全 文 ：世界科学技术一中医药现代化★基础研究
龙牙德木总皂苍杭心肌缺血作用研究
口温富春* 徐惠波 丁 涛 张 伟 孙晓波
(吉林省中医中药研究院 长春3 10 21 )
孙桂波 (华南师范大学 广州 513 0 61 )
摘 要 : 目的 : 观察龙牙穗木总皂普 (A s)对心肌缺血动物及心肌细胞形态 、搏动频率和存活率的
影响 。 方法 : 采用异 丙肾上腺素 ( 1 50 )致动物急性心肌缺血的方法 , 观察 A s 对注射 150 后心肌组织结
构 、 超氧化物歧化酶 ( SO D )活性 、 丙二醛 ( M D A )含量 、 血清中 5一舟 色胺 ( 5一HT ) 、 去 甲肾上腺素 (玩 v)
含量的影响 ; 采用原代培养大鼠心肌细胞技术 ,观察 A s 对心肌细胞形态 、搏动频率和存活率的影响 。
结果 : A s 对 sI 。 所致 大鼠心肌坏死有较好的防治作用 , 保护心肌组织中 SO D 活性 , 降低心肌组织中
M D A 含量及血清中 5一 H T 和 玩 v 含量 ; 体外试验显示 , 加入 A s 后心肌细胞搏动 幅度明显增 大 ,
30
.
0此 lm L 组可增加心肌细胞的存活率 。 结论 : sA 对 150 所致的急性心肌缺血 , 具有明显保护作用 ;时
心肌细胞具有正性肌力 , 负性变时效应 , sA 30 . 0卜gm/ L 时对心肌细胞具有明显保护作用 。
关键词 : A s 心肌缺血 SO D M D A S一 H T eL v 心肌细胞
龙 牙 惚木 为 五 加 科 刺 老 鸦 ( Aalr : ae at at (M is)
eS e m )
, 在我 国东北三省蕴藏量极大 , 民间早 已做为
山菜食用 ,具有补气安神 ,祛风活血之功效 l[] 。 其主要
有效成分为总皂昔 ( A S )类 , 具有明显的生理活性 。 本
文对其抗 心肌缺血作用 进行 了体内外实验研究 , 并
对其机理进行 了初步的探讨 。
一 、 实验材料与方法
1
. 实验动物
iW st ar 大 鼠 , 体重 20 一25 0 9 , 雌雄 均可 , 由吉林
省 中医中药研究院动物室提供 。 新生 1一d4 的 W ist ar
孚L鼠 ,雌雄不拘 , 由吉林天药科技有限公 司动物室提
供 。
2
. 药物
A s 浅黄色粉末 ,皂昔含量达 95 % ,批号 : 97 0 704 ,
由吉林省 中医中药研究 院新药 中心化学室提供 ; 150
由上海禾 丰制药有 限公 司生产 , 批号 : 951 0 ;2 维拉
帕米 ( V e arP am il )上海禾丰制药有限公 司生产 ,批 号 :
03 06 01 ;试验用 阳性对 照药 , 地奥心血康 , 由中科院
成都地奥制药公 司生产 , 批号 : 97 03 09 ; 整体试验时 ,
以蒸馏水配成所需浓度供灌 胃给药 , 对照组同时给
同体积的蒸馏水 ; 体外试验时 , 将 A s 按所需浓度溶
于培养液中 。
收稿 日期 : 20 5 一 10 一 20
修回 日期 : 2X() 6一02 一20
* 联系人 : 温富春 , 副主任药师 , 主要从事于心血管基础研究及新药开发 , eT l : 04 31 一68 168 60 , E一 m ial : we 而ch u n Z(:心4卿曲阅 . co m .c on
〔平。赵 cS 幼cn 。 田“ 泣eT ch n o le酬腼山 I’n 众以如 n of IT叹 2众勿耐 hC i ne se Me idc i ne 山ld M 画e iar 腕idc 司 J
2 ) ( X5第七卷 增刊 ★Vl o .7z k
3
.试剂
M D EM /F 12 ( Gi bx o bl r公司 ), 唾哇蓝 (M竹 ) ( S igln a
公司 ) , 胰蛋白酶 ( iD fe 。 公司 ) , L一谷氨酞胺 ( iS gm a 公
司 )青霉素 、 链霉素 (华北制药股 份有限公司 ) , 胎牛
血清 (北京元亨圣马生物技术研究所 ) PB S 液 (国产分
析纯试剂配制 ) 。
4
. 仪器
75 2 型紫外可见光光度计 ,上海第 三分析仪器厂
出品 ; v zAT LA B n 型半 自动生化分析仪 , 由荷兰制
造 ; H 一 I O3R L 型高速冷冻离心机由 日本制造 ; R F一5 04
荧光分光光度计 , 由 日本岛津制作所 出品 ; OYL M P U S
倒置显微镜 , 日本制造 ;几 C A N 酶标仪 , 由奥地利生
产 ; H E R AD 一6 3 C 0 2 孵箱 , 法国制造 。
5
.
