全 文 ：浙江理工大学学报（自然科学版），第３５卷，第４期，２０１６年７月
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｓｃｉ－Ｔｅｃｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）
Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．４，Ｊｕｌ．２０１６
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－３８５１．２０１６．０７．０２７
收稿日期：２０１６－０１－１９
基金项目：国家自然科学基金项目（８１３７３９０８）；浙江理工大学科研启动项目（１４０４２００８－Ｙ）
作者简介：王　静（１９９０－），女，河北石家庄人，硕士研究生，主要从事三叶青快繁与指纹图谱方面研究。
通信作者：梁宗锁，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｚｓ＠ｍｓ．ｉｓｗｃ．ａｃ．ｃｎ
珍稀药用植物三叶青的高效微繁体系研究
王　静１ａ，郭万里１，孔亚泽１ａ，薛亦豆１ａ，许鑫瀚２，梁宗锁１ｂ
（１．浙江理工大学，ａ．生命科学学院；ｂ．植物次生代谢调控浙江省重点实验室，杭州３１００１８；
２．杭州三叶青农业科技有限公司，杭州３１００１８）
　　摘　要：三叶青（Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ）是我国南方民间常用药，具有清热解毒、消炎、抗肿瘤
等功效。社会需求导致其野生资源匮乏，并且人工繁育的研究滞后，严重阻碍了三叶青的规模化种植，加重了供需
矛盾，限制了产业链的发展。文章以三叶青带腋芽的茎段为外植体材料，诱导侧枝的发生，通过继代、生根、移栽等
过程，建立了三叶青高效微繁体系。结果表明，带腋芽的半木质化茎段（３～８节）作为外植体好于带芽茎尖；最佳腋
芽诱导培养基为 ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ＋０．０２５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ；最佳侧枝增殖培养基为 ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ＋０．０２５
ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ，生长势下降时加入０．０２５ｍｇ／Ｌ　ＧＡ；最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ；移栽成活率可达到
９０％以上。该体系激素浓度配比低，操作简便，繁殖效率高等特征适合三叶青种苗的规模化和规范化育苗。
关键词：三叶青；茎段；腋芽；侧枝；微繁
中图分类号：ＴＳ１９５．６４４　 文献标志码：Ａ　 文章编号：１６７３－３８５１（２０１６）０４－０６３６－０７　 引用页码：０７０７０４
０　引　言
三叶青 （Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ　Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ
Ｇｉｌｇ），又名三叶崖爬藤、金线吊葫芦、蛇附子等，为
葡萄科崖爬藤属多年生藤本植物［１－２］。广泛分布于
长江以南各省份，主要有浙江、江西、福建、广西、云
南等地区。其生长微环境主要是山坡、林下的灌丛
中或山谷溪边林下的岩石缝中，海拔高度一般为
３００～１３００ｍ［３］。三叶青在我国南方为民间常用
药，主要以块根入药，具有清热解毒、活血化瘀等功
效，民间主要用于治疗小儿高热惊厥、肺炎、跌打损
伤等［２］。近年来，人们发现三叶青在抗氧化［４］、抗肿
瘤［５］、提高免疫力［６］及抗病毒等方面也有显著的疗
效［７］。由于受到市场欢迎，野生三叶青被无节制的
人为采挖，自然资源迅速枯竭。另外，三叶青对生长
环境要求苛刻，生长发育缓慢，其扦插繁殖效率较
低，从而加剧了三叶青野生资源保护和社会需求之
间的矛盾。目前，钟毓倩［８］采用茎尖，钱丽华［９］、
Ｊｉａｎｇ等［１０］、史清英［１１］、邵骏骅等［１２］采用带芽茎段
均成功诱导了三叶青的丛生芽，获得试管苗。然而，
