全 文 ：六月青萃取物对免疫抑制小鼠的影响＊
莫国艳 ,黄仁彬 ,林　军 ,蒋伟哲 ,刘盛佳
(广西医科大学药理学教研室 ,南宁　530021)
[摘　要 ] 　目的　研究六月青萃取物对环磷酰胺所致免疫功能抑制小鼠的影响。方法　小鼠腹腔注射环磷酰胺
制作免疫抑制模型 , 测定血清肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和溶菌酶 ,计算胸腺指数 、脾脏指数 , 观察六月青萃取物对免疫功
能抑制小鼠的影响。结果　六月青萃取物石油醚部位 、氯仿部位 、乙酸乙酯部位 、水饱和正丁醇部位 、60%乙醇部位能增
加免疫抑制小鼠胸腺重量和提高血清溶菌酶含量;六月青萃取物乙酸乙酯部位 、水饱和正丁醇部位 、60%乙醇部位能提
高免疫抑制小鼠血清 TNF-α含量 , 各极性部位对脾脏重量无显著影响。结论　六月青萃取物石油醚部位 、氯仿部位 、乙
酸乙酯部位 、水饱和正丁醇部位 、60%乙醇部位能提高环磷酰胺所致免疫抑制小鼠的免疫功能。
[关键词 ] 　六月青萃取物;免疫抑制;胸腺指数;脾脏指数;肿瘤坏死因子 -α
[中图分类号 ] 　R286;R965　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2007)11-1264-03
InfluencesofLiuyueqingExtractsonImmunosuppressedMice
MOGuo-yan, HUANGRen-bin, LINJun, JIANGWei-zhe, LIUSheng-jia(DepartmentofPharmacology,
GuangxiMedicalUniversity, Nanning530021, China)
ABSTRACT　 Objective　 Tostudytheeffectofliuyueqingextractsonimmunosuppressedmiceinducedby
cyclophosphamide.　 Methods　 Theimmunosuppressedmurinemodelwasinduced byintraperitonealinjection of
cyclophosphamide.Theserumtumornecrosisfactorα(TNF-α)andtheactivityoflysozymeandindexesofthymusglandand
spleenweredeterminedafterthetretmentwithliuyueqingextracts.　Results　Petroleumportion, chloroformportion, ethyl
acetateportion, n-butylalcoholportionand60 percentalchoholicportionofliuyueqingcouldincreasetheweightofthymusgland
andtheactivityoflysozymeinserum;ethylacetateportion, n-butylalcoholportionand60 percentalchoholicportioncould
increasetheconcentrationofTNF-α;buttherewasnosignificantinfluenceontheweightofspleenofmousebythepolarity
extractedparts.　Conclusion　Petroleumportion, chloroformportion, ethylacetateportion, n-butylalcoholportionand60
percentalchoholicportioncanimprovetheimmunefunctioninimmunosuppressedmiceinducedbycyclophosphamide.
KEYWORDS　Liuyueqingextracts;Immunosuppression;Indexofthymusgland;Indexofspleen;Tumornecrosisfactor
