全 文 ：HPLC测定乌梅饮片中熊果酸和齐墩果酸的含量
段雪云 1 , 　许腊英 1 , 　毛维伦1 , 　范　恒 2
(湖北中医学院 ,湖北 武汉 430061;华中科技大学协和医院 湖北 武汉 430022)
收稿日期:2005-10-28
基金项目:国家十五攻关计划课题(编号:2001B A701A11)
作者简介:段雪云(1966～ ),女 ,硕士 ,主管药师 ,研究方向:中药材质量标准研究。
关键词:HPLC;乌梅饮片;熊果酸;齐墩果酸;含量测定
摘要:目的:HPLC法同时测定乌梅饮片中熊果酸 、齐墩果酸的含量。方法:采用高效液相色谱法 , 流动相:甲醇-0. 2 乙
酸铵(80∶20), 流速 1 mL /m in;检测波长 214 nm。结果:熊果酸在 0. 885 ～ 8. 85 μg( r=0. 999 7), 齐墩果酸在 0. 366 ～
1. 830μg(r=0. 999 9)范围内线性关系良好 , 平均回收率分别为熊果酸 101. 5 (RSD =1. 4 ), 齐墩果酸 99. 64 (RSD
=1. 1 )。净乌梅中熊果酸和齐墩果酸含量分别为 0. 613 2‰和 0. 218 2‰, 乌梅炭中熊果酸和齐墩果酸含量分别为
0. 362 0‰和0. 111 3‰。结论:本方法操作简便 ,定量准确 , 可作为乌梅饮片的质量控制标准。
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2006)07-0982-03
　　乌梅为药食两用中药 , 是国家十五攻关项目
“ 30味中药饮片规范化研究 ”的品种之一 。虽有人
对乌梅中柠檬酸等有机酸进行了测定 [ 1] ,也有报道
采用毛细管等速电泳的方法测定有机酸含量 [ 2] ;在
有些含有乌梅的制剂质量标准中 ,取某一个有机酸
作指标 ,采用高效液相色谱法测定其含量 [ 3] ;但对
乌梅饮片的活性成分熊果酸和齐墩果酸研究甚少 ,
采取 HPLC法在同一色谱条件下 ,同时测定饮片中
两种成分的含量更是尚未见报道。我们建立了同时
测定乌梅饮片中熊果酸和齐墩果酸含量的方法 ,为
控制饮片质量提供了量化依据 。
1　仪器 、药品与试药
1. 1　仪器与试药　Ag ilent1100 se ries液相色谱系
统;四元 泵 G 1311A;柱 温箱 G1316A;检 测器
VWDG1314AAg ilen tChemstation色谱工作站;齐墩果
酸对照品(中国药品生物制品检定所提供 ,供含量
测定用 ,批号:0709-9803):熊果酸对照品(中国药品
生物制品检定所提供 , 归一化法测定含量高于
98 ,批号:742-9204);所用水为重蒸馏水 ,甲醇为
色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。
1. 2　药品　乌梅产于浙江长兴 ,经我院鉴定教研室
张秀桥博士鉴定为蔷薇科植物梅 (P runus mum e
(S ieb. )Sieb. et Zucc. )的干燥近成熟果实 ,符合药
典规定品种 。乌梅饮片(净乌梅 ,乌梅炭)由我院中
药炮制研究室炮制加工而成。
2　试验方法与结果
2. 1　色谱条件　色谱柱:ReliasilC18柱 (4. 6 mm ×
250 mm , 5 μm);流动相:甲醇-0. 2 乙酸铵 (80∶
20);流速:1 mL /m in;测定波长:λ=214 nm;柱温:
28 °C;进样量:20 μL:分离度 (R)大于 1. 5,理论塔
板数按熊果酸峰计算为 6 000。
2. 2　熊果酸和齐墩果酸对照品溶液的配制　精密
称取经五氧化二磷干燥至恒重的熊果酸对照品 8. 85
mg,置于 10 mL的量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 即得
0. 885mg /mL的熊果酸对照品溶液;精密称取经五
氧化二磷干燥至恒重的齐墩果酸对照品 9. 15 mg,置
于 50 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,即得 0. 183
mg /mL的齐墩果酸对照品溶液。
2. 3　供试品溶液制备　取净乌梅 ,乌梅炭适量(注
意取样代表性 )粉碎 ,全部通过二号筛 ,各精密称取
粉末约 1 g,置索氏提取器中 ,加乙醚 100 mL,回流
提取 8 h,将提取液定量转移至蒸发皿中 ,挥干乙醚 ,
残渣用甲醇溶解并定量转移至 5mL量瓶中 ,加甲醇
稀释至刻度 ,摇匀 ,经 0. 45 μm微孔滤膜过滤 ,取续
滤液作为供试品溶液。
2. 4　方法学考察
2. 4. 1　标准曲线的制备　用微量进样器分别精密
进样熊果酸对照品溶液 (0. 885mg /mL)1 , 2, 4, 6 , 10
μL,按上述色谱条件测定 ,以峰面积积分值为纵坐