腋芽丛生增殖方法中使用的激素浓度较高，苗多次
继代后长势较弱，需进行壮苗处理，且其愈伤组织容
易褐化导致死亡，不适合规模化和规范化育苗。因
此，本研究采用微型扦插法，以半木质化的带腋芽茎
段为外植体，在总激素降低的前提下，探索最佳的激
素配比组合，诱导侧枝的生长，优化继代、生根和移
栽等程序，建立了操作简便且增殖率高的高效微繁
体系，适用于三叶青种苗的规模化和规范化培育，具
有重要的生产价值和实践意义。
１　材料与方法
１．１　试验材料
２０１４年６月，三叶青植株取自浙江省杭州市余
杭区杭州市三叶青农业科技有限公司种苗基地，种
植在浙江理工大学浙江省植物次生代谢调控重点实
验室人工气候室中预培养。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体处理
选择三叶青新长出的茎段（茎尖为１～２节，半
木质化茎段为３～８节），剪取带腋芽的茎段１．５～
２．０ｃｍ，流水冲洗１～２ｈ，洗洁精清洗５ｍｉｎ，洗净。
移至无菌超净台，先用７０％乙醇洗３０ｓ，无菌水冲
洗，再用０．１％的升汞灭菌８～１０ｍｉｎ，期间轻轻震
荡，最后用无菌水冲洗４～５次，每次５ｍｉｎ。由此
获得无菌材料。
１．２．２　培养条件
培养基：以 ＭＳ或１／２ＭＳ为基本培养基［１３］，附
加不同种类、浓度的生长素或细胞分裂素（包括
６ＢＡ、ＮＡＡ、ＩＢＡ等）。初代及继代培养基的蔗糖含
量为３％，生根培养基的蔗糖含量为２％，琼脂为
０．５４％，ｐＨ值为５．８～６．０。１１５℃ 高压蒸汽灭菌
１５ｍｉｎ。环境条件：光周期为１４ｈ光照，１０ｈ黑暗，
光照强度为２０００～４０００Ｌｘ，温度为（２５±２）℃。
１．２．３　初代培养
选取嫩枝上带芽茎尖、带腋芽的半木质化茎段
进行初培养，将消毒处理后的带芽茎段置于灭菌的
牛皮纸上，切去部分生理下端，留下带腋芽的１．０～
１．５ｃｍ的茎段，接种到相应的初代培养基上（表１，
Ｃ１—Ｃ１６），露出腋芽。每个处理接种３０个外植体。
培养至４５ｄ时观察并统计生长情况。
１．２．４　继代培养
选取长势比较一致的初代无菌苗，将其上端侧
枝分离，剪取２．０ｃｍ左右带腋芽且带３～６片叶片
的茎段，转到相应继代培养基中（表２，Ｊ１—Ｊ１１）。
每个处理接种５０个外植体，培养４５ｄ，观察并统计
其生长及增殖情况。
１．２．５　生根培养
随机选取继代无菌苗，将分枝的茎段分离，选取
３．０ｃｍ左右带腋芽的茎段，留有３～６片顶端叶片，
插入不同的生根培养基中（１／２ＭＳ ＋ ０～４ｍｇ／Ｌ
ＩＢＡ或ＮＡＡ）。每个处理接种５０个外植体，培养
１５ｄ，观察其生根情况。
１．２．６　驯化与移栽
驯化：将生根培养基中的无菌苗从组织培养室
移至人工气候室，盖子打开，加水至培养基表面１．０
ｃｍ左右，光照１４ｈ，驯化３～５ｄ。
移栽：将蛭石∶草炭土以２∶１比例混合，高压
灭菌锅灭菌后铺满育种盘。将驯化之后生长良好的
苗取出，轻轻洗去根上的培养基，剪去靠下端的叶
片，仅留取顶端叶片即可，移至育种盘中并保湿，置
于人工气候室培养。１０ｄ后揭去塑料盖，３０ｄ观察
生长情况并统计成活率。
２　结　果
２．１　初代培养
２．１．１　外植体的选择
不同外植体材料（带芽茎尖、带腋芽的半木质化
茎段）在添加不同浓度６ＢＡ的 ＭＳ培养基中进行初
培养，发现茎段的腋芽诱导出的无菌苗都明显较茎
尖诱导的长势好（图１）。带腋芽茎段诱导的无菌苗
分枝较多，叶片较多，较大，更健壮，且茎尖诱导的无
菌苗随着６ＢＡ浓度的增加叶片出现严重退化，而茎
段诱导的虽叶片变小但少有退化。这可能是因为不
同部位的茎段上的腋芽体内的激素水平不同。因
此，我们选用半木质化带腋芽的茎段作为外植体进
行初代培养。
图１　不同外植体材料在初代培养基中的生长情况
注：Ａ、Ｂ、Ｃ为茎尖分别在１．０、２．０、３．０ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ的 ＭＳ培养基；
Ｄ、Ｅ、Ｆ为茎段分别在１．０、２．０、３．０ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ的 ＭＳ培养基。
２．１．２　不同激素浓度对腋芽诱导的影响
消毒后的腋芽茎段在初代培养基中培养１０ｄ
左右，腋芽开始萌动（图２Ａ），３０ｄ左右成长为无菌
小苗（图２Ｂ），４５ｄ左右生长旺盛（图１Ｄ、Ｅ、Ｆ）。研
究发现，在１／２ＭＳ基本培养基中，加入少量 ＮＡＡ
（０．０２５ｍｇ／Ｌ）对初代苗的生长有显著促进作用，随
