全 文 ：1139-1140．
［10］ 俞建平，马临科，郑建宝． HPLC 测定合欢花中槲皮苷的
含量［J］． 中国现代应用药学杂志，2008，25 (6) :
539-540．
［11］ 宋亚丽． 合欢花药材的质量标准研究［D］． 石家庄:河北
医科大学，2003．
［12］ 徐建兰． 合欢花和合欢米中槲皮苷含量比较［J］． 中国药
业，2012，21(12) :43-44．
［13］ 蔡 伟，熊耀康，王芳芳，等． HPLC 测定合欢不同部位
槲皮素的含量［J］． 中成药，2008，30(4) :623-624．
［14］ 吴立军． 天然药物化学［M］． 北京，人民卫生出版社，
2009:169-210．
［15］ 康 健，李作平，沈立茹． 正交试验法优选合欢花提取工
艺的研究［J］． 中成药，2007，29(6) :902-904．
辽东楤木叶有效部位中楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ及总皂苷质量控制
王秋红， 王 琦， 王知斌， 杨炳友， 肖洪彬， 匡海学*
(黑龙江中医药大学省部共建北药基础与应用研究重点实验室，黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究
重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040)
收稿日期:2012-11-12
基金项目:国家“十二五”重大新药创制项目 (2011ZX09102-001-018) ;国际科技合作项目 (2007DFA30930)
作者简介:王秋红 (1969—) ，女，教授，博士生导师，研究方向:中药炮制、中药药效物质基础及活性研究、新药研发。Tel:
(0451)82195994，E-mail:qhwang668@ sina. com
* 通信作者:匡海学 (1955—) ，男，教授，博士生导师，研究方向:中药及天然药物药效物质基础。Tel: (0451)82110803，E-mail:
hxkuang@ yahoo. cn
摘要:目的 建立 HPLC-ELSD法测定辽东楤木叶中楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ量及可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷量的
方法。方法 采用 HPLC-ELSD法测定楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ，Diamonsil -C18色谱柱 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，流动相为
水-乙腈，体积流量 0. 7 mL /min，柱温 35 ℃，漂移管温度 115 ℃，载气体积流量 3. 2 L /min。采用可见分光光度法测
定辽东楤木叶总皂苷量，检测波长 550 nm。结果 楤木皂苷Ⅴ、Ⅵ、辽东楤木叶总皂苷分别在 1. 253 ～ 8. 768 μg (r =
0. 999 7) ，1. 251 ～ 8. 767 μg (r = 0. 999 7) ，0. 1549 ～ 1. 549 mg (r = 0. 999 8)呈良好的线性关系;加样回收率分别为
99. 67% (RSD为 1. 30%) ，99. 17% (RSD为 0. 97%) ，99. 57% (RSD为 0. 53%)。结论 本实验采用的方法简便快
速、准确、重复性好，可用于辽东楤木叶有效部位中皂苷类成分的质量控制。
关键词:辽东楤木叶;楤木皂苷Ⅴ;楤木皂苷Ⅵ;HPLC-ELSD;可见分光光度法
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)09-1950-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2013. 09. 027
Quality control of aralia-saponin Ⅴ，aralia-saponin Ⅵ and total spaonins in
effective section from leaves of Aralia elata (Miq．)Seem．
WANG Qiu-hong， WANG Qi， WANG Zhi-bin， YANG Bing-you， XIAO Hong-bin，
KUANG Hai-xue*
