全 文 ：作者简介:王慧春 ,女 ,博士 ,副教授　　研究方向:天然药物化学研究　　＊通讯作者:李宝林 ,男 ,教授 ,博士生导师　　研究方向:天然药物
化学研究　　Tel:(029)85303858　　E-mail:whch 66@stu.snnu.edu.cn
RP-HPLC测定翼蓼块根中荞麦七素 A的含量
王慧春 1, 2 ,李宝林 1＊ ,杨战军1(1.教育部药用资源与天然药物化学重点实验室 ,陕西师范大学化学与材料科学学院 ,西安 710062;2.
青海师范大学生命与地理科学学院 ,西宁 810008)
摘要:目的　建立翼蓼块根中新黄酮类化合物荞麦七素 A含量测定方法。方法　采用反相高效液相色谱法 , 用 Shim-pack
ODSC
18
柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm), 以甲醇-0.5 %磷酸溶液(50∶50)为流动相 , 流速为 0.6 mL· min-1 , 检测波长 355 nm,
柱温 20℃。结果　RP-HPLC测定的线性范围为 0.736 0 ～ 5.888 mg· L-1 , (r=0.999 4),平均加样回收率为 98.43%, RSD为
0.65%(n=6)。结论　该方法简便快速 、结果准确 、重现性好 ,可以作为翼蓼药材及相关制剂质量控制的一个有效方法。
关键词:RP-HPLC;翼蓼;黄酮类化合物;荞麦七素 A
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)02-302-03
DeterminationofGiraldinAfromtheRootofPteroxygonumGiraldibyRP-HPLC
WANGHui-chun1, 2 , LIBao-lin1＊ , YANGZhan-jun1(1.KeyLaboratoryofMedicinalResource＆NaturalPharmaceutical
ChemistryofMinistryofEducation, SchoolofChemistryandMaterialsScience, ShanxiNormalUniversity, Xi′an710062;2.Colegeof
LifeandGeography, QinghaiNormalUniversity, Xining810008)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishaRP-HPLCmethodforthedeterminationofanewflavonoidinPteroxygonumgiraldi.
METHODS　TheanalysiswasperformedonaShim-packODSC
18
column(4.6mm×150 mm, 5 μm)withmethanol-0.5 % phos-
phoricacid(50∶50)asmobilephaseataflowrateof0.6 mL· min-1 , andatacolumntemperatureof20 ℃.Thedetectionwave
lengthwas355nm.RESULTS　Thelinearrangeofcalibrationcurvewas0.736 0-5.888 mg· L-1(r=0.999 4).Theaveragere-
coverywas98.43% andtheRSDwas0.65% (n=6 ).CONCLUSION　Themethodissimple, quick, accurateandsuitableto
determinecontentandevaluatequalityofPteroxygonumgiraldii.
KEYWORDS:RP-HPLC;Pteroxygonumgiraldii;flavoneids;giraldiinA
　　翼蓼(PteroxygonumgiraldiDamm.etDiels)为
多年生草本植物 ,属于蓼科翼蓼属植物。该属植物
是中国特有单种属 ,分布于秦岭及其东缘 。其块根
俗称荞麦七 ,是太白山七药的一种 ,具有清热解毒 ,
止血止痛等功效 ,常用于肠炎 、痢疾 、腰腿痛 、便血 、
崩漏等;外用治烧烫伤 、疮疖 、狂犬咬伤等 [ 1] 。但迄
今为止对其化学成分的研究少见报道 。杨战军
等 [ 2]曾分析报道了翼蓼中挥发油的化学成分 ,我们
继续对翼蓼块根的有效化学成分进行分析 ,从中发
现了一类新的黄酮化合物荞麦七素 A和荞麦七素
B,分别命名为 4′, 5 , 5′, 7-四羟基-3-甲氧基-3′-O-α-
L-吡喃阿拉伯糖基黄酮和 5, 5′, 7-三羟基-2′, 3-二甲
氧基-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖基黄酮 ,其中荞麦七素 A
具有强清除自由基活性 [ 3-4] 。本实验首次建立了荞
