全 文 ：文章编号:1005-376X(2003)01-0018-02 【论　　著】
大青叶和板蓝根提取物的抑菌作用研究
郑剑玲1 ,王美惠1 ,杨秀珍1 ,吴立军2
(1.辽宁省基础医学研究所 免疫微生物室 ,辽宁 沈阳　110101;2.沈阳药科大学中药学院 天然药物化学
系 ,辽宁 沈阳　110016)
　　摘要　目的:探讨中药大青叶和板兰根的逐级提取物的抑菌作用。方法:采用试管稀释法测定大青叶
和板兰根的各级提取物 —总浸液 、乙醇提取液 、正丁醇萃取液对各实验菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果:
各级提取物对实验菌分别有不同程度的抑菌作用 ,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最为明显;各提取物
的抑菌强度依次为:正丁醇萃取液(对三种实验菌均明显抑制:MIC≤62 mg/ ml)、乙醇提取液(金黄色葡萄
球菌:MIC≤62 mg/ ml、肠炎杆菌:MIC≤125 mg/ml、大肠埃希菌 MIC≤500 mg/ml)、总浸液(仅对金黄色葡
萄球菌抑制明显:MIC=62 mg/ml)。结论:大青叶和板蓝根具有广谱抗菌作用 , 其逐级提取物富集的抑菌
活性逐级增强。
关键词:大青叶;板兰根;抑菌作用
中图分类号:Q949.748.3　　　　文献标识码:A
STUDYON BACTERIOSTASIS OF ISATIS INDIGOTIC FORT
ZHENG Jian-ling ,WANG Mei-hui , YANG Xiu-zhen , et al.
(Department of Im munology and Microbiology , Institute of L iao Ning Basic Medical Science , S henyang
110101 , China)
Abstract:Objective:To study on bacteriostasis of ex tracts of Isatis indigo tica Fort.Method:Minimal inhibito-
ry concentration(MIC)of the ex tracts affecting on bacteria was assayed by tube dilution.Results:Bacteriostasis of
the ex tracts w as different.Staphylococcus aureus w as obviously restrained.The effect in sequence w as extract in
n-butanol(the three strains w ere restrained obviously:MIC≤62 mg/ ml), ex tract in ethanol(Staphy loccus au-
reus:M IC≤62 mg/ ml , Enteritis Bacillus:MIC≤125 mg/ ml), general steep(only staphylococcus aureus was re-
strained obviously:MIC=62 mg/ml).Conclusion:Bacteriostasis of Isatis indigo tica For t was broad-spectrum.The
activity w as enriched with ex tract.
Key words:Isatis indigo tica;Fort.;Bacteriostasis
　　大青叶和板兰根为十字花科植物菘蓝(Isatis
indigotica Fort.)的干燥叶和根 ,均以清热解毒为主
要功效 。药典中的药方多同时入药 ,主治呼吸系统
感染。近年来研究表明:大青叶和板蓝根还具有抗
肿瘤 、免疫调节及活血化淤等作用[ 1] 。但传统中药
多为水煎剂 ,未经深加工提取 , 用药量大而药效迟
缓。为此 ,以不同方法逐级提取获得了总浸液 、乙醇
提取液和正丁醇萃取液 ,通过对实验菌金黄色葡萄
球菌 、肠炎杆菌和大肠埃希菌的药物敏感性试验 ,观
察各级提取物的抑菌作用 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　中药原液的制备　大青叶和板兰根(北京同
仁堂提供)以 1∶1 混合 ,加入适量水提取二次 ,提取
液合并后蒸发浓缩获得总浸液;将总浸液加入乙醇
(终体积达 70%),沉淀过滤后取上清加入正丁醇萃
取 ,分离出水相和正丁醇相 ,水相经蒸发浓缩获得乙
醇提取液;正丁醇相经蒸发浓缩获得正丁醇萃取液 。
分别取各提取物1 g 加入1 ml普通肉汤制成原液备
用。
1.1.2　实验菌制备　以金黄色葡萄球菌ATCC 25923
收稿日期:2002-09-02
作者简介:郑剑玲(1967-),女 ,讲师,从事免疫微生物学的基础研究
和大肠埃希菌 ATCC15922 、肠炎杆菌为实验菌(本
