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蓝菊抗病毒口服液的薄层鉴别



全 文 :·药品鉴定·
中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
2010 年 8月第 7卷第 22期
蓝菊抗病毒口服液是我院生产的中药制剂,其处方主要
由板蓝根、大青叶、野菊花、重楼等七味中药组成,具有清热
解毒,凉血利咽的功效,用于治疗咽喉炎、扁桃体炎、气管炎
等,疗效显著。原质控指标对靛蓝、靛玉红的定性鉴别方法不
稳定,重现性差,为完善其质量标准,笔者对蓝菊抗病毒口服
液薄层定性鉴别进行重新研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Sartorius BS210S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);
Cleanert C18-SPE;Cleanert C18-SPE; 东方-B 型风热式电热
恒温干燥器 (广州东方电热干燥设备厂);ZF-2 型三用紫外
仪(上海市安亭电子仪器厂);聚酰胺薄膜(浙江省台州市路
桥四甲生化塑料厂,10 cm×10 cm);GF254 硅胶板(10 cm×
10 cm);硅胶 G 板(10 cm×10 cm);展开槽(10 cm×20 cm)。
1.2 试药
蓝菊抗病毒口服液(广东省第二人民医院制剂科,批号:
091214);板蓝根对照药材、野菊花对照药材、大青叶对照药
材、重楼对照药材、贯众对照药材、苍术对照药材、甘草对照药
材、精氨酸、蒙花苷、绿原酸、靛蓝、靛玉红均来源于中国药品
生物制品检定所;无水乙醇、甲醇、正丁醇、三氯甲烷、正己
烷、环己烷;石油醚(60~90℃)、乙醚、丙酮、甲酸、丁酮、冰醋
酸、乙酸乙酯均为分析纯;纯化水(本院自制);10%硫酸乙醇
溶液;2%三氯化铝;茚三酮试液;硅胶 G;羧甲基纤维素钠。
2 方法与结果
2.1 阴性对照药材煎煮液制备
按处方比例,分别称取除板蓝根、大青叶、野菊花、重楼
之外的其余药材,同蓝菊抗病毒口服液制法分别制成板蓝根
阴性对照煎煮液、大青叶阴性对照煎煮液、野菊花阴性对照
煎煮液、重楼阴性对照煎煮液。
2.2 对照药材煎煮液制备
分别称取板蓝根对照药材、大青叶对照药材、野菊花对
照药材、重楼对照药材,同蓝菊抗病毒口服液制法制备,分别
制成板蓝根对照药材煎煮液、大青叶对照药材煎煮液、野菊
花对照药材煎煮液、重楼对照药材煎煮液。
2.3 薄层鉴别
2.3.1 板蓝根的鉴别[1-3]
取蓝菊抗病毒口服液 30 ml,离心,取上清液加到已处理
好的 C18小柱(先用甲醇 6 ml,淋洗,再用水 6 ml,洗去甲醇)
上,用水 6 ml 洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加稀乙醇 1 ml 使
溶解,作为供试品溶液。分别取板蓝根对照药材煎煮液、阴性
对照煎煮液按以上方法制得对照药材溶液、 阴性对照溶液。
另取精氨酸对照品,加稀乙醇制成每毫升含 0.5 mg 的溶液,
作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》附录Ⅵ B)试验,
分别点样 4 μl 于同一硅胶 G(自然干燥)板上,以正丁醇-冰
醋酸-水(19∶5∶5)为展开剂,展开,取出,热风吹干,喷以茚三
酮试液,在 105℃加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中,在与
对照品和对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,
而阴性对照无干扰,见图 1。
2.3.2 大青叶的鉴别[1,4]
取蓝菊抗病毒口服液 30 ml,至分液漏斗中,加三氯甲烷
[基金项目] 广东省中医药局科研课题:蓝菊抗病毒口服液工艺及质量标
准研究(项目号:2009121 )。
[作者简介] 郑艳平(1976-),女,主管中药师,主要从事医院制剂生产及质
量控制。
蓝菊抗病毒口服液的薄层鉴别
郑艳平,林壮民
(广东省第二人民医院,广东广州 510317)
[摘要] 目的:建立蓝菊抗病毒口服液质量标准中的薄层鉴别方法。方法:分别采用硅胶 G 板对板蓝根、大青叶、重楼,
聚酰胺薄膜板对野菊花进行薄层鉴别。 结果:本方法对蓝菊抗病毒口服液中的板蓝根、大青叶、野菊花、重楼的薄层
色谱特征明显,阴性对照无干扰。 结论:本方法具有良好的专属性,重现性,可用于蓝菊抗病毒口服液的定性鉴别。
[关键词] 蓝菊抗病毒口服液;板蓝根;大青叶;野菊花;重楼;薄层色谱法
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2010)08(a)-076-03
