全 文 ：灵芝草提取物的体内抗氧化活性研究
刘广平1，左 婷2，王晓莉2，孙汉巨2* ，杨 帆2，王 霄2，张曼莉2
(1．安徽小刘食品股份有限公司，安徽合肥 230601;2．合肥工业大学生物与食品工程学院，安徽合肥 230009)
摘要 ［目的］研究灵芝草提取物的体内抗氧化活性。［方法］以灵芝草提取物为原料，选用生理盐水为载体，VC，下标作阳性对照，分别
对小白鼠灌胃不同剂量的灵芝草提取物; 30 d后，测定小白鼠的血清、肝脏及心脏中总抗氧化力( T-AOC)、谷胱甘肽( GSH)、超氧化物歧
化酶( SOD) 和谷胱甘肽过氧化酶( GSH-Px) 的活力及丙二醛( MDA) 和羟自由基含量，评价其体内抗氧化能力。［结果］灵芝草提取物可
以显著提高小白鼠血清、肝脏及心脏中的总抗氧化力( T-AOC)、超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化酶( GSH-Px) 和谷胱甘肽
( GSH) 。在 20 ～500 kDa和 10 ～20 kDa区间的提取物抗氧化效果最好。［结论］灵芝草具有一定的体内抗氧化作用。
关键词 灵芝草;提取物;膜分离;体内;抗氧
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2013) 25 －10269 －03
Study of in vivo Antioxidation Activity of Polyporus Lucidus Extracts
LIU Guang-ping et al ( Anhui Xiaoliu Food Company，Hefei，Anhui 230601)
Abstract ［Objective］To study in vivo antioxidative activity of polyporus lucidus extract． ［Method］With polyporus lucidus extract as raw
material，physiological saline as carrier，and vitamin C as positive sample，mice were fed with different molecular weights of ganoderma lucid-
um． 30 days later，after the animals were sacrificed，the spleen and thymus indexes were determined，and T-AOC，GSH，SOD，GSH-Px，
MDA and content of hydroxyl free radical in serum，serum，liver and heart were determined． ［Ｒesult］The results showed that ganoderma lu-
cidum extracts could increase the spleen and thymus indexes，and significantly increase T-AOC，SOD and GSH-Px，and GSH content． The
extract of the molecular weights in 20 － 500 kDa and 10 － 20 kDa presented better antioxidative activity． ［Conclusion］Polyporus lucidus has
the ability of in vivo antioxidation．
Key words Polyporus lucidus; Extract; Membrane separation; In vivo; Antioxidation
基金项目 2011 年国家自然科学基金项目“31171787”; 2012 年安徽省
长三角联合攻关项目“1201c0602005”。
作者简介 刘广平( 1973 － ) ，女，安徽合肥人，食品工程师，从事农产品
深加工研究，E-mail: 791813911@ qq． com。* 通讯作者，教
授，博士，从事农产品加工与贮藏研究，E-mail: sunhanjv@
163． com。
收稿日期 2013-07-31
灵芝草，又名变豆菜、山芹菜、鸭巴芹、鸭掌芹:为多年生
草本植物，高 50 ～ 80 cm;根状茎短，不明显，须根多数;茎直
立，无毛，具纵棱，上部叉状分枝;叶少数，基生叶有长柄，基
部鞘状，叶片掌状 3全裂或掌状 5裂，中裂片倒卵形，基部近
楔形;花期 6 ～7月，果期 8 ～ 9月［1］。研究表明，灵芝草不仅
有保肝、解毒、强心、镇静、健胃、消炎和止痛等功效;同时有
助于改善机体的免疫能力，增强抵抗力［2］。目前，关于灵芝
草的体内抗氧化活性的研究鲜有报道。笔者将灵芝草提取
物采用不同截留分子量的超滤膜截留后，采用灌胃方式喂养