着６ＢＡ浓度增加，平均株高出现先增加后降低的趋
势，其中当６ＢＡ达到１．５ｍｇ／Ｌ时，初代苗平均株
７３６第４期 王　静等：珍稀药用植物三叶青的高效微繁体系研究
高达到最高（４．６±０．８４ｃｍ）（图３Ａ）；在 ＭＳ基本培
养基中，加入少量 ＮＡＡ（０．０２５ｍｇ／Ｌ）对初代苗株
高有一定抑制作用，但对其叶片过小有一定改善作
用，其中，６ＢＡ浓度增加时，株高逐渐增高并与不含
ＮＡＡ的差距缩短，当达到１．５ｍｇ／Ｌ时，与不含
ＮＡＡ的株高并无显著性差异（图３Ｂ、表１）；在不含
ＮＡＡ激素时，与１／２ＭＳ基本培养基相比，ＭＳ对株
高有明显促进作用，而加入少量ＮＡＡ后，ＭＳ却对
株高有一定的抑制作用，不过，随着６ＢＡ浓度的增
加，其抑制作用逐渐降低（图３Ｃ、Ｄ）。此外，１／２ＭＳ
中的无菌苗长势比 ＭＳ慢，加入少量ＮＡＡ，愈伤有
一定的增大，叶片也有一定的增多增大（表１），因此
选用 Ｃ１５（ＭＳ＋１．５ ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ＋０．０２５ ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ）作为初代苗的最佳诱导培养基。
Ａ：带腋芽的茎段；Ｂ：诱导的无菌苗；Ｃ：继代小苗；Ｄ：增殖苗；Ｅ：３０ｄ生根；Ｆ：驯化；Ｇ：移栽至温室；Ｈ：移栽至大田
图２　三叶青微繁体系
图３　培养基对初代苗高度的影响
８３６ 　　　　　　　　　　　　　　浙　江　理　工　大　学　学　报 ２０１６年　第３５卷
表１　三叶青初代组培苗在不同培养基中的生长情况
编号 基本培养基 ６ＢＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） ＮＡＡ／（ｍｇ·Ｌ－１） 生长情况
Ｃ１　 １／２ＭＳ　 ０．５　 ０ 愈伤较小，叶较多，芽较少，长势较慢
Ｃ２　 １／２ＭＳ　 １．０　 ０ 愈伤较小，叶较多，芽适中，长势较慢
Ｃ３　 １／２ＭＳ　 １．５　 ０ 愈伤较小，上端叶较小，芽聚集，长势较慢
Ｃ４　 １／２ＭＳ　 ２．０　 ０ 愈伤较小，叶小、有畸形，芽聚集，长势较慢
Ｃ５　 １／２ＭＳ　 ０．５　 ０．０２５ 愈伤增大，叶较多、较大，芽较少
Ｃ６　 １／２ＭＳ　 １．０　 ０．０２５ 愈伤较大，叶较多、上段叶较大，芽适中
Ｃ７　 １／２ＭＳ　 １．５　 ０．０２５ 愈伤较大，叶较多、上段叶较小，芽聚集
Ｃ８　 １／２ＭＳ　 ２．０　 ０．０２５ 愈伤较大，叶较小，芽聚集较多
Ｃ９ ＭＳ　 ０．５　 ０ 愈伤较小，叶较多、较大，芽较少
Ｃ１０ ＭＳ　 １．０　 ０ 愈伤较小，叶较多，上段叶较小，芽适中
Ｃ１１ ＭＳ　 １．５　 ０ 愈伤较小，上段叶较小，芽较多
Ｃ１２ ＭＳ　 ２．０　 ０ 愈伤较小，上端叶小、畸形，芽聚集
Ｃ１３ ＭＳ　 ０．５　 ０．０２５ 愈伤增大，叶较大，芽较少
Ｃ１４ ＭＳ　 １．０　 ０．０２５ 愈伤增大，叶较多，芽适中
Ｃ１５ ＭＳ　 １．５　 ０．０２５ 愈伤较大，中下段叶较大，芽较多
Ｃ１６ ＭＳ　 ２．０　 ０．０２５ 愈伤较大，下段叶较大，芽较多
　　
２．２　继代培养
将外植体诱导培养的无菌苗侧枝切分，接种到
继代培养基中（图２Ｃ、Ｄ），培养４５ｄ后以无菌苗生
长情况及侧枝的增殖情况为主要参考依据（表２）来
筛选最佳增殖培养方案。
当培养基为Ｊ１—Ｊ５时，随着６ＢＡ浓度的增加，
继代苗的平均株高逐渐降低，而其平均增殖系数先
增加后降低，在６ＢＡ浓度为１．２５ｍｇ／Ｌ时达到最
高（５．４８ｃｍ），但叶片较小，有部分退化现象。当
６ＢＡ为１．０～１．５ｍｇ／Ｌ时，其增殖系数并无显著性
差异。综合考虑株高、增殖系数、愈伤及叶片大小，
当６ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，其长势及增殖情况
最佳。
当培养基为Ｊ６、Ｊ３、Ｊ７时，随着 ＧＡ 浓度的增
加，继代苗的平均株高逐渐升高，但平均增殖系数逐
渐降低，并无显著性差异。当 ＧＡ 为０．０２５ｍｇ／Ｌ
时，长势及增殖情况最佳。
当培养基为Ｊ８、Ｊ３、Ｊ９时，随着ＮＡＡ浓度的增
加，继代苗的平均株高逐渐降低，而其增殖系数先增
加后降低，愈伤逐渐增大，叶片逐渐变多变大。当
ＮＡＡ为０．０２５ｍｇ／Ｌ时，长势及增殖情况最佳。
当培养基为Ｊ１０、Ｊ１１、Ｊ３时，随着 ＭＳ强度的增
加，继代苗的平均株高和增殖系数先略降低后升高，