(Heilongjiang Key Laboratory of TCM Pharmacodynamic Material Base，Key Laboratory of Chinese Materia Medica，Ministry of Education，Heilongjiang
University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
KEY WORDS:leaves of Aralia elata (Miq．)Seem．;aralia-saponin Ⅴ;aralia-saponin Ⅵ;HPLC-ELSD;visi-
ble spectrophotometry
辽东楤木 Aralia elata (Miq．) Seem． 为五加
科 Araliaceae楤木属 Aralia 植物，用于治疗神经衰
弱、风湿性关节炎、糖尿病、阳虚气弱、胃炎、胃
溃疡、肾炎水肿等症［1］。国内外对其药理作用研
究表明:楤木皂苷具有明显的抗肿瘤活性和提高免
疫功能的作用［2-3］。而辽东楤木叶抗肿瘤的主要活
0591
2013 年 9 月
第 35 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2013
Vol． 35 No． 9
性成分为总皂苷［4-6］。对照品楤木皂苷Ⅴ和楤木皂
苷Ⅵ［7］经体外对肿瘤细胞杀伤作用的构效关系研
究显示均具有明显的抗肿瘤作用，且在有效部位中
的量较高。本实验用可见分光光度法建立总皂苷的
定量测定方法时，以楤木皂苷Ⅴ为对照品，样品和
对照品的峰形、峰位均呈现一致性。并采用 HPLC-
ELSD法同时测定楤木皂苷Ⅴ和楤木皂苷Ⅵ的量，
测定结果稳定、灵敏度高。可用于辽东楤木叶抗肿
瘤有效部位的质量控制方法。
1 仪器与试药
UV—2000 分光光度计 (上海尤尼柯仪器有限
公司) ;Waters 2695 高效液相色谱仪 (美国 Waters
公司 Empower 工作站) ;Alltech ELSD—2000 型蒸
发光散色检测器 (美国 Alltech 公司) ;电子天平
(Mettler-Toledo Group) ;Milli-Q型自动双重纯水蒸
馏器 (上海密理博公司)。
对照品楤木皂苷Ⅴ{3-O-［β-D-葡萄吡喃糖基
(1→2) ］［β-D-葡萄吡喃糖基(1→3) ］-β-D-葡萄吡
喃糖基-齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯}和楤木
皂苷Ⅵ{3-O-［β-D葡萄吡喃糖基(1→2) ］［β-D-葡
萄吡喃糖基(1→3) ］- β-D-葡萄吡喃糖基-刺囊酸-
28-O-β-D-葡萄吡喃糖酯}，均为黑龙江中医药大学
中药 化 学 实 验 室 自 制，纯 度 分 别 为 99. 1%
和 99. 4%。
辽东楤木叶有效部位制备:辽东楤木叶用 20
倍量，70%的乙醇回流提取 3 次，每次 2. 5 h;合
并药液浓缩成 0. 124 g /mL (生药)的无醇溶液加
入 95%乙醇调成 50%，沉淀 24 h，过滤，滤液浓
缩为 0. 1 g /mL (生药)的提取液。称取适量的
AB-8 型大孔树脂 (大孔树脂质量 ∶ 生药质量 =
1 ∶ 5) ，预处理后上样。提取液以 0. 5 BV /h体积流
量缓慢通过 AB-8 型大孔树脂柱，吸附 6 h，用 5
BV 的蒸馏水以 2. 0 BV /h 的体积流量冲洗，用
Molish反应进行检测，当反应呈阴性时，用 3 BV
的 30%的乙醇进行洗脱，体积流量为 1. 0 BV /h，
再用 5 BV 的 70%的乙醇进行洗脱，体积流量为
0. 5 BV /h 洗脱液，收集 70%洗脱部分减压浓缩后
冷冻干燥，即得淡黄色粉末状辽东楤木叶抗肿瘤有
效部位提取物，其回收率为 9. 15%。甲醇，乙腈
(色谱纯，DikmaPure)高氯酸;冰醋酸;香草醛;
乙醇 (分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)。
2 HPLC-ELSD法测定楤木皂苷Ⅴ和楤木皂苷Ⅵ
2. 1 色谱条件 Diamonsil-C18色谱柱 (250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ;以乙腈 (A)-水 (B)为流动
相，梯度洗脱，0 ～16. 5 min (27. 5% ～ 29. 8% A) ，
16. 5 ～ 24 min (29. 8% ～ 30% A) ，24 ～ 50 min
(30% ～31% A) ;体积流量 0. 7 mL /min;柱温 35
