全 文 ：［收稿日期］ 20121025(001)
［基金项目］ 广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻
10124008-6，桂科攻 0992003A-2) ;广西重点实验
室基金(KFJJ2010-22) ;广西科技基础条件平台建
设(12-97-20)
［第一作者］ 周先丽，助理研究员，博士研究生，从事生化药理
学及天然产物活性研究，Tel:0773-2295133，E-
mail:xlzhou2009@ 163. com
［通讯作者］ * 黄仁彬，教授，博士生导师，从事药理学及天然
产物活性物质研究，Tel:0771-5339805，E-mail:
huangrenbin518@ 163. com
六月青一种木脂素苷的体外抗氧化活性
周先丽，李映新，温庆伟，林兴，黄仁彬*
( 广西医科大学药理学教研室，南宁 530021)
［摘要］ 目的:研究六月青一种木脂素苷(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］ lyoniresinol 的抗氧化活性。方法:采
用酶标仪微量法和紫外-可见光分光光度法，以维生素 C 为阳性对照，分别测定(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］
lyoniresinol 对 1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)自由基、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O －2·)的清除能力。结果:
(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］lyoniresinol 对 DPPH·(半数清除率 IC50 8. 11 mg·L
－1) ，·OH(IC50 21. 61 mg·L
－1)和
O －2·(IC50 10. 30 mg·L
－1)均具有清除作用，且呈明显的量效关系。结论:(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］lyoniresinol
在体外有明显的抗氧化作用。
［关键词］ 六月青;自由基;抗氧化活性
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)07-0200-03
［doi］ 10． 11653 /zgsyfjxzz2013070200
Antioxidative Effect of a Lignan Glycoside from Tarphochlamys affinis
ZHOU Xian-li，LI Ying-xin，WEN Qing-wei，LIN Xing，HUANG Ren-bin*
(Department of Pharmacology，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China)
［Abstract］ Objective:To study the antioxidant activity of (6R，7S，8S)-7α- ［(β-glucopyranosyl)
oxy］ lyoniresinol from Tarphochlamys affinis． Method:With microtitration assay and ultra-violet-visible (UV-Vis)
spectrophotometry，effect of (6R，7S，8S)-7α- ［(β-glucopyranosyl)oxy］ lyoniresinol on clearance rate of 1，
1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2，2-diphenyl-1- (2，4，6 trinitrophenyl)hydrazyl (DPPH·) ，hydroxyl
radical·OH and superoxide anion O －2· were determined with Vitamin C(Vc)as positive control． Result: (6R，
7S，8S)-7α- ［(β-glucopyranosyl)oxy］ lyoniresinol had scavenging capability against DPPH·(half clearance
rate concentration IC50 8. 11 mg·L
－1) ，·OH(IC50 21. 61 mg·L
－1)and O －2 ·(IC50 10. 30 mg·L
－1) radicals and
