全 文 ：第12 卷 第2 期
1 95 5 年6 月
水 生 生 物 学 报
人C T A HY D R O I BO L O G I C AI SN I C A
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1 2
,
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,
1 9 8 8
盐泽螺旋藻藻胆蛋白的分离和特性研究 *
刘其芳 王后乐 张宪孔
(中国科学院水生生物研究所 , 武汉 )
提 要
盐泽螺旋藻 ( SP 介戚“ `沥` als “ ) 的水溶性色素粗提物经过硫酸钱沉淀和径基磷灰石 ( H A )
柱层析后可以分出两种藻胆蛋白 ,即藻蓝蛋白 ( c 一 P C ) 和别藻蓝蛋白 ( A P c) 。 它们的纯度 (指其
在可见光部分的最大吸收与 2 8 o n m 处吸收之比 ) 可分别达到 夕. 27 ( “ 一 P c) 和 6 . 5 ( A P c) 。 而
一般认可的纯度标准 , P c 为 , , A P C 为 6 。 纯化后的 c 一 P C 和 A P C 在聚丙烯酸胺凝胶电泳
( P人G E ) 中仅见一条色带 , 其最大吸收峰分别在 6 2 0 n m 和 ` 5。二二 , 其室温荧光发射峰分别为
石4 2 n m和 6 5 7 o m o
通过十二烷基硫酸钠一聚丙烯酸胺凝胶电泳 ( S D S一 P A G E ) , 无论胶浓度在 1 1 . 5肠 或是在 7一
15 肠的梯度中 , C一 P c 均可分为 “ 和 月两个亚单位 , 而 A P C 除 “ 和 召两个亚单位外 , 在 7一
15 够 梯度 s D S一 P A G E 中还偶见一个 1拉 D 左右的无色多肤 , 它可能与 A P C 结合较紧密 , 为藻
胆体“核 , ,亚结构的组分 ,类似于 G la z e r ( 1 9 5 5 ) 〔” ’ 报道的聚胞藻 ( s , 。 。 c` o c夕 : , i , ) 6 7 o r 中的
10 k D 多肤 。 盐泽螺旋藻的 C一 P C和 PA C 的亚单位分子量分别为 : c 一 P C一 二 , 1 6 . 0k D ; c 一 P C 一民
1 9
.
s k D ; A p C 一 a , 1 5
.
, k D ; A p C一月, 1 8 . o k D 。 依此推算该藻的 c 一 p C 和 A p C 的最小分子量应为
3 弓. 5 k D 和 3 3 . ; k D 。 它与钝顶螺旋藻 ( s户i产 “ l i o a 户l a “ , ` i` ) 相比显得稍低 , 但又略高于其它几
种蓝藻 。
经等电电泳法测定 ,其 c 一 P C 和 A P C 的等电点分别在 4 . 4 和 4 . 6 , 它与以往报道的一些
蓝藻大抵相当 。
盐泽螺旋藻的藻胆蛋白占细胞干重的 2 8 · 斗% 左右 , 可望成为人类优良的蛋白源 。
关键词 蓝藻 盐泽螺旋藻 藻胆蛋白 s D S一 P A G E
藻胆蛋白为蓝藻 、 红藻和隐藻的主要捕获光能色素蛋白〔们 6加 ,根据在可见光吸收范围
内的最大吸收波长位置 ,藻胆蛋 白被分成 3 个主要大类 z1[] : ① 藻蓝蛋 白 其中有 c 一 P C
( 又m : x 6 2 0 l m , 又二a x 6 4 8 n m ) 、 R 一 p C (又m a x 6工8 , 5 5 5 n m , 又二。 x 6 3 6 n m ) 和隐藻的 P C 一 6 1 5 、 P C 一 6 3 0 和
p C 一 64 5 以及最近报道的存在于蓝色 裸 甲藻 ( G y 。 : od i成“ 。 ` ya 叮“ m ) 中的 P C 一 6 45 和
P e 一 6 2 9〔1 , 2 〕 ; ② 别藻蓝蛋白 : 有 A P C (又m a 二 6 5 o n m ; 又二a二 6 7 7 n m ) 和 A P C 一 B (兄二 a二 6 7 0 ,
石1 8。 m : 又黑。 : 6 8 o n m ) : ③藻红蓝蛋 白: 包括 C 一 P E以 m a二 5 6 4 n 二 ; 又盖a : 5 7 7 n m ) 、 b一 P E (又m a x 5 6 3 ,
5 4 5
n m : 又二a 、 5 7 o n m ) 和 B一 P E (又m a二 5 6 7 , 5 4 0 和 4 9 8 n m ; 又黑二 二 弓7 8 n 。 ) 。 此外 , 还有藻红蓝
蛋 白以二 a 二 5 8 O n m ) 。
在 。一 P C 、 A P C 和 A P C 一 B 中均包含了同样的藻蓝素发色团 ( P C B ) ; 在 R 一 P C 中
除含有 P C B 外还含有藻红素发色团 ( P E B ) ; 在 c一 P E 和 b一 P E 中仅有 P E B , 而在 R 一 P E
* 本工作承黎尚豪教授关心宁爷 , 特此致谢 !