实验室保存),用普通肉汤培养基培养 24 h 后 ,菌液
浓度调至约为 1.5×108 个/ml ,再以普通肉汤 1∶
1000稀释备用 。
1.2　实验方法 　药物敏感试验采用试管稀释
法[ 2] 。(1)稀释药液:取总浸液 、乙醇提取液 、正丁
醇萃取液三种中药原液分别以普通肉汤倍比稀释成
1∶2 、1∶4 、1∶8 、1∶16 、1∶32 、1∶64各 6个浓度 ,即含中
药浓度分别为 500 mg/ml 、250 mg/ml 、125 mg/ml、
62 mg/ml 、31 mg/ml、15 mg/ml。每个浓度设 3个
平行管 ,并分别设不含中药的肉汤培养基为对照管。
(2)加入菌液:每支试管内分别加入备用的实验菌
50 μl ,置 37℃温箱培养 18 ～ 24 h 。(3)结果判断:分
别从每一试管取一接种环液体点种于营养琼脂平
板 ,24 h后确定是否有细菌生长。以药物抑制待测
菌生长的最低浓度为最小抑菌浓度(Minimal in-
hibitory concentration ,M IC)。
2　结果
总浸液仅对金黄色葡萄球菌有较强抑菌作用 ,
被稀释至 1∶16 仍完全抑菌(即 M IC =62 mg/ml)
(见表 1);乙醇提取液对金黄色葡萄球菌明显抑菌 ,
被稀释至 1∶32 时仅有极少数细菌生长(即 M IC≤
62 mg/ml),对肠炎杆菌的抑菌作用次之(M IC≤125
mg/ml),对大肠埃希菌作用较弱(M IC ≤500 mg/
18 中国微生态学杂志　2003年 2月第 15卷第 1期　Chinese Jou rnal of M icroecology , February 2003 , Vol15 No1
DOI :10.13381/j.cnki.cjm.2003.01.008
ml)(见表 2);而正丁醇萃取液对三株实验菌—金黄
色葡萄球菌 、肠炎杆菌和大肠埃希菌均表现出较强
抑菌作用(MIC≤62 mg/ml)(见表 3)。
表 1　总浸液不同稀释度抑菌效果测定
菌株 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 对照
金黄色葡萄球菌 - - - - + + +
肠炎杆菌 ± + + + + + +
大肠埃希菌 ± + + + + + +
　注:+为细菌生长 , -为无细菌生长 , ±为仅有极少数细菌生长
表 2　乙醇提取液不同稀释度抑菌效果测定
菌株 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 对照
金黄色葡萄球菌 - - - - ± + +
肠炎杆菌 - - - ± + + +
大肠埃希菌 - ± + + + + +
　注:+为细菌生长 , -为无细菌生长 , ±为仅有极少数细菌生长
表 3　正丁醇萃取液不同稀释度抑菌效果测定
菌株 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 对照
金黄色葡萄球菌 - - - - ± + +
肠炎杆菌 - - - - ± + +
大肠埃希 - - - - ± + +
　注:+为细菌生长 , -为无细菌生长 , ±为仅有极少数细菌生长
3　讨论
纯中药制剂大青叶和板兰根均味苦性寒 ,以清
热解毒 、凉血化斑为主要功效 ,为广谱抗菌 、抗病毒
中药。临床上常用于呼吸系统感染的防治 ,而且制
剂多以水提取的总浸液入药 ,少数以乙醇提取液成
分入药 。为比较各级提取物的药物活性 ,将大青叶
和板兰根混合物经水 、乙醇和正丁醇三种极性递减
的溶液进行逐级提取 ,获得了含有不同极性分子的
中药成分。经药物敏感性实验证实:该中药的各级
提取物均对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌作用 ,对
肠炎杆菌和大肠埃希菌的抑菌作用随逐级提取而增
强 。可见 ,大青叶和板蓝根具有广谱抗菌作用 ,对
G+球菌(金黄色葡萄球菌)和 G-杆菌(肠炎杆菌和
大肠埃希菌)均有抑菌作用;而且经过对该中药制剂
的逐级提取工艺 ,使其药物活性逐渐富集 ,抑菌作用
增强。这对提高中药药效 、减少用药量 、同时减少无
效成分对机体副作用提供了实验依据 。探讨中药有
效成分的提取对适应中药现代化和产业化的要求有
着重要意义 。各级提取物的抗病毒作用有待进一步
研究观察。
目前 ,大量使用抗生素引起的细菌耐药性不断
上升已成为全世界共同关注的难题之一。尤其是金
黄色葡萄球菌的耐药率已达 90%以上 ,同时造成的
肠道菌群紊乱 ,易加重原发感染。因中药的抑菌作
用机制不同于抗生素[ 3] ,不易使细菌产生耐药 ,而
日益受到关注。且本中药的各提取物均对金黄色葡
萄球菌有极强的抑菌作用 ,因此 ,积极探讨该中药的
抑菌作用 ,以指导临床合理使用中药协同抗生素治
疗细菌感染 ,对减少细菌耐药性的产生有着积极的
现实意义。本制剂对临床耐药菌株的抗菌作用正在
实验研究中 。
参考文献:
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[ M] .上海:上海科学技术出版社, 1977:709-713.