标 ,以熊果酸对照品量 (C)为横坐标 ,绘制标准曲
线。计算得回归方程为 A =341. 1C - 33. 22(r =
0. 999 7),线性范围 0. 885 ～ 8. 85 μg;用微量进样器
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Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Ju ly 2006
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分别精密进样齐墩果酸对照品溶液 (0. 183 mg /mL)
2, 4, 6, 8 , 10 μL,按上述色谱条件测定 ,以峰面积积
分值为纵坐标 ,以齐墩果酸对照品量(C)为横坐标 ,
绘制标准曲线。计算得回归方程为 A =340. 98C -
5. 23(r=0. 999 9),线性范围0. 366 ～ 1. 830 μg。
2. 4. 2　精密度试验　吸取浓度为 0. 885 mg /mL的
熊果酸对照品溶液 4 μL,注入高效液相色谱仪 ,连
续进样 5次 , RSD =0. 27 ;又吸取浓度为 0. 183
mg /mL的齐墩果酸对照品溶液 4 μL,注入高效液相
色谱仪 ,连续进样 5次 , RSD =0. 54 。
2. 4. 3　重复性试验
取样品 5份 ,按供试品制备方法同法操作 ,测定
熊果酸 、齐墩果酸的含量 , 其 RSD 分别为 1. 3 ,
0. 82 。
2. 4. 4　稳定性试验
取同一批号样品 ,按供试品溶液测定方法操作 ,
分别在 0, 4, 8, 24, 48 h进行测定 ,结果表明供试品
溶液在 48 h测定稳定性良好 。
2. 4. 5　回收率试验　称取已知含量的样品约 0. 5 g
(批号为 04101202,熊果酸含量为 0. 606 4‰),分别
定量加入熊果酸对照品 ,按供试品溶液制备项下方
法进行操作 ,制备成加样回收供试品液 ,并依法测
定 ,结果见表 1, 平均回收率为 101. 5 , RSD =
1. 4 ;另称取已知含量的样品约 0. 5 g(批号为
04101202,齐墩果酸含量为0. 206 6‰),分别定量加
入齐墩果酸对照品 ,按供试品溶液制备项下方法进
行操作 ,制备成加样回收供试品液 ,并依法测定 ,结
果见表 2,平均回收率为 99. 64 , RSD =1. 1 ,以上
结果表明回收率良好 。
2. 5　样品含量测定　分别精密吸取对照品溶液 5
μL、10 μL,供试品溶液 20 μL,注入高效液相色谱
仪 ,按前述色谱条件测定 ,色谱图见图 1 ～ 4,含量结
果见表 3。
图 1　熊果酸对照品色谱
1.熊果酸
3　讨论
3. 1　分别用不同比例的乙腈 、甲醇 、磷酸二氢铵 、水
图 2　齐墩果酸对照品色谱
2.齐墩果酸
图 3　净乌梅饮片色谱
1.齐墩果酸　 2.熊果酸
图 4　乌梅炭饮片色谱
1.齐墩果酸　 2.熊果酸
表 1　 熊果酸加样回收率试验结果
取样量
(g)
熊果酸
含量
(mg)
熊果酸
加入量
(m g)
实测含
量(m g)
回收率
( )
平均回
收率
( )
RSD
( )
0. 517 9 0. 314 1 0. 212 4 0. 528 8 101. 1
0. 495 6 0. 300 5 0. 212 4 0. 512 5 99. 81
0. 468 8 0. 284 3 0. 283 2 0. 569 2 100. 6 101. 5 1. 4
0. 505 1 0. 306 3 0. 283 2 0. 596 0 102. 3
0. 494 5 0. 299 9 0. 354 0 0. 659 2 101. 5
0. 492 6 0. 298 7 0. 354 4 0. 665 8 103. 7
表 2　 齐墩果酸加样回收率试验结果
取样量
(g)
齐墩果
酸含量
(mg)
齐墩果酸
加入量
(m g)
实测含
量(m g)
回收率
( )
平均回
收率
( )
RSD
( )
0. 509 7 0. 105 3 0. 073 2 0. 177 5 98. 63
0. 531 2 0. 109 7 0. 073 2 0. 181 9 98. 63
0. 512 2 0. 105 8 0. 109 8 0. 216 8 101. 1 99. 64 1. 1
0. 505 5 0. 104 4 0. 109 8 0. 213 1 98. 99
0. 532 7 0. 110 1 0. 146 4 0. 257 7 100. 8
0. 462 7 0. 095 6 0. 146 4 0. 241 5 99. 66