19 86年 10月 13 日收到 。
2期 刘其芳等 :盐泽螺旋藻藻胆蛋白的分离和特性研究
和 B一 P E中还含有藻尿胆素 ( PU B) ;在藻红蓝蛋白 ( P Ec )中更有一个未知结构的胆
色素 ( Px B)山 1。 所有已知结构的发色团都是开链 的四咄咯环 , 当它们与天然蛋 白的 “ 和
夕亚单位通过醋键或硫醚键共价相连后便产生了捕获光能的作用 tZ+o]
蓝藻和红藻普遍包含 。 一 P c 或 R 一 P C 和 A P C[ 川。 在一些蓝藻和所有红藻中则含有
P E
。 大部分蓝藻和红藻还含有少量的 A P C 一 B 。 此外 , 在部分缺乏 P E 而有异形胞的蓝
藻中:还存在 P E oC
藻胆蛋白以近乎 1 0 务 的高效率把光能优先地传递给光系统 1 ( P lS l) 反应中心叶
绿素 alt o,1 , ]。 其能量传递顺序为叫 :
A P B ( A P C
一 B 的 “ 亚单位 )
e 一 , B 一 或 R 一 P E或 P E C
c 一 P C {{
“
R 一 P C 一 A P C 核 一膜联结多肤
(又m a 二 、 5 6 5 n m )
。 或
(沈m a x 七 6 2 0 n 二 )
m : x 七 6 5 0 n m )
( 又。 a x 6 8 0。 m )
蓝藻的藻胆蛋白甚至 占到细胞可溶性蛋白的 60 外 (干重的 20 多 ) L61 。 每当氮饥饿时
藻胆蛋 白随之减少 , 因此藻胆蛋白可视为蓝藻的氮库 [火
盐泽螺旋藻生长块 、 蛋白含量高 1) , 作为人类蛋白的直接或间接来源是一个很有希望
的材料幻 。 因而 , 无论是从探索光合作用光能捕获器的角度还是从寻求人类蛋白新来源的
角度对盐泽螺旋藻藻胆蛋 白的研究都是颇有意义的。 作者另文对盐泽螺碑藻藻胆体的多
肤组分和光谱特性作了报道阎 ;本文则是对其有色多肤部分 (即藻胆蛋白 )进行 了分离 、 纯
化及其特性研究的结果。
材 料 与 方 法
藻体培养 : 所用盐泽螺旋藻 ( SP 行耐 i , 。 : “ bs al as va r . ) 为南京大学赵英华老师赠送 。
生长于修改的 Z ar r ou k 氏培养基中 (其中 N a H c o : 和 K ZH P O ; 均减半 ) 。 冷白荧光灯
连续光照 ,光强约 1” 产Em 一 2 5一 ` , 温度在 30 ℃ 左右 , 通空气培养。 一般生长 5天后 , 于其
对数生长后期离心收获 。
藻胆蛋 白粗提物的制备 : 将离心收集的藻体用蒸馏水离心洗涤两次后 , 重新悬浮于
等体积的 0 . 0 1 m al / L ( p H .7 0) 的磷酸盐缓冲液中 , 并置于液氮中冷冻。 融化时尽量维
持在 5℃ 左右。 继以超声波破碎细胞 ( J C 一 3 超声处理机 , 振幅 5 0 , 每超声 30 秒间隙 20
秒 ) , 并辅以显微镜观察 , 直至几乎全部细胞破碎为止 ,随后离心 ( 斗0 0 o x g , 30 分钟 ) ,取
蓝色上清液。 其中的 。 一 P C 和 A P C 浓度按《藻类学方法手册》圈中的公式计算。
藻胆蛋白的分离与纯化 : 先将上述离心所得的蓝色上清液用 50 多 ( w / V ) 饱和度的
硫酸钱沉淀 , 然后离心 ( 1 0 o o o X g , 10 分钟 ) 收集沉淀并溶于少量 o . 0 1m ol / L >i( H 7 . 0)
1)
、 ’劝
赵英华等 , 1 9 8 5。 第二届藻类学会论文集 。
水生所第五研究室生化组工作报告 。
L
1 4 8水 生 生 物 学 报 1 2卷
的磷酸盐缓冲液中 , 随即对着 0 . 0 01 m ol / L ( p H 7 . 0) 的磷酸盐缓冲液彻底地透析至平衡
(约更换缓冲液 3一 4 次 , 至少 斗小时 )。 当离心 ( 40 0 0 x g , 10 分钟 ) 除去变性蛋白后 ,
其上清液直接上已用 o . OOl m ol / L ( p H 7 . 0) 的磷酸盐缓冲液预平衡 了的 H A 层析柱 ( I X
4c m )
。 在洗脱过程中不断增加磷酸盐缓冲液的离子强度 , 并分别收集不同离子强度缓冲
液的洗脱液。 立即进行光谱测定或暂贮于低温冰箱。
所用的磷酸盐缓冲液均含有 0 . 2 m ol / L N a CI (以利 H A 对蛋 白的吸收 ) 、 o . o 01 m al /