has a good dose-responses with the concentration． Conclusion: (6R，7S，8S)-7α- ［(β-glucopyranosyl)oxy］
lyoniresinol has the stronger antioxidant activity．
［Key words］ Tarphochlamys affinis;free radicals;antioxidant activity
六月青系爵床科植物肖鸡笼或顶头马兰的干燥 地上部分［1］，为广西民族特色草药。该药具有活
血、凉血、疏肝利湿、消肿镇痛的功效，用于治疗急慢
性肝炎、黄疸、流行性腮腺炎及高血压等疾病［2］。
木脂素苷在化学结构上属于木脂素，以糖苷的形式
存在。木脂素类化合物是一类天然酚类化合物，具
有优良的生物学活性，如抗艾滋病、保肝、抗氧化等．
其广泛的药理作用，独特的作用机制已引起人们的
广泛关注［3］。本文首次探讨了六月青一种木脂素
苷单体(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］
lyoniresinol的抗氧化活性，为六月青的进一步开发
利用提供科学依据。
·002·
第 19 卷第 7 期
2013 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 7
Apr．，2013
1 材料
1. 1 药材 六月青(Tarphochlamys affinis)采自广
西灵山，由广西中医学院第一附属医院黄权芳中药
师鉴定。
1. 2 试剂 邻二氮菲(上海国药集团化学试剂有
限公 司，批 号 20111114) ;1，1-二 苯-2-苦 基 肼
(DPPH，上海晶纯实业有限公司，批号 D1227007) ;
邻苯三酚(焦性没食子酸，上海国药集团化学试剂
有限公司，批号 20120731) ;Tris-HCl(上海生工生物
工程有限公司，批号 1106376Z) ，其余均为国产分
析纯。
1. 3 仪器 Multiskan Spectrum 全波长酶标仪(美
国赛默飞世尔科技公司) ;732N 紫外分光光度计
(上海精密科学仪器有限公司) ;Bruker Av-600 核磁
共振仪(瑞士 Bruker 公司) ;BS224S电子天平(北京
赛多利斯仪器系统有限公司) ;PHS-3C pH 计(上海
精密科学仪器有限公司)。
2 方法
2. 1 样品制备 六月青干燥后粉碎，以 60%乙醇，
80 ℃回流 2 h，共回流 3 次，合并提取液，用旋转蒸
发仪浓缩至适当浓度，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃
取，浓缩得到 2 个不同极性部位。乙酸乙酯部分用
MCI脱色后，用硅胶柱层析以 CHCl3-Me2CO (1 ∶ 0，
9∶ 1，8∶ 2，2∶ 1，1∶ 1，0∶ 1)进行洗脱，得 6 个组分。第
4 组分用 RP-18 以 30% ～ 100% CH3OH-H2O 进行
反相柱层析后，再以半制备 HPLC(10% CH3CN-
H2O)进行分离纯化得到一个化合物。通过
1H-NMR
和13C-NMR数据分析，与文献［4］对比，为木质素苷
(6R， 7S， 8S )-7α-［(β-glucopyranosyl ) oxy ］
lyoniresinol。
2. 2 清除 DPPH 自由基 参照文献［5］并稍做修
改，用无水乙醇配制浓度为 2 × 10 －4 mol·L －1的
DPPH溶液。取 100 μL不同浓度的样品溶液及 100
μL 的 2 × 10 －4mol·L －1的 DPPH溶液加入 96 孔酶标
板中，混匀。20 min 后用无水乙醇作参比在 517 nm
下测定其吸光度(A) ，每个样品设 3 个复孔。以无
水乙醇代替 DPPH作为对照组，维生素 C(VC)为阳
性对照。根据以下公式计算清除率:
Y =［A0 －(A1 － A2) ］/ A0 × 100%
式中，A0 为未加样品组的吸光度;A1 为样品组
的吸光度;A2 为空白组的吸光度。
2. 3 清除羟自由基 参照文献［6］并稍做修改，取
0. 2 mmol·L －1磷酸盐缓冲液 20 mL，依次加 7. 5
mmol·L －1邻二氮菲 1. 0 mL，7. 5 mmol·L －1硫酸亚
铁 1. 0 mL，再加入不同浓度的样品溶液 1. 0 mL，最
后加入 1 mL 0. 1% H2O2。37 ℃保温 60 min，无水
乙醇代替邻二氮菲为空白，536 nm处测定吸光度为
A0。每份样品平行操作 3 次，计算自由基清除率:
Y =(A0 － A1)/(A2 － A1)× 100%
式中:A1 为无水乙醇代替待测液的吸光度;A2
为无水乙醇代替 H2O2 的吸光度。
2. 4 清除超氧阴离子实验 运用改进后的邻苯三
酚自氧化法［7］，取 2. 45 mL 0. 1 mol·L －1 Tris-HCl缓
冲液(pH 8. 2)于离心管中，分别加入 0. 1 mL 不同