A s 对 15 0 致大鼠心肌缺血的影响
取 Wist ar 大 鼠 58 只 , 随机分 为 6 组 : 空 白对照
组 , 缺血模型组 , 地奥心血康 85 m g / k g 剂量给药组 ,
A s 10 0
、
5 0
、
2 5m glk g 3 个剂量给药组 。 每 d 给药 1 次 ,
连续给药 s d 。 给药第 d3 开始皮下注射 1 次 sI 。 Zm g /
k扩 I , 间隔 24 h 再给 1 次 。 末次给药后 .0 5h (即末次注
射 15 0 24 h )再追加 l 次 15。 1m g/ k g , 0 . 5 h 后 ,将动物断
头处死 , 取血 , 立 即取出心脏 ,将 心尖部分 以 10 %福
尔马林固定 , 做病理学检查 , 分离血清测 5一 H T 、玩v ,
将剩余的心肌按文献 13 一习方法测定 SO D 活性及 M D A
含量 。
6
.
A s 对原代培养大鼠心肌细胞的影响
大鼠心室肌细胞培养按文献 16 一刀方法进行 , 取原
代培养的 W ist ar 大鼠心室肌细胞 , 随机分为 6 组 , 即
空 白对 照 组 、 V e r 0 . 2 5林gl m L 组 、 A s 3 0 . X() 、 1 5 . X() 、
7
.
5 0
、
3
.
7 5卜g /m L 组 , 于倒 置显微镜上观察药后 4 h 、
s h
、
2 4 h
、
4 8 h
、
7 2 h 细胞形态 、搏动幅度 、搏动频率 的变
化 , 唾哇蓝 比色法检测给药后 7 2 h A s 对心肌细胞存
活率的影响 。
肌 ,坏死灶 内肌纤维结构破坏 ,溶解 , 遗留下 网状支
架 , 坏死灶内有多少不等吞噬细胞 。 灌服地奥心血康
组动物可见灶状心肌坏死 , 形态改变与模型组相似 ,
但程度较模型组轻 ; A s 给药组部分动物未见 明显心
肌坏死 ,部分可 见程度较轻的心肌坏死 , 说明 A s 对
15 0 所致大鼠心肌坏死有较好的防治作用 。
2
.
A s 对 15 0 致心肌缺血大 鼠血清中 5一HT 、 玩v
含量的影响 (见表 z)
由表 2 结果可见 , A s 和地奥心血康可明显降低
心肌缺血动物血清中 5一H T 和 玩 v 含量 与模型对照
组 比较 ,差 异有 显著性 ( p < 0 . 5 一 .0 0 1 ) , 且 A s 高剂量
组的含量 明显低于地奥心血康组的含量 , 差异有显
表 I A。 对 sI 。 致心肌缺血大鼠心肌组织结构的影响
组 别 动物数 心肌坏死级别
(只 ) 0 级 l 级 2 级 3 级
空 白对照组 8 8 0 0 0
模型对照组 10 1 4 3 2
地奥心血康 85m吵9 10 1 7 2 0
A s l X() m叭 9 1 0 3 4 3 0
A s 50m沙9 10 5 4 1 0
A s 25 m glk
g 1 0 5 3 2 0
注 :病理学心肌坏死半定量判定标准 : 0 级 : 偶见微小心肌坏死
灶 , 间质轻度炎细胞浸润 ; l 级 : 心肌坏死灶少于 4 处 ,坏死灶较
小 , 位于内层心肌 ;2 级 : 心肌坏死灶 5一9 处 ,或少数坏死灶连
片 , 大部分波及心肌 内层 ;3 级 : 心肌坏死灶 10 处以上 ,或有较
大连片心肌坏死灶 ,除波及内层心肌外 , 可累及中层心肌 。
表 2 A s 对 soI 致心肌缺血大鼠血清中 5一价 、玩v 含t 的影晌(又士 s )
动物数 5一H T
一 一 ` (只 ) (卜岁垃)L (林岁垃L )
二 、 实验结果
1
.