L 疏基乙醇和 o . 0 0l m ol / L 叠氮钠。 全实验均在弱光和低温下进行 。
藻胆蛋白亚单位的分离 : 先将从 H A 层析柱洗脱下的已达到吸收光谱纯度的藻胆蛋
白 , 用 .7 5异 P A G E 作进一步电泳鉴定 14[ ]。 如为一条色带 , 再以 n . 5% 或梯度为 7一 15 多
的 S D S一 P A G E 分析其亚单位。 凝胶配制和电极缓冲液系统基本按 W o b e r 等方法 〔2习。 电
泳在 10 m A , 60 v 下进行 , 并维持在 10 ℃ 左右。 电泳后用考马斯亮蓝 G 一 25 0 染色 , 醋
酸一甲醇一水褪色 。测定分子量的标准蛋 白为 : 牛血清蜜白 ( 68 0 0 。 ) 、 过氧化氢酶 ( 60 0 0 0 ) 、
卵白蛋白 ( 4 3 0 0 0 ) 、 狗铁蛋 白单体 ( 1 8 5 0 0 ) 和溶菌酶 ( 1 4 3 0 0 ) o
等电点测定 : 采 用 .7 7多 聚丙烯酸胺凝胶等电电泳法 。 p H 范围 4一 10。 上槽液为
0
.
2拓 H Z S O , , 下槽液为 0 . 4务 乙二胺 。
氨基酸分析 : 样品按常规处理 。 用 日立 8 3 5 一 5 0 型氨基酸分析仪测定。
光谱分析 : 吸收光谱用 日立 5分 紫外分光光度计测定 。 室温荧光发射光谱 用 日立
M P F一 4 型荧光分光光度计测定。 狭缝 1 on m 。 激发波长 5 8 0n m 。
密度扫描 : 、 以 C h r o m os ca n 2 0 型密度计测定。
蛋白测定 : 采用 F iol n 酚试剂法。
结 果 与 讨 论
盐泽螺旋藻的水溶性粗提物 先以 50 界 饱和度的硫酸按沉淀。 经一次 H A 柱层析后 ,
其 。一 P c 和 A P C 的纯度分别达到了 7 . 27 和 6 . 5 5。 两者均超过了一般认可的纯度圈 。 其
洗脱顺序为 。一 P C 在前 , A P C 在后 。两者被洗脱的离子强度分别约为 o . O 05 m ol / L ( c 一 P C )
和 0 . 10 m 。 l/ L ( A P )C 磷酸钾缓冲液 ( p H 7 . 0 ) 。 显然 , 盐泽螺旋藻的藻胆蛋白粗提物通
过一次硫酸按沉淀和一次径基磷灰石层析柱是完全可以达到纯化的 , 其成败关键在于选
择大小合适的 H A 粒度 、 降低层析柱的洗脱流速并在低温 ( < 10 ℃ )条件下进行。
纯化后的盐泽螺旋藻的 c 一 P C 和 A P C 的 最 大 吸 收峰分别位 于 6 2 0n m 和 6 5 0n m
(图 l ) ; 室温荧光发射峰分别位于 6斗Z n m 和 6 5 7n m (图 2 ) 。 这些和一般报道的蓝藻 , 诸
如 : 鱼腥藻 ( A , 召 b探 e , ` s P . ) 、 聚球藻 ( S夕, 。 c五o c o c c 。 , s P , ) 、 隐球藻 ( A Ph a n o c a P , 口 s p . ) 以及
钝顶螺旋藻 ( SiP r o l￡, a lP a , e , , 15 ) 〔` 6 , 3 , , J 相近似。
通过 n . 5 % S D S 聚内烯酸胺凝胶电泳 (或在 7一 1 5% 梯度 s D S一聚丙烯酸胺凝胶板
状电泳中 )可见 c 一 P C 由 “ 和 夕两个亚单位组成 , 其分子量分别为 1 6 0 0 0 和 19 5 0 0 ; A P C
亦由两个亚单位构成它们的分子量分别为 1 5 50 0 ( a) 和 1 8 0 0 0 (夕) (图 3 . 4 ) 。 若用 7一
1 5务 S D S一 P A G E , 染色后偶见 A P C 带着一个小分子的无色多肤 , 分子量约为 14 . k0 D ,
它可能与 A P C 结合较紧密 , 为藻胆体 “ 核 ” 亚单位组分之一 , 类似于 lG az er 等山 , ( 19 8 5 )
2期 刘其芳等 :盐泽螺旋藻藻胆蛋白的分离和特性研究 1斗 9
所报道的聚胞藻 (y so e c人 o c夕了 r艺 s ) 6 7 1 0中 的 l ok D
62 0
n 6 5 0
.`
.78. 0叫。 u璐 qó 50必月
。 .4
0
.