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表 3　 净乌梅和乌梅炭熊果酸和齐墩果酸含量测定结果(n=3)
净乌梅
批号
熊果酸
(‰)
RSD
( )
齐墩果酸
(‰)
RSD
( )
乌梅炭
批号
熊果酸
(‰)
RSD
( )
齐墩果酸
(‰)
RSD
( )
04101201 0. 615 5 0. 84 0. 241 5 1. 20 04102201 0. 382 8 1. 10 0. 119 4 1. 30
04101202 0. 606 4 1. 03 0. 206 6 0. 89 04102202 0. 341 7 1. 22 0. 107 2 1. 28
04101203 0. 617 6 0. 98 0. 221 6 1. 42 04102203 0. 361 5 0. 88 0. 111 1 0. 98
等来配制流动相 ,均未得到良好的分离 ,经比较分
析 ,确认加入盐溶液有利于提高柱效 ,但加入磷酸二
氢铵后 ,引起了峰尾部的突起 ,改为乙酸铵溶液后 ,
分离度有很大改善 ,可以达到基线分离(R≥1. 5)。
3. 2　对样品的提取方法 ,曾比较了采用甲醇或乙醚
为溶剂超声提取 、回流提取和索氏提取器回流提取
等不同提取方法 ,结果发现 ,用乙醚经索氏提取器回
流提取 8 h的方法较好 ,具有简单 ,快捷 ,提取安全
等优点 。
3. 3　熊果酸 、齐墩果酸均为乌梅的有效成分之一 ,
其含量虽然不高 ,但两成分相对稳定 ,净制品 、炭品
二者含量变化规律性较强。同时一次可测定两个成
分 ,有利于二种饮片用同一方法测定二个成分。本
试验给炮制工艺研究及质量标准研究打下一定基
础。
参考文献:
[ 1] 　中国药典一部 [ S] . 2005:54.
[ 2] 　沈红梅 ,易杨华 ,乔传卓. 乌梅的化学成分研究 [ J] . 中草药 ,
1992, 6(2):105.
[ 3] 　沈红梅 ,乔传卓 ,苏中武. 乌梅中主要有机酸的定量动态分析
[ J] . 中国药学杂志 , 1995, 30(3):133.
再论中药生熟的变化与作用
贾天柱
(辽宁中医药大学 ,辽宁 沈阳 110032)
收稿日期:2005-07-12
作者简介:贾天柱(1951～ ),男 ,教授 ,博士生导师,研究方向:中药炮制工艺质量标准及原理研究 ,电话:024-31207101。
关键词:生熟;药性;炮制
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2006)07-0984-02
　　中药有别于天然药物的一个主要方面就是 “加工炮制 ”
后应用 , 而中医用药的两大特点就是辨证施治和复方配伍。
在遣药组方时又非常讲究 “药之生熟” , 生熟效异 , 各有其
功 , 用法不同。中药炮制主要包括净制 、切制 、炮炙。其中炮
炙的内容 90 以上都是生熟的变化。中药的一生一熟不仅
从药性及外形上发生了变化 , 而且从化学成分和药理作用方
面也发生了变化 , 这就是炮制的奥妙所在。至于其制法 , 徐
灵胎在其《医学源流论》的制药论中也提出:“凡物气厚力大
者 , 无有不偏 ,偏者有利必有其害 , 欲取其利 ,而去其害 , 则用
法以制之 , 则药性之偏者醇矣。其制之义又有不同 , 或以相
反为制 , 或以相资为制 , 或以相恶为制 ,或以相畏为制 ,或以
相喜为制;而制法又复不同 ,或制其形 , 或制其性 , 或制其味 ,
或制其质” 。因此 ,炮生为熟势必会带来中药功用 、药性 、外
形 、颜色等多方面的变化。 作者曾于本刊发表过初步见
解 [ 1] , 本文试图就这些问题从传统和现代方法与理论上做进
一步概述 ,可能有些牵强 ,意在抛砖引玉 , 进一步提高和发展
中药炮制学的内容。
1　中药生熟功用之不同
1. 1　生泻熟补　生泻熟补的泻是包括两个方面 , 即直接泻
下和间接泻下作用。间接泻下主要就是指降低机体的功能
的泻。 “补泻”也是中药特性的一方面 , 正如《审视瑶函》用
药生熟各宜论所言:“药之生熟 , 补泻在焉。剂之补泻 , 利害
存焉。盖生者性悍而味重 ,其攻也急 ,其性也刚 , 主乎泻。熟
者性淳而味轻 ,其攻也缓 , 其性也柔 , 主乎补。补泻一差 , 毫
厘千里 ,则药之利人害人判然明矣”。
直接泻下炮制后滋补:如何首乌 ,生用能通便解疮毒 ,制
熟则补肝肾 ,益精血 , 乌须黑发。究其原因主要是生何首乌
中含有蒽醌苷类化合物 , 有直接泻下作用 , 但蒸熟后结合性
蒽醌苷类水解 ,其泻下作用也随之消失;同时一些具有滋补
作用的糖类增加 ,磷脂类成分也有相应的增加 , 还有 2个新
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第 28卷　第 7期
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