A s 对 15 0 致心肌缺血大鼠心肌组织结构的影
响 (见表 l)
由表 1 结果 可见 , 150 可明显造成动物心肌灶状
坏死 ,坏死灶主要位于内层心肌 ,重者可累及 中层心
空白叶照组 8 3 1 . 8土 1 1 . 6 2 .胜 1 . 5 1
模型对照组 10 6 5 . 7土 38 . 7 1* 5 . 2土2 . 69 *
地奥心血康 85 m叭 9 10 30 .肚 14 . 73吞 1. 7土 1 .以助
A
s
l X() m叭 9 10 5 . 1土 1 .科. 女☆ 女 0 . 5劝 . 2 9幽 , ,
A
s
5 0m glk g 1 0 5
.
2士 1 . 4 8幽☆☆ ☆ 1. 1幻 . 9 0幽
A
s 2 5m叭 9 10 7 . 7幼 . 78幽奋女 ☆ 1. 9士 1 . 2 2幽
注 : 与空白对照组比较 , * p0< .0 5 、 * * p 0< .0 1 、 * * * p0< . 0 1
与模型对照组比较 ,仰 0< .0 5 、 △却0< .0 1 、 △△△p0< . 0 1
与地奥心血康组比较 , ☆ p 0< . 05 、 ☆ ☆ p` .0 1、 ☆ ☆ ☆ p 0< . 0 1
(下表同 )
6 〔W。心 cs ic cn 。 田以 eT ch nD l o幻办而山 r’n 台at 必n of rT司 i t动耐 ch ine se Me idc ine 山以 材山 e iar Me idc 司
世界科学技术一中医药现代化★基础研究
著性 ( p< 0 .0 1、 p< 0 .0 1) 。
3
.
s A对 S D O活性 、 A D M含量的影响 (见表 3)
由表 3结果可见 , A s 和地奥心血康可 明显增加
缺血心肌 SO D 活性 , 降低 M DA 含量 。
4
、
sA 时心肌细胞形态和搏动特点的影响
心肌细胞接种培养 24 h 后 ,心肌细胞贴壁并单层
散开 ,并伸展形成伪足 , 部分聚集成 团 , 30 ~ 9 0% 的细
胞 以 5一 6 5 次 /m in 搏动 。 培养 4 8h 后形成同心圆放射
状细胞簇 ,簇 间借伪足相互连接成功能合胞体搏动 。
频率在 14 0 次 /m in 左右 ,并呈 同步匀律搏 动 。 此后 ,
细胞维持旺盛的代谢 ,细胞簇进一步形成 , 并相互连
接成 网 , 至 7h2 搏动频率 、 节律 、强度稳定 。 分组处理
时 , 各组细胞状态 良好 。加人 A s h4 后 ,心肌细胞搏动
频率明显增 加 , sh 、 2 4 h 、 4 8 h 、 7 2 h 后与对 照组 相 比细
胞搏动有力 、 同簇细胞呈同步 , 搏动频率减慢 , 心肌
细胞立体感强 , 同一视野中成纤维细胞数量少 。
5
.
sA 对心肌细胞搏动频率的影响 (见表 4)
由表 4 结果可见 , 与给药前相比 , A s 各剂量组 、
阳性对照 药 V e司 . 2 5林g lmL 组 于 给药后 4 h 、 s h 、 2 4 h 、
48 h
、
72 h 心肌细胞搏动频率均明显减慢 , 与空 白对照
上看 ,各给药组于给药后 h4 即明显减慢心肌细胞 的
搏动频率 , s h 、 2 4 h 有恢复趋势 , 但均未达到给药前水
平 。 给药后 4 8h 各组抑制作用增强 , 给药后 7h2 较
48 h 各组抑制作用又有所恢复 。
6
.
sA 对心肌细胞存活率的影响 (见表 5 )
M rT 法检测表明 , A s 30 . 0 林以mL 剂量组 明显增
加心肌细胞 的光密度值 。 30 . 0 卜g /m L 组与空 白对照
组相 比有显著性差异 ( p < .0 0 1 ) 。
三 、 讨 论
表 3 A s 对 150 致心肌缺血大鼠心肌组织中
So n 活性 、 M n A 含 t 的影响 (又士 s )
组 别 动物数
(只 )
SO D
( U龟组织 )
M D A
n
~
。雌组
空白对照组
模型对照组
地奥心血康 85 m眺 g
A
s
l 0() m gk/
g
A
s 50m glk
g
A
s 25m眺 g
l 0
l 0
l 0
l 0
107
.
9士 6 . 22
9 4
.
8土9 . 2 8 *
1 12
.
3土 8 . 7 7`
112
.
1土 10 . 88查
109
.
6土 10 . 7宁
104
.
9土 18 . 2 6
7
.
5土 1. 07
10
.肚 3 . 10 *
.5 8功 .8 1竺
6
.