　　六月青又称六月雪 ,系爵床科(Acanthaceae)植物
肖鸡笼 (顶头马兰 )Taraphochlamysafinis(Grif)
Bremekhu(Strobilanthesafinis(grif)Y.C.Tang)的干
燥地上部分 ,系广西民间草药 ,能活血 、凉血 、疏肝利
湿 、消肿镇痛 , 主要用于急慢性肝炎 、黄疸等的治
疗 [ 1] 。目前 ,关于六月青的研究资料报道中 , 笔者仅
见其生药学鉴定研究[ 2]及其复方研究的报道 ,其化学
成分 、药理作用和临床应用研究笔者均尚未见报道。
本课题组对主要由六月青组成的复方六月雪(CLYQ)
进行了实验研究 ,观察到 CLYQ对四氯化碳(CCl4)、D-
半乳糖胺 、对乙酰氨基酚等所致小鼠急性化学性肝损
伤有明显的抑制作用[ 3] ;对血清中 HBsAg和 HBeAg
[收稿日期 ] 　2007-05-17　　　[修回日期 ] 　2007-06-10
[基金项目 ] 　＊广西科学研究与技术开发计划项目(基金
编号:桂科攻 0322024-5E)
[作者简介 ] 　莫国艳(1976 -), 女 , 广西桂林人 , 在读博
士 , 主要从事抗肝炎药研究。
[通讯作者 ] 　黄仁彬 , 教授 ,博士生导师 , 主要从事抗肝炎
药和抗心血管疾病药研究 。电话:0771 -5358272, E-mail:
huangrenbin518@163.com。
有抑制作用 [ 4] 。笔者在本实验中就该药对实验动物
免疫功能影响进行初步研究。
1　材料与方法　
1.1　六月青萃取物的制备　六月青(采于广西灵山 ,
经广西中医药研究所鉴定),药材粗粉经乙醇浸泡过
夜 ,回流提取 3次 ,过滤 ,合并滤液 ,回收乙醇 ,浓缩 ,与
柱层析硅胶拌匀 ,依次用极性由小到大的溶剂石油醚
(沸点 60 ～ 90 ℃)、氯仿 、乙酸乙酯 、水饱和正丁醇 、
60%乙醇回流萃取 ,回收溶剂 ,得相应的石油醚部位 、
氯仿部位 、乙酸乙酯部位 、水饱和正丁醇部位 、60%乙
醇部位五个萃取物 ,冰箱保存备用 ,使用时用纯化水稀
释成所需的各浓度 ,并加吐温 -80使其成为均一的混
悬液。
1.2　动物　昆明种小白鼠 , SPF级 ,雌雄兼用 ,体重
(20±2)g,由广西医科大学实验动物中心提供。
1.3　试药与仪器　环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有
限公司生产 ,批号:06021021),盐酸左旋咪唑片(广东
南国药业有限公司生产 , 批号:051002);小鼠 TNF-
αELISA试 剂 盒 (晶 美 生 物 有 限 公 司 , 批 号:
20060520),溶菌酶试剂盒(南京建成生物工程研究
·1264· HeraldofMedicineVol.26No.11 November2007
所 , 批号:20060526)。酶标仪:ThermoELECTRON
CORPORATION, 型号:MULTISKANMK3。
1.4　六月青各萃取物对免疫抑制小鼠的影响　取健
康合格 、体重(20±2)g的昆明种小鼠 180只 ,雌雄各
半 ,按体重随机分为 18组 ,每组 10只 。各组简称依次
分别为空白对照组 、模型对照组 、阳性对照组 、石油醚
部位高剂量组(简称石油醚 H组)、石油醚部位中剂量
组(简称为石油醚 M组)、石油醚部位低剂量组(简称
为石油醚 L组)、氯仿部位高剂量组 (简称为氯仿 H
组)、氯仿部位中剂量组(简称为氯仿 M组)、氯仿部
位低剂量组(简称为氯仿 L组)、乙酸乙酯部位高剂量
组(简称为二乙 H组)、乙酸乙酯部位中剂量组(简称
为二乙 M组)、乙酸乙酯部位低剂量组(简称为二乙 L
组)、水饱和正丁醇部位高剂量组(简称为丁醇 H组)、
水饱和正丁醇部位中剂量组(简称为丁醇 M组)、水饱
和正丁醇部位低剂量组(简称为丁醇 L组)、60%乙醇
部位高剂量组(简称为乙醇 H组)、60%乙醇部位中剂
量组(简称为乙醇 M组)、60%乙醇部位低剂量组(简
称为乙醇 L组)。按 0.2 mL· (10 g)-1体重剂量灌胃
给药 ,每天 1次 ,连续 10 d,其中空白对照组和模型对
照组小鼠按相同给药容量灌以加有吐温 -80的 0.9%
