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(2008-04-10　收稿)(周济桂　编辑)
水提取荞麦叶总黄酮的工艺研究
李文生　王　峥①　韩淑英②
(通辽职业学院生化系　内蒙古通辽　028000;①河北省唐山妇幼保健院;②华北煤炭医学院药理学教研室)
　　[关键词 ] 　荞麦叶　黄酮类化合物　提取液
　　[中图分类号 ] 　R 284　[文献标识码 ] 　A
　　[文章编号 ] 　1008-6633(2008)04-476-02
　　荞麦(俗称甜荞 F.esculentumMoench)为蓼科植物 , 全草富
含黄酮类化合物 , 特别是花 、叶中含量更高。以往对荞麦种子研
究较多 , 而对荞麦花 、叶研究报道较少 [ 1] 。文献报道荞麦花叶
黄酮类的提取方法有水提取法 、水提醇沉法和醇提取法等 [ 2]。
水提取法工艺简单 、经济 ,但提取率低;水提醇沉淀法工艺较复
杂 , 费用也较高;醇提取法费用高 , 且有一定的危险性。为寻找
简单 、经济的荞麦叶总黄酮提取方法 ,我们研究了水的温度和水
的 pH值对荞麦叶总黄酮提取率的影响 ,报告如下。
1　材料与方法
1.1　材料　荞麦叶为内蒙古通辽市库仑旗种植的荞麦 ,种子收
集后残留在地里的荞麦叶 , 自然干燥 ,粉碎。芦丁购自中国药品
生物制品检定所 , 批号为:0680-9705。旋转蒸发器 ZFQ-5(天
津玻璃仪器厂)。 721型可见紫外分光光度计(北京)。精密 电
子天平(美国)。试验所用试剂均为分析纯。
1.2　方法
1.2.1　提取方法。以黄酮类化合物的常规水提取法 、醇提取法
为基础 , 并在此基础上加以改进 , 应用黄酮类鉴定实验进行鉴
定。提取工艺最佳条件优选:选择提取温度 、提取液的 pH值为
关键因素 , 采用正交实验进行优选 ,其因素水平选择见表 1。
表 1　荞麦花叶总黄酮提取方法的因素水平表
水平 因素A温度(℃) B提取液的 pH
1 75 7.0
2 85 8.0
3 95 9.0
1.2.2　提取的工艺流程。荞麦花叶粉碎※加 15倍量去离子水
并调所需 pH值※加热回流提取 30min※过滤※滤渣再加 10倍
量去离子水※加热回流提取 2次 , 每次 20min※合并 3次滤液 ,
浓缩至原液量的 1/4 ～ 1/5※趁热调 pH 5 ～ 6※过滤除去杂质和
非特异性沉淀 , 滤液静置 36 ～ 48h※过滤得黄色沉淀物样品 ,
80℃烤干 ,既荞麦花叶总黄酮。
1.2.3　质量控制标准。采用紫外分光光度法 , 用标准品芦丁为
对照 ,以黄酮含量作为测定指标 ,测定荞麦叶中不同提取方法总
黄酮含量 , 建立质量分析标准。
·476· 　　华北煤炭医学院学报　2008年 7月第 10卷第 4期　JNorthChinaCoalMedicalUniversity2008 July, 10(4)
2　结果
　　结果见表 2。由表 2可见 , 随着温度和 pH值的增加 , 当温
度为 95℃, 同时提取液 pH为 8.0时 , 其总黄酮提取率最高 , 为
4.57%,而当提取液 pH增加为 9.0时 , 其总黄酮提取率有所下
降 , 为 4.22%。
表 2　正交试验设计及结果统计
实验号 A B 总黄酮提取率(%)
1 1 1 2.16
2 1 2 2.76
3 1 3 2.69
4 2 1 3.61
5 2 2 3.88
6 2 3 3.95
7 3 1 3.93
8 3 2 4.57
9 3 3 4.22
3　讨论
　　本研究方法与传统方法比较优点是:①省时。提取 3次总
时间为 70分钟 ,而传统的提取方法总时间一般为 90 ～ 180分
钟。 ②简单 、成本低。提取溶媒只用水 ,不用乙醇和石油醚等有
机溶剂 , 同时本法提取时间短 , 节省时间 、能量和人力物力。 ③
安全。不用乙醇 、石油醚等有机溶剂 ,而只用水 , 不易燃 ,对人体
无害 , 因此是最安全的。 ④提取率较高。本方法总黄酮提取率
为 4.57%,乙醇提取法总黄酮提取率是 5% ～ 6%, 二者相近。
虽然低于乙醇提取法 , 但成本却是乙醇提取法成本的 1/10。
　　黄酮是保健药品的原料 [ 3] , 荞麦则是提取黄酮的主要原料
之一。本研究方法简单 、经济 , 不需要大型仪器设备 ,尤其对边
远山区对废弃的荞麦叶资源的开发利用 , 具有十分重要的意义 ,
在此提供试验依据 , 供同道参考。
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(2008-06-11　收稿)(陈　迁　编辑)
甲肝灭活疫苗生产中氯仿含量测定方法的建立
高荷清
(河北省唐山怡安生物工程有限公司　唐山　063020)