1土0 . 62 `
6
.
4士0 . 87八
6
.
2土0 . 7 1`
表 4 A s 对心肌细胞搏动频率的影响 (又幼 , =n 6)
组 别 加药后 (冰习
m i n)
24 h
空白对照组
V e司 . 25协留m L
A
s 3 .0 o 卜岁m L
A
s
l s
.
X() 卜岁kg
A s 7
.
50林留m L
A
s 3
·
75卜岁m L
加药前
(次 / m in )
14 9
.
2土9 . 2
15 1
.
4土8 . 4
14 7
.
7土7 . 0
巧0 . 0士9 . 3
146
.
7土 13 . 2
147
.
7士 9 . 0
136
.
6土 10 . 3
6 2
.
8劝 . 7 * * * △ △△
125
.
7土 8 . 0 * * △△ △
1 1 0 0料 . 5 * * * △ △△
106
.
0土4 . 5 * * * △△△
10 3
.
0土 13 . 3 * * * △△△
巧 0 . 2土 14 . 1
83
.
1土4 . 9 * * * △△ △
12 1
.
9土7
.
9
* * △△△
1 1 8 6幼 . 0 * * * △△ △
112
.
1土6 . 4 * * * △△ △
106 .7 士6
.
6
* * * △△ △
153
.
3士 10 . 2
60 .6 士 8
.
1
* * * △△ △
13 1
.
8士 10 . 7 * * △
128
.
4土 6 . 4 * * * △△ △
12 1
.
7料 .5 * * * △ △△
10 .7 4土 6 . 7 * * * △△ △
14 1
.伍 6 . 2
4 3
.
8土 3 . 7 * * * △△△
129
.
7土 11 . 6△△
103
.
8士 2 . 9 * * * △△ △
87
.
2土 13 . 5 * * * △△ △
7 9
.
3药 . 7 * * * △ △△
152
.
7土 11 . 5
46
.
1士3 . 0 * * * △△ △
119
.
8士 7 . 9 * * * △ △△
115
.
2土 8 . 3 * * * △ △△
9 8
.
2士 18 . 8 * * * △ △△
8 1
.
7土 14 . 5 * * * △ △△
注 :与空白对照组比较 , * * p 0< .0 1 、 * * * P< .0 o l ;
与加药前比较 , △P< .0 05 、 △ △ p 0< .0 1、 △△ △ P< .0 o l 。 表
S A
。 对心肌细胞存活率的影响【又土 s , =n 6)
组相 比亦明显减慢 ( p < 0 . 0 1 ) 。 A s 3 . 7 5 、 7 . 5 0 、 1 5 . 0 、
3 0
.
X() 林g/ m L 组 于给药后 4 h 、 s h 、 2 4 h 、 4 8 h 、 7 2 h 对心肌
细胞搏动频率的抑制作用均呈现 明显 的量 效关系 ,
3
.
7 5卜gl ml 组作用最强 。 与阳性对照药 V e r 0 . 2 5林g /m L
组相 比 , A s 各剂量组对心肌细胞搏动频率的抑制作
用均未及阳性对照药 v e r .0 25 林g /mIJ 组 。 从时效关系
组 别
空白对照组
V
e r 0
.
2 5协岁m L
A
s 3 .0 0 林留m L
A s 1.5 0 卜以m L
A
s
7
.
50林留m L
A
s
3
.
75卜留m L
O D翎
0
.
783 2土 0 . 0 5 10
0
.
7% 3土 0
.
04 50
△△
0
.
897 6士0 . 05 23
* *
0
.
8 229土0 . 03 44
0
.
7 90 5土0 . 02 7 2 9
0
.