3
。之扫门工。斟荟孚蓄
50 0 6 007 00
波长 (nm )W抑 e el ngh t (nm )
多肤 。 由以上亚单位的分子量推算盐泽螺
旋藻的 c一 PC和 A PC的最小分子量
分别为 3 5.k D 5和 3 .k 5D, 较钝顶螺旋
藻 ( 5 . P l a t。 。 st’ s ) 的 P C 和 A P C 低
(它们分别为 4 4 . Ok D 和 3 8 . o k D ) 。 然
而 , 盐泽螺旋藻的 。 一 P C 最小分子量
与鱼腥藻 ( A n a b a e n a s p . , 3 6 0 0 0 ) 相
近 , 并高于层理鞭枝藻 ( M as it go cl a du ,
l a m i , 0 5“ 了 , 2 8 0 0 0 ) 〔, , ; 而其 A p e 的最
小分子量却又高于鱼腥藻 ( A加 b召 e。
s p
.
, 2 9 6 0 0 ) 并与聚球藻 ( S y n 己c h o c -
o c c “ 了 s p · , 3 3 0 0 0 )「
, , ` 2〕相近。 这些差
异多半是种的不同造成 , 当然也不能
排除实验条件的影响 。
经密度扫描 , 染色后的 c 一 P C 和
A P C 的 S D S一 P A G E 胶片明显可见
ù.尸36
爬八曰i\.二`吸.`.., .
图 1 盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白 (一 · 一 · 一 )和别
藻蓝蛋白 (— )的吸收光谱 (分别在 。 . O05 m 。 灯L ( p H 7 . 0 )和 0 . l m o l / L ( p H 7 . o ) 的磷酸盐缓
冲液中 )
F 19
.
1 A b s o r p t i o a s p e e t r a o f p h y e o c y : n i n
(
- ·一 、 a o d a l l o p h y e o e y a n i n (— ) i s o l a t 。 df r o m s 户爹r : ` “ n a , “ b s a ` a 。 口 , . , i n 0 . Oo s m o l / L
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b u 仃。 r ( P H 7 . 0 ) , r e s p e e t i v e l y
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图 2 盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白(一 · 一 · 一)和别
藻蓝蛋白 (— ) 的室温荧光发射光谱。 分别在0 · o o s m o l / L 和 o . l m o l / L ( p H 7 . o ) 的磷酸盐
缓冲液中 。 激发波长 5 8 O n m , 狭缝 I On m q ` 2
厂1 9 . 2 R o o m 一 f l u o r e s e e n c e e m i s s i o n s P e c t r a
o f 占对, : `il n a s , ,沙, a l s a o a r . p五y e o e y a n i n ( -一 )
a n d a l l o p h y e o e y a n i n (— 、 i n 0 . o o s m o l / La n d o · l m o l / L K 一 p h o s p h a t e 一 0 . 2 m o l / L N a C I
b u f e r
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p H 7
.
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E x e i t a t i o n
w a v e l e n g t h w a s , s o n m
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T h e e x e i t i o n a n d
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50 0 60 0 70 0
波长 (n m ) W a v e le n g ht (n m )
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粉 P C 的 “ 和 夕亚单位和 A P C 的 “ 和 夕亚单位以及一个约 1 4 . o kD 的 无 色多肤 (图 5 )。
通过等电电泳法测得盐泽螺旋藻的 c一 P c 和 A P C 的等电 点 ( IE P ) 分别 为 来 4 和
卜山é血
水 生 生 物 学 报 1 2卷
图3 盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白 D S s一 PA G E图谱。1 .粗提物; 2, 3 . 藻蓝蛋白 ;
4
. 标准蛋白 ; 5 , 6 别藻蓝蛋白
F i g
.