麦七素 A的 HPLC分析方法 ,旨在为翼蓼块根的进
一步开发利用提供一定的参考依据。
1 　仪器 、试剂与样品
LC-2010高效液相色谱仪(日本岛津), LCsolu-
tion色谱工作站 ,紫外检测仪 ,甲醇为色谱纯 ,磷酸
为分析纯 ,水为超纯水。
翼蓼药材采自陕西省宝鸡市眉县远门云台山一
带 ,由陕西师范大学田先华教授鉴定 。翼蓼块根阴
干后经粉碎机粉碎 ,过 20目筛 ,置于广口瓶中密闭
保存 。荞麦七素 A对照品(本实验室从翼蓼块根中
分离纯化得到 ,按本实验色谱条件 ,峰面积归一化法
计算纯度大于 98%)。
2　色谱条件
色谱柱:Shim-packODSC18 (4.6 mm×150
mm, 5μm);流动相:甲醇 -0.5%磷酸溶液 (50︰
50);流速 0.6 mL·min-1;柱温 20 ℃;检测波长 355
nm;进样量:10 μL。
·302· ChinPharmJ, 2010 February, Vol.45 No.4　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 2月第 45卷第 4期
3　方法学考察
3.1　荞麦七素 A对照品储备液的制备
精密称取荞麦七素 A对照品 18.4 mg,置于 50
mL量瓶中 ,用甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,精密吸
取 4 mL, 加甲醇定容至 10 mL, 制成每 1 mL含
0.147 2 mg的溶液 ,即得 。
3.2　样品溶液的制备
精密称取翼蓼块根药材粉末 1 g, 置索氏提取
器中 ,加乙醚适量 ,加热回流提取至无色 ,放冷 ,弃去
乙醚液 。再加甲醇 90 mL, 加热回流提取至无色 ,提
取液转移至 100 mL量瓶中 ,用少量甲醇洗涤容器 ,
洗液并入同一量瓶中 ,加甲醇定容 ,摇匀。精密量取
10 mL,至 100 mL量瓶中 , 加甲醇定容 , 摇匀 ,经
0.45 μm微孔滤膜过滤 , 取续滤液备用 。
3.3　线性关系考察
精密量取荞麦七素 A对照品储备液 0.05,
0.1, 0.15, 0.2, 0.3, 0.4 mL置 10 mL量瓶中 , 用
甲醇稀释并定容至刻度 , 摇匀 , 配制成荞麦七素 A
对照品系列溶液 。在上述色谱条件下进样分析 , 测
定峰面积 。纯荞麦七素 A的保留时间为 14.078
min(图 1)。以纯荞麦七素 A的峰面积(Y)对质量
浓度(μg, mg·L-1)进行线性回归计算 ,得线性回归
方程为:Y=34 543ρ-7 159.4(r=0.999 4),线性范
围 0.736 ～ 5.888 μg。
3.4　精密度实验
取同一浓度的荞麦七素 A对照品溶液 ,在上述
色谱条件下同日内测定 6次 ,计算出日内 RSD为
0.54%,再连续测定 3 d,计算出日间 RSD为 2.26%。
3.5　重复性实验
称取同一来源的翼蓼块根样品粉末 6份 ,按
“ 3.2”项下操作 ,平行制备 6份供试液 ,进样 ,测量
峰面积 ,计算含量 , RSD为 0.78%。
3.6　回收率实验
精密称取已知含量的翼蓼块根样品 5份 ,每份
约 0.25 g,按 “ 3.2”项下制备供试液 ,分别精密加入
荞麦七素 A对照品储备液 1.5 mL,混合均匀 。在同
一色谱条件下重复 6次 ,进样量 10 μL,测定峰面
积。计算得平均回收率为 98.43%, RSD=0.65%。
3.7　样品溶液的稳定性实验
取新制备的样品溶液分别在放置 0, 2, 4, 6, 8,
10, 12 h后 ,进样分析 ,记录峰面积 ,结果表明 ,供试品
溶液在室温下放置 12 h内稳定性良好 , RSD为
0.89%。
4　含量测定结果
分别吸取上述荞麦七素 A对照品溶液和样品
溶液各 10 μL,进样 ,记录色谱图 ,按外标法以峰面
积计算样品中荞麦七素 A的含量 。结果翼蓼块根
药材中荞麦七素 A的含量为 0.26%。
5　讨　论
采用索氏提取法 , 以甲醇为溶剂 ,考察了脱脂
前和脱脂后的提取效果 ,发现用乙醚脱脂后提取物
中干扰峰较少 ,色谱分离效果较好 , 故采用先用乙
醚脱脂再用甲醇提取的方法 。
高效液相色谱法测定中药药材或制剂中的黄酮
类成分 ,文献报道较多 [ 5-6] 。由于黄酮类化合物结构
中多含酚羟基 ,呈弱酸性 ,在流动相中经常添加一定
比例的冰醋酸 、磷酸等抑制解离并减少拖尾。本实
验在借鉴文献 [ 7-10]方法的基础上 ,根据具体情况 ,对
色谱条件进行了优化。
纯荞麦七素 A,在 200 ～ 800 nm范围内进行波
长扫描 ,发现在 267及 355 nm处有较强吸收峰 ,但
在 355 nm处检测时样品中其他成分的干扰较小 ,
基线平稳 ,有良好的信噪比。故选择 355 nm为检测
波长 。
以甲醇 、甲醇 -水与乙腈 -水为流动相皆能获得
较好的分离效果 ,但都有拖尾现象 ,加入 0.1% ～