氯化钠溶液 。除空白对照组外 ,其他各组小鼠于给药
的第 2, 4, 6, 8, 10天按 0.2 mL· (10 g)-1体重腹腔注
射环磷酰胺(50 mg·kg-1体重),共 5次。第 11天 ,称
重 ,眼球取血 ,处死 ,立即取出胸腺和脾脏 ,称重并记
录 ,计算胸腺和脾脏指数[ 5 ～ 8] 。所取的血于 5 000
r·min-1离心 10 min,分离血清 , 按 TNF-αELISA试剂
盒和溶菌酶[ 7 ～ 9]试剂盒说明书测定血清中的 TNF-α
和溶菌酶的含量 ,统计数据 ,作方差分析。
2　结果　
2.1　六月青各萃取物对免疫抑制小鼠胸腺指数 、脾脏
指数的影响　注射环磷酰胺后 ,模型对照组小鼠的胸
腺指数和脾脏指数显著低于空白对照组 ,说明环磷酰
胺使小鼠免疫受到明显抑制 ,胸腺 、脾脏重量显著减
轻 ,免疫抑制模型形成 。在环磷酰胺对小鼠形成免疫
抑制的实验条件下 ,与模型对照组动物胸腺重量比较 ,
高剂量石油醚部位和中 、低剂量的氯仿部位 、乙酸乙酯
部位 、水饱和正丁醇部位能显著增加小鼠胸腺重量
(均 P<0.05),低剂量 60%乙醇部位使胸腺重量增加
更为显著(P<0.01);对于脾脏 ,与模型对照组比较 ,
各极性部位的各剂量对其重量影响差异无显著性
(P>0.05),结果见表 1。
2.2　六月青各萃取物对免疫抑制小鼠血清 TNF-α和
溶菌酶的影响　与模型对照组比较 ,中剂量乙酸乙酯
部位 、低剂量水饱和正丁醇部位 、低剂量 60%乙醇部
位能明显提高小鼠血清中的 TNF-α浓度 。溶菌酶是
机体非特异性免疫因子之一 ,作为机体免疫系统的第
一道屏障 ,在机体免疫系统中有重要作用。实验发现
低剂量石油醚部位 ,中 、低剂量氯仿部位和高 、中 、低剂
量乙酸乙酯部位 、水饱和正丁醇部位 、60%乙醇部位均
能显著提高小鼠血清溶菌酶含量(P<0.01),结果见
表 1。
3　讨论　
胸腺是 T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官 ,脾
脏则是体内最重要的外周免疫器官 ,也是 T、B淋巴细
胞定居和接受抗原刺激后产生免疫应答的重要场所 ,
它们与机体的细胞免疫和体液免疫密切相关 ,在免疫
功能低下时常有胸腺 、脾脏萎缩 ,体积变小 。实验结果
提示 ,在环磷酰胺对小鼠形成免疫抑制的实验条件下 ,
石油醚部位 、氯仿部位 、乙酸乙酯部位 、水饱和正丁醇
部位能使实验动物胸腺重量增加 ,低剂量 60%乙醇部
位使胸腺重量增加更为显著 ,而各极性部位对脾脏重
量影响不大 。
巨噬细胞(Mφ)是一类几乎参与一切免疫反应的
细胞 ,在调节淋巴细胞功能和免疫应答上的重要作用
已为人们所重视 ,其主要功能包括分解各种异物并与
之相互作用 、刺激和增进淋巴细胞的免疫活性 ,作为破
坏肿瘤细胞和某些微生物的效应细胞 ,以及作为免疫
应答的调节者 ,是吞噬细胞 ,也是分泌细胞 ,如分泌肿
瘤坏死因子(TNF)、溶菌酶等 。TNF-α是一个重要的
炎症疾病因子[ 9 ～ 14] ,在体内和体外对大多数肿瘤细胞
有杀伤和抑制作用;溶菌酶由 Mφ合成并能迅速释放
到细胞外 ,是一种重要的水解酶 ,是反映 Mφ功能的标
志酶 ,血清溶菌酶主要由 Mφ合成和释放 。因此 ,血清
溶菌酶水平和 Mφ中的溶菌酶有一定的平行关系 ,所
以测定溶菌酶含量也可作为评价 Mφ功能的重要指
标 ,它作为机体非特异性免疫因子之一 ,参与机体的免
疫反应 ,从而保持机体生理平衡 ,同时它还可改善和增
强巨噬细胞的吞噬和消化功能 ,间接增强机体的免疫
功能 ,另一方面溶菌酶具有激活血小板的功能 ,促进机
体的血液循环 ,增强局部防御功能[ 15 ～ 16] 。小鼠血清
TNF-α、溶菌酶测定结果表明 ,中剂量乙酸乙酯部位 、
低剂量水饱和正丁醇部位 、低剂量 60%乙醇部位能明
显提高实验小鼠血清 TNF-α;能使实验小鼠血清溶菌
酶含量提高的是低剂量石油醚部位 ,氯仿部位中 、低剂
量和高 、中 、低剂量的乙酸乙酯部位 、水饱和正丁醇部
位 、60%乙醇部位 。
由此可见 ,六月青的部分萃取物能使实验小鼠的
·1265·医药导报 2007年 11月第 26卷第 11期
　　　　　　　　　　　表 1　18组小鼠胸腺指数 、脾脏指数 、TNF-α和溶菌酶浓度测定结果　 x±s
