固后 ,取 106 CFU/mL的菌悬液
均匀的涂布到培养基上 ,用外径 6 mm 的灭菌打孔器
在培养基上打 4个等距离的孔 ,注意不要打穿 ,以免
漏液。用微量加样器分别吸取 50 μL 各种剂型的梅
花冰片原液加入孔内 ,一孔作空白对照 。立即置于
37 ℃恒温培养箱培养 24小时。量取抑菌圈的直径 ,
以 3次平均值为该剂型的抑菌圈直径。
2.1.2　微量琼脂倍比稀释法测 M IC　将平板打孔
药敏实验中明显受梅花冰片药液抑制的受试菌挑选
出来 ,采用微量琼脂对倍稀释法测定其 M IC 。其具
体操作是:在 96孔聚乙烯板上 ,用 80 ℃加热融化营
养琼脂培养液 ,将药液稀释至 10 ～ 0.156 2 mg/mL ,
用微量加样器加受试菌液(106 CFU/mL)5 μL 于每
一个培养基孔中 ,置于 37 ℃恒温培养箱培养 24小
时 ,以不长菌落的最高药物稀释度为该药液对细菌
的最低抑菌浓度(M IC),平行做 3次实验 ,以 2次或
3次相同结果为准 。根据受试菌的 M IC ,利用回归
方程求的 M IC50 、M IC90 。结果梅花冰片药液的 3种
剂型对金黄色葡萄球菌 、耐药金黄色葡萄球菌和白
色葡萄球菌具有良好的抑菌作用 。
2.2　实验结果
在受试的 14种常见致病菌的标准株和临床株
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江西中医学院学报　2005 年第 17 卷第 1 期
　
○实验研究○
中 ,对梅花冰片药液敏感的有金黄色葡萄球菌 、耐药
金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌 ,抑菌效果随着药
物浓度的降低而降低 ,抑菌圈直径≥3.25 mm ,梅花
冰片对其它受试菌药敏不明显 。初筛后进一步研究
梅花冰片不同剂型对金黄色葡萄球菌 、耐药金黄色
葡萄球菌和白色葡萄球菌的 M IC ,结果是梅花冰片
油剂的抗菌活性最好 ,其次是粉剂和水剂 。实验结
果见表 1 、2。
表 1　梅花冰片 3 种剂型
对受试菌抑菌圈的直径(x±s) mm
受试菌株 抑菌圈油剂 粉剂 水剂
金葡菌 ATCC25923 6.25±0.3 5.75±0.2 4.45±0.3
金黄色葡萄球菌 6.15±0.3 5.60±0.2 4.40±0.3
耐药性金黄色葡萄球菌 5.17±0.3 4.27±0.2 3.25±0.3
白色葡萄球菌 6.03±0.2 5.45±0.3 5.28±0.3
　　注:x 为抑菌圈直径 3次平行实验的平均值 , s 为标准差。
表 2　琼脂对倍稀释法
测梅花冰片 3 种剂型的 MIC mg/m L
受试菌株 油剂
M IC MIC50 MIC90
　 粉剂
MIC M IC50 MIC90
　 水剂
MIC MIC50 M IC90
金葡菌 ATCC25923 0.625 0.302 0.521 　 1.25 0.50 1.147 　 2.50 1.25 2.154
金黄色葡萄球菌 0.625 0.348 0.598 　 1.25 0.535 1.077 　 2.50 1.39 2.362
耐药性金黄色葡萄球菌 0.625 0.561 0.625 　 1.25 0.731 1.156 　 2.50 1.44 2.405
白色葡萄球菌 0.3125 0.245 0.304 　 0.625 0.332 0.586 　 1.25 0.610 1.115
3　讨论
经现代化学实验研究证明:梅花冰片主含天然
右旋龙脑 ,同时含有 β-榄香烯 、石竹烯等倍半萜及齐
墩果酸 、麦珠子酸 、积雪草酸 、龙脑香醇酮 、龙脑香二
醇酮 、古柯二醇等三萜化合物 。其抗菌机理是通过
使细菌细胞壁肽聚糖层增厚 、有空泡 ,药物可能透过
细胞壁作用于菌体细胞膜 ,改变膜的通透性 ,使药物
进入细胞内 ,作用于线粒体膜上 ,使其受到损伤 ,从
而达到抗菌的目的[ 4] 。实验证明梅花冰片对金黄
色 、白色葡萄球菌有明显的抗菌作用。金黄色 、白色
葡萄球菌为革兰氏染色阳性球菌 ,它在自然界中无
处不在 ,是人类化脓性感染中最常见的病原菌 ,在自
然界具有较强的抵抗力 ,特别是对热的抵抗力仅次
于芽孢菌 ,而金黄色葡萄球菌又是对抗生素耐药率
发生频率最高的细菌之一 ,而一旦产生耐药性 ,临床
治疗非常棘手 。因此 ,在“崇尚绿色 ,回归自然”的今
天 ,梅花冰片作为名贵中成药具有升华作用的主要
药物成分 ,其抗菌效能亦起到了关键的协同作用。
目前中草药抗菌效能因其毒副作用小 、菌株耐药性
频率低 、应用前景广泛而越来越受到人们的关注和
青睐 。
目前 ,还没有梅花冰片对临床常见细菌药敏定
量实验的相关报道 。本次实验选用梅花冰片作为主
要的研究对象 ,并对其 3种常见剂型的抗菌效能进
行定性和定量分析 ,结果发现:梅花冰片的油剂与粉
剂和水剂的抗菌实验所得数据 ,通过方差分析具有
显著差异 ,油剂的抗菌效能最好 ,粉剂次之;抗菌效
果的差异可能与其提取工艺有关。此外 ,可在梅花
冰片单味药的基础上 ,进行临床用药研究 ,如与其他
抗菌中草药进行配伍制成复方制剂和配制消毒液
等 ,将更有效的提高梅花冰片的药用价值。
参考文献
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2003.667
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19(3):571
(收稿日期:2004-09-06)
In Vitro Antibacterial Activity of Bomelum to three Kinds of Drug
Huang Xiao-min , liao ling-jun ,Zeng Song-rong ,Zheng Qiu-hua ,Zeng Xiao-jun
(Yingdong College of Bioengineering , Shaoguan University , shaoguan 512005 ,China)
Abstract:Objective:To compare the in vit ro antibacterial activity of Bomelum to three kinds of drug.Meth-
ods:The sensitivity of Bomelum to three kinds of drug against bacteria f rom clnical specimens were determined
the methods of beating holes and standard agar dilution in vi tro.Results:The Bomelum has higher active against
S taphylococcus aureus 、 S.albus and the resistance of Staphy lococcus aureus , The oil pharmaceutical w as the
highest active , it is 0.625 mg/mL that it is the minimal inhibito ry concentration(MIC), secondly it is pow der ,
The MIC was 1.25 mg/mL。Conclusion:The oil pharmaceutical and powder of Bomelum had potent in vi tro an-
tibacterial Staphylococcus activities , but , the further research of the prescription and the using in clinic are re-
quired。
Key words:Bo rneolum ;Three kinds of drug;In vit ro antibacterial activity ;Minimal inhibi tory concentra-
tion(M IC)
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黄晓敏等:梅花冰片 3 种剂型体外抗菌活性研究
　
○实验研究○