小白鼠，研究其体内抗氧化活性，以期为灵芝草的产业化开
发提供技术支撑。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。灵芝草，9月份采自安徽省黄山山区，经
鉴定为正品。
1． 1． 2 动物。昆明种小鼠，6 ～8 周龄，体重(20 ±2)g，购自
安徽医科大学动物饲养中心。
1． 1． 3 主要仪器。FK-A组织捣碎机，购自江苏金坛市金城
国胜实验仪器厂;HH-2数显恒温水浴锅，购自江苏金坛市杰
瑞尔电器有限公司;FA1004电子天平，购自上海精科天平有
限公司;722E型可见分光光度计，购自上海光谱仪器有限公
司;HQ45Z型恒温摇床，购自中国科学院武汉科学仪器厂;
DHP-9032型电热恒温培养箱，购自上海一恒科学仪器有限
公司;KQ5200DE数控超声波清洗器，购自昆山市超声仪器有
限公司;SC-3614低速离心机，购自安徽中科中佳科学仪器有
限公司;多功能膜设备，购自合肥华康环保工程有限公司;
JML-50胶体磨，购自温州市瓯海梧田华慧乳化机械厂。
1． 1． 4 主要试剂。总抗氧化能力(T-AOC)测定试剂盒、谷
胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物
歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及羟自由基测定试剂盒，均购
自南京建成生物工程研究所;氯化钠、抗坏血酸、无水乙醇等
均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 灵芝草组分的提取。(1)灵芝草的预处理。将去根
的灵芝，按料液比 1∶9(W/V，g /ml，下同)加入蒸馏水，用组织
捣碎机捣至浆状。(2)细磨。用胶体磨将浆液进一步细磨，
物料粒度控制在 5 ～25 μm之间。(3)过滤。灵芝浆液依次
用 200目的纱布、600目的尼龙布的过滤，得滤液。(4)超滤。
分别用不同截留分子量的超滤膜对滤液进行膜分离［3］。分
别得到分子量小于 2． 5 kDa 的灵芝组分 1，分子量在 2． 5 ～
3． 5 kDa的灵芝草组分 2，分子量在 3． 5 ～10． 0 kDa的灵芝草
组分 3，分子量在 10． 0 ～20． 0 kDa的灵芝草组分 4，分子量在
20． 0 ～500． 0 kDa的灵芝组分 5。
1． 2． 2 试验小鼠的分组、饲养及处理方法。将小白鼠饲养
在(22 ±1)℃和 50% ～ 55%相对湿度环境下，每天进行光照
12 h和黑夜 12 h处理，自由饮食和饮水。随机分成 13组，每
组 8只小白鼠，均为雌性，分笼饲养。将灵芝草组分、VC 生
理盐水溶液，通过灌胃的方式喂养小鼠。VC 作为阳性对照。
第 1、2组分别灌胃浓度 100和 50 mg /kg体重剂量的组分 5;
第 3、4组分别灌胃浓度 100和 50 mg /kg体重剂量的组分 4;
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(25):10269 － 10271 责任编辑 石金友 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.25.059
第 5、6组分别灌胃浓度 100和 50 mg /kg体重剂量的组分 3;
第 7、8组分别灌胃浓度 100和 50 mg /kg体重剂量的组分 2;
第 9、10组分别灌胃浓度100和50 mg /kg体重剂量的组分1;
第 11、12组分别灌胃浓度 100 和 50 mg /kg 体重剂量的 VC;
第13组只灌胃生理盐水，连续喂养30 d。在小白鼠最后1次
灌胃后禁食 1夜，于眼眶取血，收集血液，在 4 ℃、4 000 r /min
条件下离心 3 min，上清液即为血清。小白鼠解剖后，收集脾
脏、胸腺、肾脏、肝脏和心脏。其中脾脏和胸腺分别称重，肾
脏、肝脏和心脏组织分别与冷却的浓度 0． 9%氯化钠溶液，以
1∶9的比例加入匀浆器，反复匀浆多次直至制成匀浆，上清液
在 4 ℃、4 000 r /min下离心 10 min，收集上清液备用［4］。
1． 2． 3 测定方法。MDA 含量测定采用硫代巴比妥酸比色
法［4］，结果以 nmol /mg表示;总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘
肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化
酶(SOD)及羟自由基的检测，均按南京建成生物工程研究所
试剂盒说明书及相关文献报道的方法进行测定［5 －7］。
1． 2． 4 统计分析。使用 SPSS17． 0 软件对所得数据进行
分析［8］。
2 结果与分析
2． 1 灵芝草对小鼠免疫器官重量的影响 由表 1 可知，与
对照组比较，灵芝草提取物使胸腺和脾指数增加。因此，通
过 30 d的喂养，5种组分的不同剂量的灵芝草提取物均可使