3
f r o m
L a n e
s D s s l a b g e l e l e e t r o p h o t o g r a m s o f ht e p u r i f i e d p h y e o e y a n i n a n d a l l o p h y e o e y a n i n
S
一了 t一石了 a l ` a 夕口犷 . L a n e l , e r u d e e x t r a e t ; L a n e 2 a n d 3 , a a o d 吞 s u b u n i t s
4 , 5 t a n d a r d p r o t e i n m a r k e r s o f k n o w n m o l e e u l a r w e i g h t ; L a n e s
o f p h y e o c y a n i n ;
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s u b u n i t s o f a l l o P h y c o e y a n i n
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0 2 3 4 5 6迁移率 ( e m ) M o b iil t y
8 9 10
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4
s u b u n i t s
、V e t e a s
图 斗 盐泽螺旋藻藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白立单位的分子量
C a l i b r a t io n l i n e f o r t h e m o l e e u l a r w e i g h t s o f t h e p h y c o e y a n i n
`
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f r o m s P i r t’ il ” a s “ 占了 a l了 a 口 a r . a n d m a r k e r s .
f o l l o w : c 一 p C 一。 16 0 0 0 ; C 一 p C一产, 1 9 5 0 0 ; A p C -
T h e m o l e e u l a r w e i g h t
a l l o p h y c o e y a n i n
o f t h e s u b u n i t s
15 5 0 0 ;
w e i g h t s o f t h e k n o w n m 3 r k e r s w e r e
: 1 l y s o z y m e
,
1 4 0 0 0 ; 2
,
A p C
一户, 1 8 00 0 . T h e m o l e c u l a r
a p o f e r r i t i n m o n o m e r
,
1 8 50 0 ;
3
, o v a l b u m i n
, 4 3 0 00 ; 4 `召 t a l a s e , 6 0 0 0 0 ; 5 , b o v i n e s e r u m a l b u m i n , 6 8 0 0 0
4
.
6。 两者的差别和其所含的二梭基氨基酸及碱性氨基酸的不同比例相关。 由表 1可见
奋 P G 所含的二竣基氨基酸 (天冬氨酸和谷氨酸 ) 与碱性氨基酸 (赖氨酸 、 精氨酸和组氨
酸 )之比略高于 A p C , 因此其 IE P 稍低于 A P C 。 这与鱼腥藻 6 4 1 1 ( 刀。 : b口 e。 夕 s P . 6 4 1 1 )
2期 刘其芳等 :盐泽螺旋藻藻胆蛋白的分离和特性研究 1 51
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迁移距离 M ig r a t i o n d i s t a n C e
图 5 盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白 ( · 一 · 一 )和别藻蓝蛋白 (— )的 S D S一 P人 G E胶片的密度扫描F ig . 5 D e n : i t。 m e r r i e s e a n o f e一 p C ( - ·一 ) a n d A p C (— 少s u b u n i , 5 f r o m 5 . 5 2` b , a l , ao n a S D S一 P A G E g e l
表 1 盐泽螺旋藻筑蓝蛋白 ( c 一 P C ) 和 别燕蓝蛋 白 ( A P C ) 的氨基酸组成 。
r a b
,
1 C o m p a r i s i o n o f t h e a m i n o a c id e o m p o s i o n s o f C
一 p C a n d A p C f r o m 5
. 了 u b 了a石 a 岁 a ,、 V a l u e s
o b t a i n e d f r o m t h r e e a n a l y s e s
.
A v e r a g o v a l u e s f o r 2 4 h h y d r o l y s a t e s a s %
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戛基一酸一 — 一 ) 。 一 P c { A cP
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天冬氨酸
苏 氨 酸
丝 氨 酸
谷 氨 酸
甘 氨 酸
丙 氨 酸
耽 氨 酸
撷 氨 酸
蛋 氨 酸
异亮氨酸
亮 氨 酸
酩 氨 酸
苯丙氨酸
赖 氨 酸
组 氨 酸
精 氨 酸
脯 氨 酸
色 氨 酸
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未测
5 12水 生 生 物 学 报 2 1卷
和多变鱼腥藻 ( A .、 ; i .b a i l, ) 的情况类似 , 即 A P C 的 IE P 高于 P C , 但盐泽螺旋藻
的 。一 P C 和 A P C 的等电点低于以上两种鱼腥藻 , 它们分别为 4 . 92 和 5 . 18 以及 4 . 76 和
4
.