℃;漂移管温度 115 ℃;载气体积流量 3. 2 L /min。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取对照品楤木皂
苷Ⅴ17. 60 mg 和楤木皂苷Ⅵ27. 15 mg，置同一 5
mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取
1 mL，置于 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
摇匀，制成含楤木皂苷Ⅴ0. 352 0 mg /mL、楤木皂
苷Ⅵ 0. 543 0 mg /mL的混合对照品溶液。
2. 3 样品溶液的制备 取辽东楤木叶有效部位粉
末，精密称取 1. 02 g，加水 20 mL 微热使溶解，用
水饱和正丁醇振摇提取 3 次，每次 20 mL，合并正
丁醇液，用氨试液 (pH≈8)、正丁醇饱和的水各
洗涤 1 次，每次 30 mL，弃去洗涤液，正丁醇液蒸
干，残渣加甲醇溶解，转移至 25 mL量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，即得。
2. 4 系统适用性试验 分别精密吸取对照品和样
品项下溶液，按 2. 1 项下色谱条件进样，记录色谱
图，见图 1。在 该色谱条件下，楤木皂苷Ⅴ和楤
木皂苷Ⅵ与其他成分可达到基线分离，分离度均大
于 1. 5。结果表明在上述色谱条件下楤木皂苷Ⅴ和
楤木皂苷Ⅵ具有良好的分离效果。
1． 楤木皂苷Ⅴ 2． 楤木皂苷Ⅵ
1． aralia-saponin Ⅴ 2． aralia-saponin Ⅵ
图 1 混合对照品 (A)、样品 (B)的 HPLC-
ELSD图谱
Fig. 1 HPLC-ELSD chromatograms of mixed ref-
erence substances (A)and sample (B)
2. 5 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液适
量，分别制成楤木皂苷Ⅴ质量浓度为 125. 3、
1591
2013 年 9 月
第 35 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2013
Vol． 35 No． 9
250. 5、375. 8、626. 3、751. 5、876. 8 μg /mL，楤
木皂苷 Ⅵ 质量浓度 为 125. 1、250. 2、375. 3、
625. 5、750. 6、875. 7 μg /mL 的对照品溶液，准确
吸取 10 μL，按上述确定的色谱条件进行测定，分
别以峰面积对数值 (Y)对进样量 (μg)对数值
(X)进行线性回归，楤木皂苷Ⅴ回归方程为Y =
1. 768 5X + 4. 527 5 (r = 0. 999 7，n = 6) ，楤木皂
苷Ⅵ回归方程为 Y = 1. 938 1X + 4. 406 6 (r =
0. 999 7，n = 6)。结果表明，楤木皂苷Ⅴ和楤木皂
苷Ⅵ分别在 1. 253 ～ 8. 768 μg、1. 251 ～ 8. 757 μg
内与峰面积呈良好的线性关系。楤木皂苷Ⅴ和楤木
皂苷Ⅵ定量限 (LOQ)分别为 0. 37 μg、0. 58 μg，
检测限 (LOD)分别为 0. 12 μg、0. 18 μg。
2. 6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 10
μL，内重复进样 6 次，测得楤木皂苷Ⅴ峰面积的
RSD 为 1. 91%，楤木皂苷Ⅵ峰面积的 RSD 为
2. 95%。表明仪器精密度良好。
2. 7 重复性试验 取同一批次辽东楤木叶有效部
位粉末 6 份，精密称定，按 2. 3 项下方法制备样品
溶液，分别进样 10 μL。按干燥品计算，楤木皂苷
Ⅴ和楤木皂苷Ⅵ质量分数分别为 9. 42、11. 48
mg /g，RSD 分别为 0. 89%、1. 25%。
2. 8 稳定性试验 取样品溶液，精密吸取 10 μL，
分别于 0、2、4、6、8、12、24 h 进样，计算楤木
皂苷Ⅴ峰面积的 RSD 为 1. 59%，楤木皂苷Ⅵ峰面
积的 RSD为 0. 66%，说明样品溶液在 24 h 之内基
本稳定。
2. 9 加样回收率 精密称取已知含有量的辽东楤
木叶粉末 6 份，分别精密加入楤木皂苷Ⅴ和楤木皂
苷Ⅵ对照品溶液 1 mL (质量浓度分别为 1. 290、
1. 781 mg /mL) ) ，按 2. 3 项下方法制备样品溶液，