小鼠的胸腺和脾脏质量增加，促进其免疫功能。
表 1 灵芝草提取物对胸腺和脾脏的影响
序号 组别
胸腺指数∥mg /g
100 kg /kg 50 kg /kg
脾脏指数∥mg /g
100 kg /kg 50 kg /kg
1 组分 5 3． 42 3． 41 5． 28 5． 15
2 组分 4 3． 39 3． 38 5． 06 4． 89
3 组分 3 3． 36 3． 35 4． 82 4． 66
4 组分 2 3． 33 3． 32 4． 62 4． 49
5 组分 1 3． 30 3． 29 4． 48 4． 36
6 对照组 3． 22 3． 21 4． 35 4． 20
2． 2 灵芝草提取物对总抗氧化能力(T-AOC)的影响 T-
AOC反应了生物体内非酶抗氧化体系，不仅体现了各种抗氧
化剂之间的协作关系，也是抗氧化剂与机体疾病或衰老之间
关系的精确反应［9 －11］。由表 2 可知，与对照组相比，灵芝草
提取物使小白鼠血清、肾脏和心脏中 T-AOC 都有所增加。
另外，分子量在 20 ～500 kDa和10 ～ 20 kDa的灵芝草组分对
小白鼠 T-AOC 的促进效果大于对照组;说明灵芝草中主要
的抗氧化成分是分子量大于 20 kDa 的大分子物质，起抗氧
化作用的活性物质可能为多肽和多糖等。
2． 3 灵芝草提取物对谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的影
响 GSH-Px是保护生物体免受氧化的重要酶，能催化过氧
化氢分解，保护细胞膜结构和功能的完整［12 －13］。由表 3 可
知，与对照组相比，灵芝草提取物使小白鼠血清、肾脏和心脏
中 GSH-Px 都有所增加。并且，分子量在 20 ～ 500 kDa 和
10 ～20 kDa的灵芝草组分对小白鼠 T-AOC的促进效果大于
对照组。
表 2 灵芝草提取物对 T-AOC的影响
序号 组别
全血∥U/ml
100
mg /kg
50
mg /kg
肾脏∥U/mg
100
mg /kg
50
mg /kg
心脏∥U/mg
100
mg /kg
50
mg /kg
1 组分 5 112． 34 75． 58 0． 90 0． 47 0． 90 0． 60
2 组分 4 106． 66 97． 92 0． 86 0． 68 0． 87 0． 83
3 组分 3 68． 82 68． 08 0． 48 0． 13 0． 55 0． 34
4 组分 2 68． 32 46． 62 0． 32 0． 10 0． 69 0． 39
5 组分 1 51． 06 32． 80 0． 33 0． 17 0． 68 0． 45
6 对照组 96． 20 84． 12 0． 57 0． 19 0． 52 0． 50
7 空白组 45． 38 45． 38 0． 03 0． 03 0． 22 0． 22
表 3 灵芝草提取物对 GSH-PX的影响
序号 组别
全血∥U/ml
100
mg /kg
50
mg /kg
肾脏∥U/mg
100
mg /kg
50
mg /kg
心脏∥U/mg
100
mg /kg
50
mg /kg
1 组分 5 274． 58 266． 10 2 726． 77 1 922． 15 3 325． 62 2 645． 46
2 组分 4 191． 53 189． 83 2 266． 53 1 355． 93 2 550． 60 2 330． 82
3 组分 3 155． 93 100． 00 1 847． 64 1 698． 64 2 056． 67 1 352． 86
4 组分 2 133． 90 79． 66 1 064． 33 1 153． 48 1 864． 66 827． 18
5 组分 1 132． 20 128． 81 1 062． 93 1 029． 34 1 110． 47 884． 55
6 对照组 13． 56 13． 56 1 428． 39 1 428． 39 1 174． 09 1 174． 09
7 空白组 132． 71 132． 71 1 138． 20 1 138． 20 1 029． 50 1 029． 50
2． 4 灵芝草提取物对谷胱甘肽(GSH)的影响 GSH是一
种低分子清除剂，对·OH和 H2O2 有较强的清除能力，可减
轻脂质过氧化对机体的损伤，在预防癌变和抗衰老方面，有
非常重要的意义。由表 4可知，喂养灵芝草能够提高小白鼠
肝脏和肾脏内 GSH 的活性，与对照组相比，喂养分子量在
20 ～500 kDa 和 10 ～ 20 kDa 的灵芝草组分能更好地提高
GSH的活性。
表 4 灵芝草提取物对 GSH的影响
序号 组别
肝脏∥U/mg
100 mg /kg 50 mg /kg
肾脏∥U/mg
100 mg /kg 50 mg /kg
1 组分 5 282． 80 128． 43 299． 20 227． 68
2 组分 4 144． 26 94． 04 278． 60 118． 11
3 组分 3 149． 34 52． 32 200． 54 165． 62