叶片逐渐变大。当为全 ＭＳ时，长势及增殖情况
最佳。
综合考虑继代苗的株高、增殖系数、愈伤及叶片
大小，选择Ｊ３（ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．０２５ｍｇ／
ＬＮＡＡ＋０．０２５ｍｇ／ＬＧＡ）为最佳增殖培养基。
表２　植物激素对三叶青瓶苗的影响
编号
基本
培养基
６ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＮＡＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＧＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
平均株高／ｃｍ 增殖系数 生长情况
Ｊ１ ＭＳ　 ０．５０　 ０．０２５　 ０．０２５　 ４．８３±０．８９ａ ４．４１±１．０４ｂ 愈伤较小（０．９ｃｍ），节间较长，叶较大
Ｊ２ ＭＳ　 ０．７５　 ０．０２５　 ０．０２５　 ４．３１±０．６５ｂ ４．８５±１．２２ａｂ 愈伤中等（１．０ｃｍ），节间缩短，叶较大
Ｊ３ ＭＳ　 １．００　 ０．０２５　 ０．０２５　 ４．１６±０．７１ｂｃ　５．０８±１．３５ａ 愈伤中等（１．０ｃｍ），节间缩短，叶适中
Ｊ４ ＭＳ　 １．２５　 ０．０２５　 ０．０２５　 ４．０４±０．６２ｂｃ　５．４８±１．２４ａ 愈伤中等（１．０ｃｍ），节间缩短，叶较小
Ｊ５ ＭＳ　 １．５０　 ０．０２５　 ０．０２５　 ３．７１±０．７５ｃ ５．２４±１．１８ａ 愈伤较大（１．１ｃｍ），节间短，芽紧凑，叶小
Ｊ６ ＭＳ　 １．００　 ０．０２５　 ０　 ３．９３±０．５４ａ ５．１４±１．２８ａ 愈伤中等（１．０ｃｍ），叶适中
Ｊ７ ＭＳ　 １．００　 ０．０２５　 ０．０５０　 ４．１７±０．７４ａ ４．１７±０．７４ａ 愈伤中等（１．０ｃｍ），叶适中
Ｊ８ ＭＳ　 １．００　 ０　 ０．０２５　 ４．２２±０．６０ａ ４．２２±０．６０ａ 愈伤较小（０．８ｃｍ），上部叶较小
Ｊ９ ＭＳ　 １．００　 ０．０５０　 ０．０２５　 ３．７７±０．５３ｂ ４．９８±１．３４ａ 愈伤大（１．２ｃｍ），叶较多
Ｊ１０　 １／２ＭＳ　 １．００　 ０．０２５　 ０．０２５　 ３．７３±０．４６ｂ ４．４４±１．０５ｂ 愈伤中等（１．０ｃｍ），叶较小
Ｊ１１　 ３／４ＭＳ　 １．００　 ０．０２５　 ０．０２５　 ３．６１±０．５３ｂ ３．９３±１．３４ｂ 愈伤较大（１．１ｃｍ），叶较小
９３６第４期 王　静等：珍稀药用植物三叶青的高效微繁体系研究
２．３　生根情况
在１／２ＭＳ基本培养基上加入不同浓度的ＩＢＡ、
ＮＡＡ，无菌苗的生根情况不同（图２Ｅ、图４（ａ）、（ｂ））。
其中，加入ＩＢＡ或ＮＡＡ后，其生根率达到１００％，但
是当ＮＡＡ浓度超过１．５ｍｇ／Ｌ时，其生根率逐渐降
低（图４ａ）；随着ＩＢＡ浓度的增加，其生根数明显增
多，达到１．５ｍｇ／Ｌ时，其增加并不显著（１３．３２±５．８７
根），４．０ｍｇ／Ｌ时，生根数达到最多（１４．７２±５．３９
根），加入ＮＡＡ的生根数也是随着浓度的增高而先
增加后减少，达到１．０ｍｇ／Ｌ时，其生根数达到最高
（１０．４±４．４８根），出于成本与效果的考虑，选择１．５
ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ为最佳诱导生根浓度（图４（ｂ））。由此看
出，ＩＢＡ的诱导生根效果明显好于ＮＡＡ，因此选择１／
２ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ为最佳生根培养基。
图４　不同生长素浓度对生根的影响
２．４　移栽情况
由于继代所用的外植体为侧枝，较为粗壮，通
过驯化、移栽，其成活率可达到９０％以上（图２Ｇ、
Ｈ）。
３　讨　论
在无菌苗诱导过程中，外植体的选择至关重要。
与外植体先脱分化形成愈伤再分化成幼苗的途径相
比，植物以芽繁芽的方式操作简便，且更能稳定地遗
传母本的优良性状，不易变异［１４－１５］。茎尖顶芽具有
分生能力强、生长速度快、含病毒少等优点，常被选
作多种植物的外植体材料，但是张宗勤［１６］研究发现
葡萄茎尖顶芽幼嫩，不耐受消毒剂并且容易褐化，从
而选择去除顶芽后枝条上端的腋芽作为优良外植
体；此外，茎尖材料较少，不宜进行大规模剪切。经