9 2〔 , ,。 若同聚球藻 ( S y n e e h o e o c e u s s p . ) 和隐球藻 ( A P入a n o c a P, a s P . ) 比较 , 盐泽螺旋
藻 A P C 的 IE P 显得较高 , 它们分别为 4 . 2 2 和 .4 26 , 而其 P C 的 IE P 却又低于上述两
种藻 (分别为 4 . 7 6 和 4 . , 4 ) t, , , 。
盐泽螺旋藻的 c一 P C 和 A P C 的氨基酸组成列于表 l 。 两者的苯丙氨酸和蛋氨酸均
较高。 在 A P C 中未测出脯氨酸和酪氨酸 , 在 c 一 P C 中未测出脯氨酸 、酪氨酸 、 精氨酸和
组氨酸很可能是含量较低所致 。 在 A P C 中缺乏组氨酸与一般报道相一致 。
盐泽螺旋藻所含藻胆蛋白占细胞干重的 28 . 4多 , 与一般蓝藻相比是较高的 , 可望成为
人类新兴的蛋白源 。
参 考 文 献
24,768910此抖绍
f 15了
{{: {
胡鸿钧 、俞敏娟 、张宪孔 , 1 9 8。 。 蓝裸甲藻藻胆素的发现和意义 。 科学通报 , 25 ( 4:) 65 1一 6 5 3 。
张宪孔 、刘梅 、刘其芳 、 王后乐 、 黎尚豪 , 19 8 2。 蓝裸甲藻藻蓝素的初步分离和光谱特性 。 科学通报 , 2 7 ( 2 ) :
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M
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A
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.
N i t r o g e n e h l
o 厂 0 5 15 i n b l u e一 g 刃 e e n a l g a e
.
A r c 人. M i c r o b i o l , 6 9 : 1 14一
12 0
.
B e n n e t t , A
.
a n d B o g o r a d
, L , 1 9 7 1
.
p r o p e r t i e s o f s u b u n i t s a n d a g g r e g
a t e s o f bl u e
一g r e e n a l g a l b i l i p
r o t e i n s
.
B i o c h`邢 i 了t r夕, 1 0 : 3 62 5一 3 6 3 4 .
B i n d e r
, A
.
W i l
s o n , K
.
a n d Z u b e r
,
H
,
19 7 2
.
-C P C f
r o m t h e t h e
r
m o Ph i l i。 bl u e一 g r e e n a lg a M a
了t心o c l a d u ,
l a仍 i n o “ 二“ 5 . F EB S . L 亡 r o 2 0 : 1 1 1一 1 1 6 .
B o u s s i b a
,
5
.
a n d R i e五m o n d , A . E . , 19 79 . I s o l a t io n a n d e h a r a e t e r i z a t io n o f p五邪 o e ay n i n fr o n t五e b lu e 一g r e e n
a l g a
.
S P i r “ l i n a P l a t叮月了f s . A r c人. M介 r o吞10 1. , 1 2 0 : 一 15 5一 1 5 9 .
B r y a n t , D
.
A
.
G l a z e r
,
A
.
N
.
a n d E i s e r l宜n g , F . A , 19 7 6 . Ch a r a c t e r i . t i o n a n d s t r u e t u r a l P r o P e r t i e s o f t五e
m a i
o r b i l i p r o t e i n s o f 对 , a 占` 。。 a s P . , 汉 r幼 . 材`c r o吞￡0 2. 1 1 0 : 6 2一7 , .
B工 y a n t, D
.
A
.
e u g l i e m
,
G
. , 介 n d e a n , d e , M a r s a c , N . , e a 3 t e r s , A . M . a n d co 五n 一 B a z i r e , G , 1 9 7 7 . T h e
s硫 e t u r 。 。 f 。 y a n o b a e t e r i a l p h , e o b i l i s o m e : : 二 m o d o z. 12 3 : 1 3一 2 7 .
B r y a n t , D
.
A , G u g l i
e
m
,
G
.
,
T a n d
e a n , d e
,
M
a r s a e , N
,
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B a
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G
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s t r u e t u r e o f e y a n o b a e t e
r
i o l p h y c o b i l i s o m
e s : a m o d
廿 1 A r c人. M 玄c r o b i o l , 1 2 3 : 13一 2 7 .
C h
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,
D
.
J
,
1 9 7了. B i o p r o t e i n a n d b i l e p i g m Z n t s . I n : t五e B i o l o g y o f B lu e一 G r e e n A I卯 e , N . G . e a r r ,
B
.
A
.
W h i t t o n
, e d
, p p
.
1 6 2一 18 5 . B e r k e r l e y 一L o s a n g e l e s : U n i v e r s i t y o f C a l i f o r n i a p r e s s .
C o h e n
一 B a z i
r e , G , B e g u i n
,
D
.
M
, R i m o n
, S , G l a
Z e厂 . A
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N
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a n d B
r o w n , D
.
M
, 1 9 7 7
.