7 67 5土 0 . 0 397
〔W o而 cS ic cn 。 田以 eT hc on 肠幻附 d山 rn 让at 勿 n of rT司 i`必刀成 C人泛en se eM idc ien az 砚d M加比ha eM idc 司 7
205第七卷 增刊 ★ V l o .7 k z
As为五加科植物刺老鸦 中的有效成分 , 我们 已
对其进行 了多年 的化学 、 药理 、 临床方面的研究 , 证
明其具有明显的抗炎 、 抗变态反应 、抗应激等生理活
性 , 并能提高清除自由基的能力 。 近年来随着心肌缺
血损伤机制研究的深人 , 发现大量氧 自由基生成及
脂质过氧化反应增强是心肌缺血损伤的主要机制之
一 。 因而寻找清除 自由基的有效药物是 目前研究保
护缺血心肌的重要途径之一 。 在我们的实验过程 中
发现 A s 可明显对抗 由 150 所造成的心肌缺血 , 有研
究报道 15 50 所造成的心肌坏死变化与人类发生 的心
肌梗塞相似 ,在我们的实验中可 以看出 , A s 可 以减轻
由 15 0 所造成心肌坏死程度 ,并可以保护心肌组织 中
SO D 活性 , 降低 M DA 含量 , 说明其可 以减少氧 自由
基 ,经 自由基 的生成 , 抑制脂质过氧化 , 从而抑制心
肌损伤 , 这可能是 A s 抗心肌缺血的重要机制之一 。
另外 A s 还可以降低血清中 5一 H T 含量 , 由于 5一 H T
储存 于血小板致密体内 , 血小板聚集时将导致 5一 H T
的释放 , 因此血清 中 5一H T 增高可致血小板 的进一步
损伤而引起微循环障碍 。 A s 还可以在心肌缺血时使
eL
v 维持在一个正常水平 , 避免儿茶酚对心肌的毒害
作用 ,减少心律失常的发生 。 心肌缺血常导致心肌细
胞的溶解死亡和 自律性细胞节律改变 。 然而 , 自发
性 、 节律性搏动是体外培养心肌细胞的生理特性之
一 , 是反映细胞功能的一项重要观测指标 。 A s 各剂量
组于给药后 4 h 心肌细胞搏动幅度显著 增大 , 明显减
慢心肌细胞 的搏动频率 , 其作用持续 至 7h2 , 并呈剂
量依赖性 ,表 明在该剂量范 围内 A s 具有 明显 的正性
肌力效应 , 与以往我们在离体实验 中观察到 A s 具有
正性肌力 、 负性频率实验结果相一致 。 通过 M rT 法检
测还观察到 A s 30 . o 卜g /ml 剂量组明显地增加心肌细
胞 的光密度值 , 即增加 心肌细胞存活率 , 表明 A s 对
心肌细胞具有一定的保护作用 。 实验结果提示 A s 的
抗 心肌缺血作用可能与减少心肌做功 , 降低心肌耗
氧量 、 增加 心肌细胞的稳定性有关 , 其深人 的作用机
制正在研究中 。
参考文献
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M e th o d s : hT
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,
ht e e o n t e nt s of s 一 H T an d 玩 v i n b l o o d s e ur m o n ac u t e
m y o e
adr i
a l i s e h e m i a mo d
e l s 场 inj e e t i n g 15 0 w e er d e t e e t e d: C a dr i a e m u s e l e e e l l ap P earn
e e , P u l s a ri o n fer 明 e n e y an d
s u vr iv a l r a t e w e er o b s e vr e d u s i n g t h e e e l l e沮 t u er t e e h in q u e o f o ir g i n al g e n e r a ti o n i n ar t s . R e s u l t s : A s e o u ld ihn ib i t
m y o e
adr
i a l n e e or s i s
.
I t e o u ld i n e er a s e th e ac ti v i t ie s o f S O D a n d d e e er a s e t h e e o nt e n t s of M D A i n e a r d l a e m u s e l e
,
as
( e
o n t in u e a 。 n pase 2 2 )
8 〔W o赵 sc ic cn 。 翻玄eT hc on l鳍州价de 。 仓以必 n of rT dQ it 勿耐 hC i en se eM d ic en 阴汉材山己ha eM d ic司
2) ( X5第七卷 增刊 ★ vol . 7 :k
三 、 讨 论
本研究主要探讨了太喜对小 鼠抑郁模型的影响 。
我们采用给予小 鼠连续的非控制性令其厌恶的电刺
激 、小 鼠悬尾实验 、小鼠强迫游泳实验复制获得性无助
抑郁模型 ,观察了太喜对小鼠获得性无助 、游泳绝望和
悬尾不动时间的影响 , 从表 1可知 ,对给予小鼠连续的
非控制性令其厌恶的电刺激实验 中 , 太喜作用小 鼠
2 8 d 可减少小鼠获得性无助的发生 , 这个结果在接下
来的小鼠悬尾实验 、 小鼠强迫游泳实验中也得到了证
实 , 即 :太喜作用小鼠 14d 可显著缩短小鼠游泳的不动
时间 ( P < .0 01 ) , 作用 2d8 可显著缩短游泳及悬尾 的不
动时间 ( P < .0 01 ) , 提示太喜对抑郁症有一定的预防作
用 , 可能成为临床抑郁症患者采用非药物疗法的选择
对象之一 。
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(责任编择 : 王 瑞 , 责任编审 : 张志华 , 责任译审 : 熊艳艳 )
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(责任编择 : 付建华 ,责任编审 :许有玲 , 责任译审 : 熊艳艳 )
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