过本文研究发现，三叶青上端半木质化茎段上的腋
芽与茎尖顶芽相比，诱导出的无菌苗萌芽率高，分枝
多，长势好，这可能与体内不同部位激素水平不同有
关，尤其与细胞分裂素的浓度有关，如图１随着
６ＢＡ浓度的增加，愈伤变大、叶退化严重，很可能顶
芽中内源６ＢＡ浓度较高，添加外源激素时，进一步
打破了外植体体内激素平衡，导致顶芽的诱导效果
较差。因此，本文采用三叶青半木质化茎段上的腋
芽来诱导无菌苗，这与杨威等［１７］在乌蔹莓的研究中
对外植体的选择一致。
在三叶青无菌培养过程中发现，基本培养基及
植物激素（６ＢＡ、ＮＡＡ、ＧＡ、ＩＢＡ）对腋芽诱导、增殖
及无菌苗生长、生根情况均有显著影响。结果显示，
ＭＳ基本培养基比１／２ＭＳ诱导的无菌苗长势较快，
增殖率较高，适用于诱导及增殖培养，但１／２ＭＳ更
适合诱导三叶青生根，用于生根培养。在植物中细
胞分裂素主要促进细胞分裂，改变顶端优势，促进芽
的分化等，生长素主要影响茎和节间伸长、顶端优
势、生根等［１８］。本研究发现一定浓度的６ＢＡ（１．０～
１．５ｍｇ／Ｌ）可促进三叶青腋芽诱导率及增殖率，但
随着浓度逐渐增高，其促进作用强度逐渐降低，且外
植体伸长生长受到严重抑制；低浓度的 ＮＡＡ
（０．０２５ｍｇ／Ｌ）可促进愈伤，叶片增大，减少畸形，并
增加腋芽增殖率，但高浓度（０．０５０ｍｇ／Ｌ）却对腋芽
增殖率有一定的抑制作用；只要低浓度的 ＧＡ（０．
０２５ｍｇ／Ｌ）便可在短时间内促进茎及节间的伸长，
但抑制芽的分化增殖，高浓度的ＧＡ（０．０５０ｍｇ／Ｌ）
抑制作用尤为明显。Ｊｉａｎｇ等［１０］认为加入ＧＡ可增
加三叶青丛生芽高度，但选择最适增殖培养基（２．０
ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ）时并未加入ＧＡ。因
０４６ 　　　　　　　　　　　　　　浙　江　理　工　大　学　学　报 ２０１６年　第３５卷
此选择在继代多次生长势出现下降时使用少量ＧＡ
（０．０２５ｍｇ／Ｌ）以提高组培苗高度。ＩＢＡ 与 ＮＡＡ
广泛用于生根，本文中ＩＢＡ与 ＮＡＡ均能刺激根的
发生，但高浓度又抑制根的生长，且ＩＢＡ生根效果
优于ＮＡＡ。
４　结　论
本研究以三叶青带腋芽的半木质化茎段为外植
体，消毒后接于初代培养基（ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ＋
０．０２５ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ）进行诱导培养，长大后将侧枝分
离转入继代培养基（ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ＋０．０２５
ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ），增殖率为５．０８±１．３５，继代几次后，
组培苗生长势下降时在培养基中加入０．０２５ｍｇ／Ｌ
ＧＡ，生根时选取健壮的植株转入（１／２ＭＳ＋１．５
ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ）培养基，１５ｄ后进行驯化移栽，移栽成
活率可达到９０％以上，在大田中长势良好。该体系
具有遗传性状稳定，培养操作过程简单，增殖效率
高，移栽容易成活等优点，为三叶青种苗规模化、规
范化育苗提供可操作的体系。目前，采用该体系已
经培育了５万多株种苗，证明该体系用于三叶青的
工厂化繁育是有效可行的。
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ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ：ａ　ｖａｌｕａｂｌｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔ
［Ｊ］．Ａｆｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，１０（５７）：
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［１３］ＭＵＲＡＳＨＩＧＥ　Ｔ，ＳＫＯＯＧ　Ｆ．Ａ　ｒｅｖｉｓｅｄ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ａ
ｒａｐｉｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｂｉｏ　ａｓｓａｙｓ　ｗｉｔｈ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｔｉｓｓｕｅ
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１４６第４期 王　静等：珍稀药用植物三叶青的高效微繁体系研究
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｈｉｇｈ－Ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｒａｒｅ
Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔ－Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ＨｅｍｓｌｅｙａｎｕｍＤｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ
ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ１ａ，ＧＵＯ　Ｗａｎｌｉ１，ＫＯＮＧ　Ｙａｚｅ１ａ，ＸＵＥ　Ｙｉｄｏｕ１ａ，ＸＵ　Ｘｉｎｈａｎ２，ＬＩＡＮＧ　Ｚｏｎｇｓｕｏ１ｂ
（１ａ．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ；１ｂ．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ａｎｄ
Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｓｃｉ－Ｔｅｃｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００１８，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｓａｎ　Ｙｅ　Ｑｉｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００１８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ（Ｖｉｔａｃｅａｅ）ｉｓ　ａ　ｆｏｌｋ　ｃｏｍｍｏｎ　ｈｅｒｂ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｏｕｔｈ　ｏｆ
Ｃｈｉｎａ　ａｎｄ　ｉｔ　ｈａｓ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｅａｔ　ｃｌｅａｒｉｎｇ，ｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ．Ｓｏｃｉａｌ　ｎｅｅｄｓ
ｒｅｓｕｌｔ　ｉｎ　ｉｔｓ　ｓｈｏｒｔａｇｅ　ｏｆ　ｗｉｌｄ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｆａｌｓ　ｂｅｈｉｎｄ．Ｔｈｉｓ　ｓｅｖｅｒｅｌｙ
ｈｉｎｄｅｒｅｄ　ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ　ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ．ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ，ａｇｇｒａｗａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｉｍｂａｌａｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｕｐｐｌｙ　ａｎｄ　ｄｅｍａｎｄ
ａｎｄ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｃｈａｉｎ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｗｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｈｉｇｈ－ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｔ．ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｓｔｅｍ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｔ．ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ ｗｉｔｈ　ａｘｉｌａｒｙ
