全 文 ：表 4　 样品中丹酚酸 B含量测定结果(n=3)
样品编号 含丹酚酸 B/(mg/片) RSD/%
1 2.81 0.362
2 3.05 0.526
3 2.94 0.457
4 2.60 0.421
5 3.24 0.365
6 2.95 0.536
7 3.00 0.421
8 3.19 0.208
9 2.84 0.401
3　讨论与小结
3.1　乙肝扶正片是由胶囊剂而来 ,由于新剂型中不
再加入生药粉 ,原剂型标准中的显微鉴别项 [ 3]不再
适用而免去 ,本研究着重考查了何首乌 、虎杖 、麻黄
的 TLC特征鉴别 。
3.2　丹参是本方中主要的养肝护肝药 ,同时该药采
用的是极性梯度提取 ,对其有效成分进行监控 ,可有
效控制其生产工艺 ,亦即是醇提收率的一个有效指
标 ,本实验采用 HPLC测定丹参主要成分丹参酮 IA
和丹酚酸 B[ 2]的方法 ,条件好掌握 ,方便简单 ,重现
性好。
3.3　由本实验室试制 9批的含量测定可以看出 ,丹
参酮 IA含量介于 0.10 ～ 0.13 mg之间 ,丹酚酸 B
含量介于 2.60 ～ 3.24 mg之间 。考虑 24个月的保
质期 ,含量可能略有下降 ,也考虑不同厂家所采用药
材的产地 、采收季节等不同 ,其丹参主要成分的含量
也会有所差别 [ 2, 4] ,将限度调整为每片丹参酮 IA不
小于 0.08 mg,丹酚酸 B不小于 2.20 mg。
3.4　本品组方共十一味药 ,魏萍[ 6]对原胶囊剂测
定了方中何首乌成分 2, 3, 5, 4′-四羟基二苯乙烯-2-
O-β -D-葡萄糖苷 ,同时用薄层色谱法对肉桂 、当归 、
丹参 、人参四味药做了鉴别 ,本文主要是考虑到生产
工艺的改变 ,对原来的生药粉末入药后改为梯度提
取的丹参进行了含量测定 ,并对何首乌 、虎杖 、麻黄
三味药进行了薄层色谱鉴别 。
参考文献:
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(21):1649-1651.
HPLC同时测定枇杷叶糖浆中熊果酸和齐墩果酸含量
王　颖 1 , 　余晓琴 1 , 　龙　敏2 , 　李　萍 1
(1.四川省药品检验所 , 四川 成都 610036;2.成都市第六人民医院 , 四川 成都 610051)
收稿日期:2008-07-17
作者简介:王　颖(1972-),女 ,副主任药师 ,从事药品检验工作。 Tel:(028)87526717
关键词:枇杷叶糖浆;HPLC;熊果酸;齐墩果酸
摘要:目的:同时测定枇杷叶糖浆中的熊果酸与齐墩果酸。方法:采用 HPLC法 ,流动相为乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵(70∶
10∶20), 检测波长:215nm, 柱温:25 ℃。结果:在该色谱条件下 , 采用 3种不同品牌色谱柱 , 熊果酸与齐墩果酸均能完
全分离。熊果酸在 0.5 ～ 12.5μg范围内 ,线性关系良好(r=0.999 8), 平均回收率为 98.94%, RSD=1.05%;齐墩果酸
在 0.4 ～ 9.9 μg范围内 , 线性关系良好(r= 1.000 0),平均回收率为 97.21%, RSD=4.08%。结论:方法准确性高 , 重复
性好 , 可用于枇杷叶糖浆的质量控制。
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)09-1389-03
　　枇杷叶糖浆是枇杷叶经加工制成的单味制剂 ,
具有清肺润燥 ,止咳化痰的功效 ,用于肺热燥咳 ,痰
少咽干 。质量标准收载于 《卫生部药品标准中药成
方制剂 》第十四册 , 标准编号 WS3 -B-2719-97 ,原标
准中仅收载了相对密度的检查。为有效控制药品的
内在质量 ,对枇杷叶中有效成分进行测定。枇杷叶
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含有挥发油 、三萜酸类 、倍半萜类 、黄酮类 、多酚类及
有机酸类多种化学成分 [ 1] ,其中三萜酸类成分与其
消炎 、止咳活性相关 [ 2] ,故选择以熊果酸 、齐墩果酸
作为质量评价的指标性成分 ,采用 HPLC法同时测
定 。
1　仪器和试药
Agilent1200高效液相色谱仪;熊果酸对照品
(中国药品生物制品检定所 ,批号:110742-200516);
齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号:
110709-200505);枇 杷叶 糖 浆 (批 号:060301、
060302、060303)、缺枇杷叶阴性样品 ,由成都地奥天
府药业有限公司提供 。乙腈 ,甲醇为色谱纯 ,水为超
纯水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱为 LichrosphereTM C18柱(250 mm×4.6
mm, 5 μm), KromasilTM C18柱(200 mm×4.6 mm, 5
μm), AgilentZorbaxSB-C18 (250 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相为乙腈 -甲醇 -0.5%醋酸铵(70∶10∶
20);检测波长为 215 nm;柱温:25 ℃;流速:0.8
mL/min;理论板数按熊果酸峰计算不低于 3 000,熊
果酸与齐墩果酸的分离度大于 1.5。见图 1。
A B
C
图 1　混合对照品溶液(A)、供试品溶液(B)、缺枇杷叶阴性样品溶液(C)HPLC色谱图
1.齐墩果酸　 2.熊果酸
2.2　对照品溶液的制备
取五氧化二磷减压干燥 12h以上的熊果酸 、齐