Identification of Lanju antivirus Oral Liquid by TLC
ZHENG Yanping, LIN Zhuangmin
(The Second Peoples Hospital of Guangdong Province,Guangzhou 510317, China)
[Abstract] Objective: To establish a method to indentify Lanju antivirus Oral Liquid by TLC. Methods: Silica gel G plate
was used to indentify Radix Isatidis and Folium Isatidis, polyamide film board was used to indentify Flos Chrysanthemi In -
dici. Results: The method can be used to indentify Radix Isatidis, Folium Isatidis, Flos Chrysanthemi Indici and Rhizoma
Paridis of Lanju antivirus Oral Liquid,and the features of thin-layer chromatography were distinct and negative control
without interference. Conclusion: The present method is strong specificity and highly reproductive, which can be used for
the qualitative of this preparation.
[Key words] Lanju antivirus Oral Liquid; Radix Isatidis; Folium Isatidis; Flos Chrysanthemi Indici; Flos Chrysanthemi In -
dici; Thin layer chromatography
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2010 年 8月第 7卷第 22期 ·药品鉴定·
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30 ml 提取 3 次,合并氯仿液 ,水浴蒸干 ,残渣加三氯甲烷
1 ml溶解,作为供试品溶液。分别取大青叶对照药材煎煮液、
阴性对照煎煮液按以上方法制得对照药材溶液、阴性对照溶
液。 另取靛玉红加三氯甲烷 1 ml制成每毫升各含 1 mg 的混
合溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》附录Ⅵ B)
试验,分别点样 10 μl 于同一硅胶 G 板上,以环己烷-三氯甲
烷-丙酮(5∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干。 供试品色谱中,
在与对照品和对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的淡
粉红色斑点,阴性对照无干扰,见图 2。
图 2 大青叶 TLC 色谱图
(1.靛玉红对照品;2.对照药材;3~5.供试品;6.阴性对照)
Fig.2 TLC chromatography of Folium Isatidis
(1.Reference substance of Indirubin; 2.Reference medicinal material; 3-
5.Sample; 6.Negative sample)
2.2.3 野菊花的鉴别[1,5-6]
取蓝菊抗病毒口服液 30 ml,离心,取上清液,加到已处
理好的 C18小柱(先用甲醇 6 ml,淋洗,再用水 6 ml,洗去甲
醇)上,用水 6 ml 洗脱,弃去,再用 40%甲醇洗脱,收集洗脱
液,蒸干,残渣加甲醇 1 ml使溶解,作为供试品溶液。 分别取
野菊花对照药材煎煮液、阴性对照煎煮液按以上方法制得对
照药材溶液、阴性对照溶液。另取蒙花苷对照品,制成每毫升
含 0.2 mg 的溶液,作为对照品溶液。 照薄层色谱法(《中国药
典》附录Ⅵ B)试验,分别吸取上述溶液各 5 μl,点样于同一
聚酰胺薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-三氯甲烷-甲酸-水(15∶
15∶6∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 2%三氯化铝溶