4 组分 2 123． 88 100． 52 116． 21 87． 61
5 组分 1 132． 90 89． 94 159． 93 60． 23
6 对照组 148． 09 68． 09 167． 19 119． 68
7 空白组 89． 83 89． 83 130． 01 130． 01
2． 5 灵芝草提取物对总超氧化物歧化酶(SOD)的影
响 SOD是保护生物体免受氧化的重要酶，能非常有效地催
化超氧阴离子自由基的分解，对机体的氧化和抗氧化平衡起
着重要作用［14 －16］。由表 5 可知，喂养灵芝草能够提高 SOD
在全血中的活性。与对照组相比，喂养分子量 20 ～ 500 kDa
和 10 ～20 kDa 的灵芝草组分能更好地提高小白鼠血液中
SOD的活性，但对于肝脏和心脏中的 SOD 活性没有明显影
响;可能是由于灵芝草中的活性物质提高了血液中 SOD 的
活力，增加了抗氧化能力，而不能提高肝脏和心脏中 SOD的
活性。
07201 安徽农业科学 2013 年
表 5 灵芝草提取物对 SOD的影响
序号 组别
全血∥U/ml
100
mg /kg
50
mg /kg
肾脏∥U/mg
100
mg /kg
50
mg /kg
心脏∥U/mg
100
mg /kg
50
mg /kg
1 组分 5 110． 20 86． 51 285． 17 249． 61 142． 85 154． 23
2 组分 4 78． 18 41． 42 263． 93 245． 84 148． 77 148． 31
3 组分 3 68． 41 49． 70 247． 73 256． 39 150． 59 152． 41
4 组分 2 55． 44 29． 95 251． 12 252． 62 117． 83 141． 94
5 组分 1 38． 23 37． 08 256． 39 243． 58 143． 31 140． 58
6 对照组 57． 01 50． 34 226． 62 238． 30 151． 50 149． 22
7 空白组 35． 19 35． 19 244． 33 244． 33 143． 31 143． 31
2． 6 灵芝草提取物对微量丙二醛(MDA)的影响 MDA是
衡量机体代谢的敏感指标，可以反应机体受自由基攻击的严
重程度，客观地反映机体产生自由基的水平［17］。由表 6 可
知，灵芝草对于肝脏和肾脏中的 MDA活性没有明显影响，可
能是由于灵芝草中的活性物质对肝脏和肾脏中的 MDA没有
明显的抑制作用。
表 6 灵芝草提取物对组织中MDA含量的影响
序号 组别
肝脏∥nmol /mg
100 mg /kg 50 mg /kg
肾脏∥nmol /mg
100 mg /kg 50 mg /kg
1 组分 5 2． 81 2． 95 2． 30 2． 50
2 组分 4 2． 31 2． 14 2． 31 2． 01
3 组分 3 2． 25 2． 31 2． 34 1． 95
4 组分 2 2． 52 2． 16 2． 04 1． 68
5 组分 1 2． 31 1． 98 1． 66 1． 74
6 对照组 2． 54 2． 43 1． 89 1． 93
7 空白组 1． 84 1． 84 1． 24 1． 24
2． 7 灵芝草提取物对全血羟自由基的抑制作用 目前，羟
基自由基(·OH)是所知活性氧自由基中对生物体毒性最
强、危害最大的一种自由基，抑制羟自由基的生成是评价体
内抗氧化能力的一个重要指标。由表 7可知，灵芝草对于抑
制小白鼠血液中的羟自由基能力没有明显影响，可能是由于
灵芝草中的活性物质对肝脏和肾脏中的羟自由基没有明显
的抑制作用。
表 7 灵芝草提取物对羟自由基的抑制作用
序号 组别
抑制羟自由基能力∥U/ml
100 mg /kg 50 mg /kg
1 组分 5 902． 67 913． 34
2 组分 4 924． 01 898． 41
3 组分 3 904． 81 903． 74
4 组分 2 912． 28 852． 53
5 组分 1 957． 09 938． 95
6 VC 954． 96 929． 35
7 空白 697． 81
3 结论与讨论
试验结果表明，灌胃饲养小白鼠 30 d后，灵芝草提取物
可以明显提高小白鼠血清、肝脏及心脏中的总抗氧化力(T-
AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-
Px)和谷胱甘肽(GSH)，但对羟自由基和 MDA，没有明显的
抑制作用。因此，灵芝具有体内抗氧化作用，且各组分的抗
氧化能力大小为组分 5 ＞组分 4 ＞组分 3 ＞组分 2 ＞组分 1，
说明灵芝草的抗氧化成分大部分为分子量大于 10 kDa的大
分子物质，具体物质有待后续试验进一步研究。
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1720141卷 25期 刘广平等 灵芝草提取物的体内抗氧化活性研究