　　[关键词 ] 　甲肝灭活疫苗　氯仿　分光光度法测定
　　[中图分类号 ] 　R 186　[文献标识码 ] 　B
　　[文章编号 ] 　1008-6633(2008)04-477-02
　　甲肝灭活疫苗生产提纯工艺阶段需用氯仿萃取 , 去除粗制
甲肝病毒中的杂质 , 因而在其中不可避免地有残留有机溶剂存
在 , 因氯仿对人体心 、肝 、肾有损害 , 为加强药品质量监控 , 为此
必须控制生产工艺中残留氯仿的含量。
1　材料与方法
1.1　材料与试剂　乙醚 、 20%氢氧化钠溶液 、碱性吡啶溶液 、
95%乙醇 、0.1%氯仿标准液。
1.2　主要仪器　SPECTROUV-VISAUTO紫外分光光度计
Labomed, Inc, U.S.A。
1.3　检测方法　精密量取供试品 1mL, 置 5mL量瓶中 ,加水稀
释至刻度 , 即为供试品溶液。精密量取供试品溶液 0.5mL, 置具
塞试管中 , 加无过氧化物的乙醚 18mL, 猛烈振摇 3分钟 , 静置。
精密量取乙醚提取液 5mL置具塞试管中 , 加 5mL碱性吡啶 , 混
匀 , 置 80℃水浴中加热 8分钟 , 取出后用水冷却 ,加水至 12mL,
充分振摇 , 静置分层 ,倾去上层液 ,在 520nm处比色。标准曲线:
精确量取 0.1%氯仿标准液 0.1、0.2、 0.3、0.4、 0.5mL, 各管加
蒸馏水至 0.5mL, 其余操作同样品。以标准氯仿浓度(X)为横
坐标 , 以相应浓度的吸收度(Y)为纵坐标作图 , 将 X值 、Y值输
入计算机 , 应用统计学软件 STA1(14)进行数据处理 , 得一标准
曲线回归方程 , 由回归方程及样品的稀释倍数计算出样品的氯
仿含量。
2　结果
2.1　标准曲线(99%可信限范围)　取不同浓度的氯仿标准液 ,
测定吸光值 , 重复 3次 ,相关系数为 0.9714 ～ 0.9898。表明氯仿
浓度在 0.01% ～ 0.05%范围内 , 氯仿标准溶液与吸收度具有较
好的线性关系 , 结果见表 1。
表 1　标准曲线回归方程及相关系数
标准氯仿浓度(%)
0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 回归方程
相关系数
(r2)[ 3]
1 0.004 0.008 0.016 0.027 0.038 Y=0.087X-0.0075 0.9714
2 0.007 0.023 0.046 0.056 0.078 Y=1.75X-.010 0.9898
3 0.007 0.013 0.022 0.033 0.044 Y=0.94X-0.004 0.9874
2.2　6批甲肝灭活疫苗氯仿含量测定结果　应用该方法进行 6
批疫苗氯仿含量测定 , 每批疫苗检测 6次 , 氯仿含量均小于
0.01%,结果见表 2。
表 2　6批甲肝灭活疫苗氯仿含量测定结果
样品批号 上样量(mL) 氯仿含量(%)
平均值
(%)
20050801 1.0 0.0008、0.0004、0.0012、0.0007、0.0009、0.0006 0.0008
20050802 1.0 0.0011、0.0015、0.0007、0.0012、0.0015、0.0006 0.0011
20050803 1.0 0.0011、0.0009、0.0004、0.0004、0.0005、0.0009 0.0007
20050901 1.0 0.0002、0.0002、0.0002、0.0002、0.0001、0.0002 0.0002
20050902 1.0 0.0006、0.0005、0.0007、0.0006、0.0004、0.0007 0.0006
20050903 1.0 0.0002、0.0004、0.0005、0.0003、0.0005、0.0005 0.0004
3　讨论
3.1　标准液浓度的确定　3条标准曲线在 0.01% ～ -0.05% 5
个浓度下所测得的 OD值在 0.004 ～ 0.078范围内 ,而根据理论
吸收值在 0.3 ～ 0.7比较稳定 , 标准氯仿浓度应选择在 0.1% ～
0.5%。由于甲肝灭活疫苗中氯仿含量极低 , 所以标准氯仿浓度
还应在 0.01% ～ 0.05%。因此要求操作人员在测量过程中准
确 、认真 , 将相关系数 r2控制在 0.96以上 [ 3] ,以保证结果的可信
度。本组通过 6批疫苗氯仿含量测定的结果可以看出 , 氯仿含
量均小于 0.01%,说明甲肝灭活疫苗生产工艺可行 , 建议甲肝
灭活疫苗残留氯仿含量限度质量标准应小于 0.01%。
·477·　　华北煤炭医学院学报　2008年 7月第 10卷第 4期　JNorthChinaCoalMedicalUniversity2008 July, 10(4)