进样 10 μL，测定楤木皂苷Ⅴ和楤木皂苷Ⅵ量，计
算得楤木皂苷Ⅴ和楤木皂苷Ⅵ回收率分别为
99. 67%、99. 17%，RSD 分别为 1. 30%、0. 97%。
2. 10 样品测定 取 3 批辽东楤木叶有效部位粉
末各 3 份，按 2. 3 项下方法制备的样品溶液，分别
精密进样 10 μL，记录楤木皂苷Ⅴ，楤木皂苷Ⅵ的
峰面积，用外标法分别计算，结果见表 1。
3 可见分光光度法测定辽东楤木叶总皂苷
3. 1 对照品溶液的制备 精密称取楤木皂苷Ⅴ对
照品 15. 06 mg，置于 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解，
并稀释至刻度，从中吸取 1 mL 定容于 5 mL 量瓶
中，制成每 1 mL含 0. 301 2 mg的溶液，即得。
3. 2 样品溶液的制备 取辽东楤木叶有效部位粉
表 1 辽东楤木叶中楤木皂苷Ⅴ和Ⅵ的测定结果
Tab. 1 Determination of aralia-saponin Ⅴ and Ⅵ from
leaves of Aralia elata (Miq．)Seem．
样品批号
楤木皂苷Ⅴ /
(mg·g － 1)
RSD /%
楤木皂苷Ⅵ /
(mg·g － 1)
RSD /%
20110901 9. 43 11. 52
20110902 9. 71 1. 48 11. 68 0. 88
20110903 9. 54 11. 49
末适量，精密称取 30. 98 mg，用水使其完全溶解，
上样于预先处理好的 D101 大孔树脂柱上，先用水
洗脱 30 mL，弃去水洗液，再分别用 30%和 50%
的乙醇洗脱 50 mL和 70 mL，弃去这两部分的乙醇
洗脱液，最后用 70%乙醇洗脱 80 mL，将 70%乙
醇洗脱液蒸干，甲醇定容于 10 mL量瓶中。
3. 3 最大吸收波长的确定 精密吸取对照品溶液
和样品溶液各 1. 0 mL，水浴蒸干，加 5%香草醛-
冰醋酸 0. 2 mL，高氯酸 0. 8 mL，80 ℃ 水浴 20
min，取出冰浴 5 min，加 5 mL冰醋酸，进行190 ～
1 000 nm全波长扫描，对照品在 550 nm 处有最大
吸收峰，样品溶液在 550 ～ 553 nm 处有最大吸收
峰。同时，对照品和样品显色前在最大吸收峰处均
无吸收干扰。故选择 550 nm为测定波长。
3. 4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 0. 5、
1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mL，水浴蒸干，加 5%
香草醛-冰醋酸 0. 2 mL，高氯酸 0. 8 mL，80 ℃水
浴 20 min，取出冰浴 5 min，加 5 mL 冰醋酸，550
nm处测定吸光度，以楤木皂苷Ⅴ量 (X)为横坐
标，吸光度 (Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回
归方程 Y = 3. 733 2X － 0. 486 8 (r = 0. 999 8)。结
果显示，楤木皂苷Ⅴ对照品在 0. 154 9 ～ 1. 549 mg
内线性关系良好。
3. 5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，重
复测定 6 次，平均吸光度为 0. 864，RSD 为
1. 16%，表明仪器精密度良好。
3. 6 稳定性试验
3. 6. 1 样品溶液稳定性试验 取样品溶液，分别
于 0、6、12、24、48 h 测定，平均吸光度为
0. 875，RSD为 1. 80%，表明样品溶液在 48 h内具
有良好的稳定性。
3. 6. 2 显色后样品溶液放置时间考察 取样品溶
液 5. 0 mL，水浴蒸干，加 5%香草醛-冰醋酸 0. 2
mL，高氯酸 0. 8 mL，80 ℃水浴 20 min，取出冰浴
5 min，加 5 mL冰醋酸，每隔 10 min 在 550 nm 处
测定一次吸光度，平均吸光度为 0. 884，RSD 为
1. 91%，表明样品溶液在 2 h内稳定性良好。
2591
2013 年 9 月
第 35 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2013
Vol． 35 No． 9
3. 7 重复性试验 取同一批次的辽东楤木叶有效
部位粉末 6 份，按 3. 2 项下的方法制备样品溶液，