液,热风吹干,置紫外灯(365 nm)下检视。 供试品色谱中,在
与对照品和对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的黄色
荧光斑点,而阴性对照无干扰,见图 3。
图 3 野菊花 TLC 色谱图(聚酰胺薄膜板)
(1.阴性对照;2.对照药材;3.蒙花苷对照品;4~6.供试品)
Fig.3 TLC chromatography of wild chrysanthemum flower
(Polyamide layer sheet)
(1.Negative sample; 2.Reference medicinal material; 3. Reference sub-
stance of linarin; 4-6.Sample)
2.2.4 重楼的鉴别[1,7-8]
取蓝菊抗病毒口服液 30 ml,离心,取上清液,加到已处
理好的 C18小柱(先用甲醇 6 ml,淋洗,再用水 6 ml,洗去甲
醇)上,用水 6 ml 洗脱,弃去,再用 80%甲醇洗脱,收集洗脱
液,蒸干,残渣加甲醇 1 ml使溶解,作为供试品溶液。 分别取
重楼对照药材煎煮液、阴性对照煎煮液按以上方法制得对照
药材溶液、阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》附录Ⅵ
B)试验,吸取供试品溶液和对照药材溶液 5 μl,分别点于同
一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(15∶5∶1)的下层液
为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 10%硫酸乙醇溶液 ,在
105℃加热至斑点显色清晰,分别置紫外灯(365 nm)下和日
光灯下检视。 供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置
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中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
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上,显相同颜色的荧光斑点,阴性无干扰,见图 4、5。
3 讨论
大青叶含靛蓝、靛玉红,均是脂溶性成分,特别是靛蓝极
性很低,在水中的溶解度很小,且在空气中极易氧化,在原先
的质量控制中对它做薄层定性鉴别,发现其稳定性、重现性
差。在本实验中,笔者根据本口服液水提工艺的特点,通过反
复实验,发现本口服液中靛蓝的薄层鉴别的稳定性、重现性
差,最后删去了靛蓝的薄层鉴别,保留了靛玉红的薄层鉴别,
并且对大青叶原有供试品的处理作出了改进。原有供试品处
理方法:取样品,水浴蒸干,加氯仿加热回流 1 h,过滤,滤液
浓缩至 1 ml,作为供试品溶液。由于样品中含蜂蜜,水浴蒸干
后黏性很大,靛玉红绝大部分被包裹在蜂蜜及其他水溶性杂
质中,故改用氯仿直接从样品中萃取,这样既简单又省时,且
靛玉红很容易就被萃取出来。
本实验对板蓝根的薄层鉴别,打破了传统的液液萃取方
法,采用了液固萃取。 根据供试品中所要分离的精氨基酸的
强极性的特点,采用传统的液液萃取,其可行性很难,于是笔
者试着水浴蒸干后,用强极性的稀乙醇溶出精氨酸,问题是
因方中含有较大量的蜂蜜、蔗糖等极性较大的成分,溶出精
氨酸的同时把大量的杂质也溶出来了,薄层鉴别时,因这些
杂质对精氨酸干扰太大,始终没有成功,最后只得打破了传
统的液液萃取方法,采用液固萃取的思路,根据精氨酸的极
性采用了 C18反相预处理柱,用水来洗脱,收集水洗脱液,结
果精氨酸得到了有效的分离。 另外,笔者发现在板蓝根的薄
层鉴别中,其展开剂中用水饱和的正丁醇代替正丁醇,精氨酸
的 Rf 值明显提高,此方法在使用薄层色谱法鉴别板蓝根中
具有较深的意义,值得借鉴。
重楼的薄层鉴别中,根据重楼皂苷的理化性质,实验中
首选水饱和正丁醇来进行萃取,但发现供试品中杂质干扰太
大,在供试品溶液与对照药材溶液相应位置上,只有一个斑
点相对应,而《中国药典》2010 年版要求重楼药材的薄层鉴
别要有重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ和重楼皂苷Ⅶ
这四个成分相对应,于是也采用了分离度好的 C18反相预处理
柱,用 80%甲醇洗脱液来洗脱,收集其洗脱液,结果使重楼皂
苷得到了很好的分离。
[参考文献]
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(收稿日期:2010-05-31)
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