浓度的样品，于 25 ℃恒温 20 min，再加入 0. 05 mL
25 ℃预热的 25 mmol·L －1邻苯三酚，迅速摇匀后，每
隔 30 s 于波长 420 nm 处测定 1 次吸光度，共测
3 min。每份样品平行操作 3 次，计算自由基清除率:
Y =(V0 － V)/V0 × 100%
式中 V0 为邻苯三酚自氧化速率;V 为样品管的
氧化速率。
3 结果
3. 1 木脂素苷的结构鉴定 见图 1。
图 1 木脂素苷为化合物(6R，7S，8S)-7α-
［(β-glucopyranosyl)oxy］lyoniresinol
3. 2 对 DPPH 自由基的清除作用 (6R，7S，8S)-
7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］ Lyoniresinol 和 VC 对
DPPH自由基的清除作用如图 2 所示。从图 2 中可
以看出随着给药浓度的增加，药物对 DPPH 自由基
的 清 除 率 也 增 加。 (6R，7S，8S )-7α-［(β-
glucopyranosyl)oxy］lyoniresinol 和 VC 对 DPPH 自由
基的半数清除率(IC50)分别为 8. 11，5. 59 mg·L
－1。
从数据上看，(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)
oxy］ lyoniresinol对 DPPH 自由基的清除作用比 VC
稍弱，仍具有较强的清除作用。
3. 3 对羟自由基的清除作用 如图 3 所示(6R，
7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］ lyoniresinol 和
VC对羟自由基的清除作用呈明显的量效关系，随
着药物浓度的增大，清除作用不断增大。两者对羟
自由基的 IC50分别为 21. 61 mg·L
－1和 13. 74 mg·
L －1。虽然(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］
lyoniresinol对羟自由基的清除作用比 VC弱，但仍具
有较强的清除作用。
·102·
周先丽，等:六月青一种木脂素苷的体外抗氧化活性
图 2 不同浓度的(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］
lyoniresinol对 DPPH自由基的清除作用
图 3 不同浓度的(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］
lyoniresinol对羟自由基的清除作用
3. 4 对超氧阴离子自由基的清除作用 由图 4 中
可以看出，随着药物浓度的增加，(6R，7S，8S)-7α-
［(β-glucopyranosyl)oxy］lyoniresinol 和 VC对超氧阴
离子自由基的清除能力也明显增强。其对超氧阴离
子自由基的 IC50分别为 10. 30，13. 58 mg·L
－1。VC
比 (6R，7S，8S )-7α-［(β-glucopyranosyl ) oxy］
lyoniresinol对超氧阴离子自由基的半数清除率低，
说明 (6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl) oxy］
lyoniresinol对超氧阴离子自由基具有较好的清除
活性。
图 4 不同浓度的(6R，7S，8S)-7α-［(β-glucopyranosyl)oxy］
lyoniresinol对超氧阴离子的清除作用
4 讨论
研 究 证 明， (6R， 7S， 8S )-7α-［(β-
glucopyranosyl)oxy］lyoniresinol 对 DPPH 自由基，
羟自由基以及超氧阴离子自由基均具有较强的清除
能力。该化合物对超氧阴离子自由基的清除能力最
强，高于天然抗氧化剂 VC。另外，从结构上看，该化
合物具有多个酚羟基结构，而酚羟基是清除自由基
和活性氧的重要基团，因此(6R，7S，8S)-7α-［(β-
glucopyranosyl)oxy］lyoniresinol 对自由基的清除能
力与其结构是密切相关的。近来科学研究证明，自
由基和人类多种疾病均有密切关系［8-11］。因此，作
为一种有效的自由基清除剂，(6R，7S，8S)-7α-［(β-
glucopyranosyl)oxy］ lyoniresinol 具有潜在的药用
价值。
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［责任编辑 聂淑琴］
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第 19 卷第 7 期
2013 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 7
Apr．，2013