测得样品中总皂苷平均吸光度 0. 831，RSD 为
1. 10%，表明本法具有良好的重复性。
3. 8 回收率试验 取辽东楤木叶粉末 6 份，精密
称定，分别加入 3. 1 项下的楤木皂苷Ⅴ对照品溶
液 5. 0 mL，按 3. 2 项下方法制备样品溶液，测定。
结果楤木皂苷Ⅴ的加样回收率为 99. 57%，RSD 为
0. 53% (n = 6)。表明该方法准确、可靠。
3. 9 样品测定 取 3 批辽东楤木叶有效部位粉末
各 3 份，每份约 30 mg，精密称定，按 3. 2 项下的
方法制备样品溶液，每份吸取样品溶液 1. 0 mL，
进行测定。结果见表 2。
表 2 辽东楤木叶有效部位中总皂苷的测定结果
Tab. 2 Determination of total saponins Ⅴ in effective sec-
tion leaves of Aralia elata (Miq．)Seem．
样品批号 总皂苷量 /% RSD /%
20110901 72. 34
20110902 71. 72 0. 66
20110903 72. 66
4 讨论
4. 1 检测仪器的选择 采用可见分光光度法测定
辽东楤木叶中总皂苷的量，此方法准确、方便，为
总皂苷的定量分析与评价及定量测定提供了更加有
效的分析方法。
由于皂苷类物质无紫外吸收或仅为末端吸收，
如用紫外检测器，干扰较大，且检测时间长。蒸发
光散射检测器 (ELSD)为通用质量型检测器，其
响应不依赖样品的光学性质，只要样品的挥发性低
于流动相即可被检测［8］，故本实验选择 HPLC-
ELSD法对楤木皂苷Ⅴ、楤木皂苷Ⅵ进行测定。
4. 2 流动相的选择 分别以甲醇-水，乙腈-水，
甲醇-水-0. 1%磷酸，为流动相比较分离效果。结
果表明其中乙腈-水为流动相时可以达到最佳分离
效果，故采用乙腈-水为流动相。
4. 3 样品处理方法 由于辽东楤木叶有效部位成
分复杂，为使色谱图中楤木皂苷Ⅴ、楤木皂苷Ⅵ获
得满意的分离，曾对样品前处理方法进行多次实
验。本实验建立的样品预处理方法能有效地将有效
部位中黄酮类、黄酮苷成分分离出去，从而得到理
想的色谱图，可以达到基线分离，最终确定以该方
法作为样品的处理方法。经方法学研究，结果表明
该法简便、灵敏度高、重复性好、结果准确，可以
为辽东楤木叶有效部位的质量控制提供方法学参考
依据。
5 结论
本研究采用的方法方便快捷、准确度高、重复
性好，可用于辽东楤木叶抗肿瘤有效部位皂苷类成
分的定量测定;同时本研究又进一步地完善了辽东
楤木叶抗肿瘤有效部位质量标准的研究工作，为新
药的研究与开发奠定了基础。
参考文献:
［1］ 宋少江，李 丽，马志强，等． HPLC 法测定辽东楤木根
皮中楤木皂苷 C的含量［J］． 沈阳药科大学学报，2006，23
(3) :162-164．
［2］ 姜永涛，徐绥绪． 龙牙楤木化学组成及药理活性［J］． 沈阳
药学院学报，1990，7(4) :290-294．
［3］ Kuang H X，Sun H，Zhang N，et al． Two new saponins，cong-
muyenosides A and B，from the leaves of Aralia elata． collected
in Helongjiang，China． ［J］． Chem Pharm Bull，1996，44
(1) :2183-2185．
［4］ 王丽岩，肖洪彬，王鸣慧． 辽东楤木叶总皂苷抗急性肝损
伤的实验研究［J］． 中医药信息，2009，26 (2) :29-30．
［5］ 王春梅，张广美． 龙牙楤木叶总皂苷对卵巢癌细胞的抑制
作用及其对线粒体凋亡途径的影响［J］． 中医药学报，
2011，39(1) :17-19．
［6］ 尹丽颖，边晓燕，肖洪彬． 辽东楤木叶总皂苷对 H22荷瘤
小鼠 p53 及 PCNA 蛋白表达的影响［J］． 中医药学报，
2010，38(1) :18-20．
［7］ Song S J，Nakamura N，Ma C M，et al． Five saponins from the
root bark of Aralia elata． ［J］． Phytochemistry，2000，56(5) :
491-497．
［8］ 赵宇新，李曼玲． 蒸发光散射检测器在中药成分分析中的
应用［J］． 中国中药杂志，2003，28(10) :913-915．
3591
2013 年 9 月
第 35 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2013
Vol． 35 No． 9