墩果酸对照品适量 ,精密称定 ,加甲醇溶解并制成含
熊果酸 150.3μg/mL、齐墩果酸 49.5 μg/mL的混合
对照溶液。
2.3　供试品溶液的制备
取本品适量混匀 ,取约 10 g,置 50mL具塞离心
管中 ,精密称定 ,加水 10mL,加浓氨试液 0.5mL,摇
匀 ,加醋酸乙酯 20 mL, 振摇提取 ,离心 (3 000 r/
min)5 min,分取醋酸乙酯液 ,下层液再用醋酸乙酯
同法提取 3次 ,每次 20mL,合并醋酸乙酯液 ,蒸干 ,
残渣加甲醇使溶解并转移至 2mL量瓶中 ,加甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,取续
滤液 ,即得。
2.4　线性关系的考察
分别配制系列不同浓度的熊果酸对照品溶液和
齐墩果酸对照品溶液 ,分别注入色谱仪 ,记录峰面
积 ,以峰面积 A对进样量 C进行直线回归 ,得回归
方程:A熊果酸 =3.109×102C+2.661(r=0.999 8,
n=6);A齐墩果酸 =4.205×102C-7.643×10-1(r=
1.000 0, n=6)。熊果酸进样量在 0.5 ～ 12.5 μg,
齐墩果酸在 0.4 ～ 9.9 μg的范围内线性关系良好 。
2.5　稳定性试验
取新配制的混合对照品溶液以及新制备的供试
品溶液(060302)分别于 0、2、4、6、8、10h进样 ,记录
色谱峰面积的变化 ,结果对照品溶液熊果酸峰面积
RSD=0.41%,齐墩果酸峰面积 RSD=0.67%;供试
品溶液熊果酸峰面积 RSD=0.26%,齐墩果酸峰面
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积 RSD=0.96%。表明混合对照品溶液和供试品溶
液在 10 h内稳定。
2.6　重复性试验
取枇杷叶糖浆样品(060302)6份 ,分别按 1.2.
3项下方法制备成供试品溶液并测定含量 ,结果熊
果酸平均含量为 38.05μg/g, RSD=0.83%;齐墩果
酸平均含量为 8.03 μg/g, RSD=2.14%,表明方法
的重复性较好。
2.7　回收率试验
精密称取已知含量的样品(批号 060302,齐墩
果酸含量 8.03 μg/g,熊果酸含量 38.05 μg/g)共 6
份 ,置锥形瓶中 ,分别精密加入熊果酸对照品溶液
(0.917 mg/mL)200 μL和齐墩果酸对照品溶液
(0.198 mg/mL)200 μL,按 2.3项下方法制备供试
品溶液 ,注入液相色谱仪 ,分别测定峰面积并计算加
样回收率 ,试验结果见表 1。本方法的回收率良好 。
表 1　 熊果酸和齐墩果酸的回收率测定结果
待测成分 原有量/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
熊果酸 191.04 183.40 373.56 99.52
191.97 183.40 371.01 97.62
190.28 183.40 370.69 98.37
98.94 1.05
193.09 183.40 377.63 100.62
191.51 183.40 373.01 98.96
191.81 183.40 372.51 98.53
齐墩果酸 40.52 39.60 80.24 100.30
40.71 39.60 77.76 93.5
40.36 39.60 76.70 91.77
97.20 4.08
40.95 39.60 79.03 96.16
40.62 39.60 80.34 100.30
40.68 39.60 80.73 101.14
2.8　样品的测定
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各 20μL进
样 ,测定峰面积值 ,外标法计算含量 , 3批样品中熊
果酸的含量分别为 39.33、38.05、40.34 μg/g,齐墩
果酸的含量分别为 8.37、8.03、8.46 μg/g。
3　讨论
3.1　齐墩果酸和熊果酸结构性质相似 ,不易分离 。
文献报道流动相:甲醇 -1%醋酸水溶液 (88∶
12)[ 3] ,甲醇 -0.5%醋酸铵溶液(90∶10)[ 4] ,乙腈-
甲醇-水-磷酸-三乙胺 (50∶ 30∶ 20∶ 0.02∶
0.04)[ 5]都能使齐墩果酸和熊果酸达到基线分离。
通过试验发现甲醇 -1%醋酸铵溶液(80∶20),熊
果酸和齐墩果酸分离良好 ,但基线噪音较大 ,最后调
整流动相比例为乙腈-甲醇 -0.5%醋酸铵(70∶10∶
20)进行试验 ,熊果酸与齐墩果酸得到基线分离 ,且
基线平滑 ,阴性无干扰。
3.2　本品为枇杷叶制成的糖浆剂 ,含糖量高达
70%以上 ,目标成分含量较低 ,同时枇杷叶中的熊果
酸主要以游离形式存在 [ 6] ,故未进行水解 , 采用醋
酸乙酯直接提取 ,能较好地除去糖类干扰。试验中
发现溶液是否加氨碱化对提取效率有很大的影响 ,
在对氨水用量和提取次数进行考察后 ,确定提取条
件为:取本品 10 g,加氨水 0.5 mL后用醋酸乙酯提
取 4次 ,每次 20 mL。
3.3　试验中发现柱温对熊果酸和齐墩果酸分离效
果影响较大 。将柱温分别控制在 25℃、30℃、35℃
进行试验:当柱温保持在 30 ℃以上时 ,调整流动相
比例和流速 ,均不能达到基线分离;调整柱温至 25
℃,色谱峰的保留时间稍有后延 , 但分离度达到
1.60。结果表明低柱温有利于分离。
3.4　采用 2.1项下中的 3种色谱柱进行分离 ,熊果
酸与齐墩果酸的分离度分别达到 1.60、 1.51和
1.58,均达到基线分离 ,表明该色谱条件的耐用性较
好。
参考文献:
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