图 1　纯荞麦七素 A溶液(A)及样品溶液(B)的色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramofstandardsolution(A)andpuregiraldiinAsolution(B)
·303·中国药学杂志 2010年 2月第 45卷第 4期　　　 　 　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010 February, Vol.45 No.4
1.0%磷酸后峰形均得以改善 ,且 0.5%磷酸的效果
最明显 ,故采用甲醇-0.5%磷酸水溶液(50∶50)作为
流动相 。随着流动相流速的增加 ,出现柱压和基线
不稳等问题 。综合考虑 ,最终选择甲醇-0.5%磷酸
(50∶50)水溶液为流动相 ,流速为 0.6 mL· min-1流
速等度洗脱 ,在 30 min内能实现一次分析操作 。该
色谱条件分离效果较好且操作简单 , 基线噪声小 ,
重现性和稳定性好。
我们选择 20 ℃恒温 ,因其接近室温柱压稳定。
本测定方法简便快速 、结果准确 、重现性好 ,为
翼蓼药材资源的开发利用提供了一定的理论依据。
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(收稿日期:2009-04-20)
作者简介:刘毅 ,男 ,助理研究员　　研究方向:药物分析　　Tel:(010)67095747　　E-mail:liuyi@nicpbp.org.cn
HPLC测定维生素 B12注射液的含量和有关物质
刘毅 , 岳志华(中国药品生物制品检定所 , 北京 100050)
摘要:目的　建立测定维生素 B12的含量和有关物质的高效液相色谱法。方法　采用以十八烷基硅烷化学键合硅胶为填充剂
的色谱柱 , 流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液 pH3.5(26∶74), 检测波长为 361 nm。结果　线性浓度范围 20.22 ～ 505.60 mg· L-1
(r=0.999 97),最低检测限为 3 ng, 样品溶液(避光保存)至少在 24 h内稳定 , 平均回收率为 100.8%, 精密度(RSD=0.1%)、
重复性(RSD=0.1%)良好。结论　用同一高效液相色谱法来测定含量和有关物质 ,经方法学验证 ,此方法简便 、灵敏 、准确。
关键词:维生素 B12注射液;含量测定;有关物质
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)04-0304-03
DeterminationofContentandRelatedSubstancesinVitamineB12 InjectionbyHPLCMethod
LIUYi, YUEZhi-hua(NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts, Beijing100050, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishahighperformanceliquidchromatographyassayforthedeterminationofvitamineB12injec-
tion.METHODS　C18 waspackedintheanalyticalcolumn.Themobilephaseconsistedofmethanol-phosphatebuffersolventpH3.5
(26∶74).Thedetectionwavelengthwas361nm.RESULTS　Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof20.22 to505.60mg·
L-1(r=0.999 97).TheLODwas3 ng.Thesamplesolutionkeptindarkplacewasstablewithin24 h.Theaveragerecoverieswere
100.8%.Validation(RSD=0.1%)andrepeatability(RSD=0.1%)weregood.CONCLUSION　Thismethodwassimple, sensi-
tiveandcouldbeusedforthequalityevaluationofvitamineB12 injection.
KEYWORDS:vitamineB12 injection;quantification;relatedsubstances
·304· ChinPharmJ, 2010 February, Vol.45 No.4　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 2月第 45卷第 4期