P h y s主o e h e m i e a l a n d
i m m u n
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l o g i
e a
l p
r o p e r t i e s o f a l l o p h y e o e y a n i n s
.
A
r c 入 入了i c r o b i o l , 1 1 1 : 2 2 弓一 2 3 8 .
C
o
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e n 一 B a z i
r e , G
.
a n d B r y a n r
,
D
.
A
,
,
29 8 2
.
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e o bi l主s o m e s r r u e r u r e a n d e o m p o s i r i o n I n : N . G . C a r r ,
W h i t t o n
, B
.
A
, e d s
,
T h e B i o l o g y o f C y a n o ba e t e r i a
.
U n i v e r
s
i t v o f C a l i f o
r n i a P r e s s
, p p
.
14 3一 1 9 0 .
D a v i s
, B
.
J 1 9 6 4
.
D i s
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e e t r o p h o
r e s i s
.
11
.
M
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i o生 a n d a p P l i e a t i o n t o 五u rn a n s e r u m p r o r e i n s . A 理刀 . N y .
A c
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, 1 2 1 : 4 0 4一 4 2 7 .
E r五a r d , M . , K o l l e r , K . a n d w e h ym e y e r , W , 19 8口
.
B i l i p r o t e i n a s
s巴
m b ] y i n rh e d主s e 一 sh a p e d p h界 o b i l主s o m e s
o f R h o d e l l
a f 艺o l a c e a e l e e t r o n m i e r o s e o P i e a l a n d b i o e h e m i c a l a n a l y s e s o f C P h y c o e y a n i n a n d a l l o P h” o e y a n i n
a g g r e g a t e s A
r c 左, M介 r o 占10 1 , 1 2 5 : 5 1一 5 3 .
G a n t t , E 1 97 5
.
L ig h t
一
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e s t i n g p i g m e n t e o m Pl
e x e s
.
B i
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,
2 5 : 7 8 1一7 87 .
G a n t t , E 19 8 1
.
P五界 o bi l j s o m e s : a m o d e l . 才 cr 人. 尸亡夕 . P I` 探 z P左夕了10 1 , 3 2 : 3 2 7一 3 47 .
G l a z e r , A
.
N
.
a n d C o h e n
一
B a
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,
G
, 19 7 1
.
S u b u n i ts s t
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r o t e i n s o f b l u e
一g r e e n a lg a e
.
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.
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a岔. 交 1. U . 5 . 才 , 6 8 : 17 9 8一 1 8 0 1 .
C l a z e r , A
.
N
.
a n d F a n g
,
5
.
, 29 7 3
.
F o rm
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r o t e in s f
r o m t h e s u b u n i t s o f p h界 o c y a n i n s o f
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a r a n d f i l a m e n t o u 台 bl u e一 g r e e n a l邵 e . J . B了o l . C汤沙邢 。 2 48 : 6 6 3一 6 7 1 .
G l a
z e r , A
·
N
.
,
1 9 83
.
C o m p a r a t i v e b ioc h
e m i s t r y o f l ig h t h a r
v e s t i n g s y s t
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.
A 刀 ”
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B i o c h e 份 。 5 2 : 1 2 5一
15 7
.
G l a
z e r , A
.
N
.
, 19 8 4
.
P h y e o bi l i s
o
m e
,
a m a e r om
o l e e
: 工l a r e o m p l e x o p t im i z e d f o r l ig h t e n e r g y t r a n s f e r
.
B i o c无私
2 期 刘其芳等: 盐泽螺旋藻藻胆蛋白的分离和特性研究13 5
幼ic a 亡2f Bo 户h 夕了ic a 才c 之a , 7 68 : 2 9一 5 1 .
e l o z o r
,
A
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N
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s , R
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H 29 8多. K i n e t i e s o f e n e r g y i n 之h e
P li y e o b i l i` o m e ` o r e
.
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” c 亡, 2 3 0 : 1 0弓1一 10 亏4 .
s i e g e lm a n
,
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,
J
.
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·
, 全97 8 · A l g a l bi l如 r o t e主n · I n : H a n d b o o k o f p五界 o l o g i a l M e t h o d . E d i t o d
b冬 J o h a n , A . H . , C o m b r i d g e U n i v e r s i t y P r e s s , P P . 7 2一 , 8 .
S e h
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,
H
.
,
19 8 2
.
P h v ` o bi l i p r o t e i n s : M o l e e u l a r a 困 p e e t s o f a p h o t o s y n t h e t i e a n t e n n a s y s t e m
.
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B i o l
、
B i o P人夕了 3 5 : 7一 4 5 .
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M 1 9 6 9
.