组别 给药剂量 /(mg· kg-1) 胸腺指数 脾脏指数 TNF-α
溶菌酶浓度 /
(μg· mL-1)
石油醚 H组 50.1 0.117 2±0.021 5＊1＊2 0.182 9±0.027 2＊1 0.091 4±0.009 7＊3 206.610 0±5.389 0
石油醚 M组 25.0 0.102 7±0.015 1＊1 0.194 9±0.060 7 0.110 9±0.030 7 199.289 5±8.804 4
石油醚 L组 12.5 0.106 8±0.046 3＊1 0.236 7±0.059 5＊3 0.103 6±0.018 3 210.485 5±9.547 5＊3
氯仿 H组 68.5 0.120 1±0.033 7＊1 0.197 7±0.060 5＊1 0.103 0±0.009 7 206.696 1±6.269 3
氯仿 M组 34.3 0.115 2±0.026 2＊1＊2 0.205 9±0.058 0＊1 0.102 7±0.007 3 215.394 6±5.321 1＊1＊4
氯仿 L组 17.1 0.132 5±0.032 1＊1＊2 0.187 4±0.040 2＊1 0.110 1±0.013 2 215.394 6±4.704 8＊1＊4
二乙 H组 71.1 0.110 1±0.029 8＊1 0.216 9±0.065 5＊1 0.107 7±0.015 7 220.734 6±9.257 7＊1＊4
二乙 M组 35.5 0.127 4±0.033 0＊1＊2 0.211 8±0.051 5＊1 0.115 7±0.016 2 ＊2 222.370 6±5.859 8＊1＊4
二乙 L组 17.8 0.113 7±0.019 5＊1＊2 0.222 9±0.078 2＊3 0.136 7±0.049 0 224.868 1±6.631 5＊1＊4
丁醇 H组 354.0 0.107 2±0.030 1＊1 0.235 2±0.116 0＊3 0.093 3±0.020 4＊3 215.566 8±5.728 3＊1＊4
丁醇 M组 177.0 0.124 2±0.022 9＊1＊2 0.219 1±0.084 9＊1 0.112 3±0.022 9 226.762 8±3.898 1＊1＊4
丁醇 L组 88.5 0.122 3±0.021 9＊1＊2 0.196 6±0.032 3＊1 0.082 0±0.014 9＊2＊3 226.264 1±5.695 0＊1＊4
乙醇 H组 361.0 0.103 4±0.050 3＊1 0.190 2±0.049 0＊1 0.110 7±0.061 9 223.059 5±9.287 5＊1＊4
乙醇 M组 181.0 0.116 7±0.034 6＊1 0.206 3±0.059 2＊1 0.110 7±0.012 1 218.753 0±7.145 3＊1＊4
乙醇 L组 90.3 0.132 6±0.023 7＊1＊4 0.227 3±0.081 0＊1 0.125 1±0.012 8＊2 222.284 0±9.504 8＊1＊4
阳性对照组 50.0 0.098 5±0.027 9＊1 0.182 3±0.038 0＊1 0.093 1±0.011 7＊3 227.193 5±7.863 7＊1＊4
模型对照组 0.9%氯化钠溶液 0.086 1±0.023 6＊1 0.224 1±0.062 3＊1 0.098 4±0.013 0＊3 200.753 6±5.162 6
空白对照组 0.9%氯化钠溶液 0.412 6±0.090 3 0.452 8±0.141 8 0.156 3±0.063 7 201.873 2±6.912 6
　　与空白对照组比较 , ＊1P<0.01, ＊3P<0.05;与模型对照组比较 , ＊2P<0.05, ＊4P<0.01
免疫器官胸腺重量增加 ,对脾脏重量增加无明显影响 ,
能提高实验动物血清 TNF-α和溶菌酶水平 ,对实验小
鼠的非特异性免疫功能有显著的增强作用 。
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