ｂｕｄｓ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｌａｔｅｒａｌ　ｂｒａｎｃｈ　ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｒｏｏｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｅｍｉ－ｌｉｇｎｉｆｉｅｄ　ｓｔｅｍ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ（３－８ｓｅｇｍｅｎｔｓ）ｗｉｔｈ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄｓ　ｗｅｒｅ
ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｓｔｅｍ　ａｐｅｘ　ｗｉｔｈ　ｂｕｄｓ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ；ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｂｕｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋１．５
ｍｇ／Ｌ　６ＢＡ＋０．０２５ｍｇ／ＬＮＡＡ；ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｌａｔｅｒａｌ　ｂｒａｎｃｈ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋１
ｍｇ／Ｌ６ＢＡ＋０．０２５ｍｇ／ＬＮＡＡ，ａｎｄ　０．０２５ｍｇ／Ｌ　ＧＡ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｗｈｅｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｔｒｅｎｄ　ｄｅｃｌｉｎｅｅｄ；ｔｈｅ　ｂｅｓｔ
ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋１．５ｍｇ／Ｌ　ＩＢＡ；ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｃｏｕｌｄ　ｒｅａｃｈ　９０％．
Ｗｉｔｈ　ｌｏｗｅｒ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ，ｕｓｅｒ－ｆｒｉｅｎｄｌｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ，ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ，ｔｈｅ
ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｓ　ｔｏｔａｌｙ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ　ａｎｄ　ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｏｆ　Ｔ．
ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ　Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ；ｓｔｅｍ　ｓｅｇｍｅｎｔ；ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄｓ；ｌａｔｅｒａｌ　ｂｒａｎｃｈ；
ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
（责任编辑：许惠儿）
２４６ 　　　　　　　　　　　　　　浙　江　理　工　大　学　学　报 ２０１６年　第３５卷