T h e r e l i a b i l i t y o f m o 下c c u l a r d e t e r m i n a t i o n b y s o d i u m d o d e e y l s u l f a t e p o l y a c r -
y l a m i d e g e l
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e e r r o p h o r e s i s
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, .J,l内`é,孟,`rl. f,
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P U R I F IC A T IO N A N D P R O P E R T I E S O F P H Y C
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O B I L IP R O T E I N
O F S P I R U L I N A S U B S A L S A V A R
.
又_ iu Q i f a n g ,
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刀 了了12了了z `
W a n g H o u l
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Z h a n g X i a n k o n g
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A b s t r a e t
T 、 v o t y p e s o f p h y e o b i l i P r o t e i n s , C 一P C a n d A P C , w e r o s e p a r a t e d i
u s t a f t e r c r u d e p h y e o bi l i
-
P r o t e i n s f r o m 5
.
s u b s a l s a v a r
.
w e r e p r e c i p it a t e d i n 5 0% ( N H
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n l o a d
e d o n a l 丫 4 c m
h y d r o x y l a P a t i t e e o l u rn n
.
T h e C一 P C w i t h a P t : r i ty o f 7
.
27 ( A 6 20 / A 2 80 ) P o 、 s e s s e s a b s o r P t i o n : n a x i m ; i m a t 62 0 n m
a n d a r o o m f l u o r e s c e n C e e m 是“ s i o n a t 64 2 n m , w l、 i le t h e A p C w i t h a p u r i t y o f 6 . 5 , ( A 6 5 0 /A
2 80 ) h a
v e a n a b s o r P t i o n n , a x im u m a t 65 0 n m a n d a r o o m f l u o r e s c e n
e e e而 s s i o n a t 6 57 n m .
W h
e n t h e p u r i f于e d C 一飞) C o n d A P C 从 , e r e e le c t r o P h o r e s e d u n d e r n o n 一d e n a r u r i n g P A G E e o n -
d i t i o n
, o n l y o n e b a n d w 。 、 o 匕5 。 ,· v 。 ( l ( d 、 t a o o t s h o w n ) . U n d e r d e n a t u r a t i o n ( b y m e a n s o f 11 .三%
S D S
一
p
o l y a e r y la m id
e s l a b g e l s o r 7一 15% SD S J p o l y a e r y l a m id e s l a b g e l s ) , C 一 P C y i e l d e d t w o
c o l o u r e d P o l y p e P t id e s w i th t h o rn o l e e u l a r w e ig h t s o f 16
.
0 a n d 19
.
5 k D f o r i t、 a a n d 尽 s u bu n i t s ,
r e s P e e t i v e l y : w h e r e a s A P C e o m P r is e d t w o s li g ll t l y e o l o u r
e
d P o l y P e P t i d e s o f m o l e e u l a
r w e i g h t s
。 f 15 . 5 a n d 18 . o k D f o r i t s a a n d 尽 s u b u n i t s , r e 、 P e e t i v e l y . S o m e t im e s A P C l l a d a e o l o r l e s s P o -
l y p e p t id e b a n d w it h a m o l e e u l a
r w e i g h t o f 24
.
(、 k D w h i c h w a s p r o ba b l y a e o r e e oln p
o n e n t o f
Ph y e o b i li s o m e a s d i: e u s s e d o v G l a z e r i n 198 5 f o r s y九 ec h o c y: 21: 6 70 1
.
A e e o r d i n g t o t h e s e d a t a
,
ht e m i n im u m m o l e e u l a r w e ig h t s ( C
一
P C
,
3 5
,
50 0 ; A P C
,
33
,
5 0 0 ) o f p h y e
o bi l i P r o r e i n s f r o l 5
. 了, , -
b : a l: a 沙a r . a r e s m a l l e r r h a n th o s e f r o m 夕. P l a ” : e ” : i了. T h e a m i n o a e i d e o m p o s i t i o n a n d 15 0 -
e l e e t r i e P o i n t s o f C
一
P C a n d A P C w e r e a l s o d e t e r m i n e d
.
T h e t o t a l e o n t e n r o f p h飞: c o 卜i l i p r o r e i n s w a s e s t i m a t e d a r 28 . 4% o f d r y w e i g ht o f 5 . 5 ,`b ; a l、 a
刀 a r T }飞u s i t 15 h i g h e r t h a n t j、 a t o f o o h e r b l u e 一 g r e e n a l g a e
.
T h e a b o v e r e s u l t s s h o w t h a t S P i r , , 11刀 a ; 况b : a l: a 夕 a r
.
15 a n i d e a l s o u r e e f o r e d i b l e l) r o t e i n
·
w o r d s B l
u e g r e e n a ig a e
,
s 户i : “ 11 , 。 s , ,占: a z: a , P h y e o bi zi p r o t e i n , s D s 一 p A G E