[ 2] 陈奇主编.中药药理研究方法学[ M] .北京:人民卫生出版社 ,
1993:261.
[ 3] 张玉妥 ,张艳芳 ,季建军 ,等.中药对耐甲氧西林葡萄球菌体外抑
菌作用的研究[ J] .江苏中医, 2001 , 22(3):43.
(上接第 17页)
表 2　肺肝组织金黄色葡萄球菌定量及心血培养阳性分布(CFU/ g)
组别
肺
生长菌
例数
菌量
(x±s)
肝
生长菌
例数
菌量
(x±s)
心血
培养
阳性数
枯草杆菌组 0 - 0 - 0
SD-Ag组 2 4.31×102±1.41 3 2.46×10
2
±1.32 3
对照组 6 5.72×103±1.76 5 7.23×10
3
±1.35 7
表 2结果显示 ,肺 、肝组织做细菌定量检查 ,同
时做心血培养以枯草杆菌组效果最好 ,金黄色葡萄
球菌培养全部为阴性 ,无菌血症发生 ,而 SD-Ag 组
和对照组心血培养阳性数分别为 3例和 7例 。
3　讨论
创伤后伤口的感染是组织修复的主要障碍 ,不
但加重组织损伤 ,而且影响创伤修复速度。创伤感
染后大量细菌外毒素 、内毒素和蛋白水解酶的综合
作用 ,并通过细胞毒作用引起细胞因子的生物效应
及自由基损伤 ,致使组织水肿 、出血 、脓性分泌物数
量增多 ,蛋白质丧失和电解质急剧增加[ 1] 。枯草芽
胞杆菌在创面可形成生物屏障 ,发挥其生物拮抗作
用 ,保护创面 ,抵御致病菌的侵袭感染 。它可产生溶
菌酶 ,对变形杆菌属 、大肠埃希菌 、葡萄球菌属等有
害毒株有抑制作用 。枯草芽胞杆菌体外拮抗试验结
果表明 ,枯草芽胞杆菌对金黄色葡萄球菌 、绿脓杆菌
及大肠埃希菌 24 h抑菌率达 60%, 48小时抑菌率
可达 80%以上[ 2] 。本实验采用小鼠创伤感染模型 ,
进一步证实了枯草芽胞杆菌对创伤创面金黄色葡萄
球菌感染有较强的防治作用。创伤是人类生产 、生
活所伴随的产物 ,具有较高的发病率 ,枯草芽胞杆菌
喷雾剂的研制开发 ,为创伤治疗提供了一条崭新的
途径 ,具有极为广阔的应用前景 。
参考文献:
[ 1] 付小兵 ,王德文主编.现代创伤修复学[ M ] .北京:人民军医出
版社 , 1999.
[ 2] 齐涵 ,刘江秋 ,侯晓娜 ,等.枯草杆菌 BS224菌体外拮抗试验[ J] .
中国微生态学杂志 , 1991 , 3(4):18-19.
19中国微生态学杂志　2003年 2月第 15卷第 1期　Chinese Journal of M icroecology , Feb ruary 2003 , Vol15 No1