全 文 ：六月青乙醇提取物对鸭乙型肝炎病毒 DNA的抑制作用
张士军 , 　陈兆霓 , 　林　兴 , 　黄春喜 , 　黄仁彬＊
(广西医科大学药理学教研室 ,广西 南宁 530021)
收稿日期:2008-05-14
基金项目:广西科学基金项目(桂科基 0731066);广西研究生教育创新计划资助项目(2006105981007D14);广西科学基金项目(桂科攻
0322024-5日)
作者简介:张士军(1974-),男 ,博士 ,副教授 ,主要从事抗肝炎药研究。 Tel:(0771)5358272E-mail:zsjun66@sina.com
＊通讯作者:黄仁彬 ,男 ,教授 ,博士生导师。 E-mail:huangrenbin518@ 163.com
关键词:六月青乙醇提取物;鸭乙型肝炎病毒;荧光定量 PCR
中图分类号:R285.6　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)03-0470-02
　　六月青系爵床科(Acanthaceae)肖鸡笼属植物肖鸡笼
(顶花马兰)Taraphochlamysafinis(Gif)Bremekhu的干燥地
上部分 [ 1] , 为广西民间草药。在《本草拾遗》中记载 , 其能活
血 、凉血 、舒肝泻湿 、消肿止痛 , 主要用于急慢性肝炎 、黄疸
等 [ 2] 。本文采用荧光定量 PCR法 , 研究六月青乙醇提取物
对鸭乙型肝炎病毒 DNA的抑制作用 , 为开发六月青用于乙
型肝炎治疗提供实验依据。
1　材料
1.1　动物
广西麻鸭:1日龄 , ♀♂不拘 , 体重(50±5)g, 购自广西
畜牧良种养殖场。
1.2　药品与试剂
六月青乙醇提取物的制备:六月青地上部分采于广西灵
山县 , 经广西中医药研究所鉴定室鉴定。其地上部分粗粉用
60%乙醇回流提取 , 过滤得滤液经旋转蒸发回收乙醇 ,浓缩
成 1 mL含有 10 g生药备用。阿昔洛韦(aciclovirACV):湖
南迪诺制药有限公司医药工业研究所产品 ,批号:20061227;
Taq酶 、dNTP:美国 MBI公司;SYBRPremixExTaqTM:宝生
物工程(大连)有限公司。
1.3　引物
根据参照文献 [ 3] , 序列:上游引物:5′-AACCATTGAAG-
CAATCACTAGAC-3′;下 游 引 物: 5′-ATCTATGGTGGCT-
GCTCGAACTA-3′。目的片段大小为 218bp。由上海基康生
物技术有限公司合成 。
1.4　主要仪器
实时荧光定量 PCR仪:美国 Bio-Rad公司 , iCycleriQ。
2　方法
2.1　广西麻鸭乙肝动物模型的建立
采用健康成年的广西麻鸭产的蛋孵化的 1日龄雏鸭 , 经
腹腔注射 0.2 mLDHBVDNA强阳性病毒血清。 接种 1 W
后 , 分别从胫静脉采血约 0.2 ～ 0.3mL左右 , 装入一次性 Ep-
pendof管中 , 整个过程注意不要交叉污染。 4 000 r/min离
心 5 min, 取血清。 -20℃保存备用。采用 PCR法检测筛选
出感染阳性鸭。
2.2　实验分组及用药
经 PCR法检测筛选出感染阳性鸭 , 饲养至 13日龄作为
实验动物进行药物治疗试验。将 50只鸭随机分为 5组 , 每
组 10只。 ①模型组:等量的生理盐水;②阳性对照组:ACV,
0.1 mg/kg/d;③EELYQ高剂量组:5 g/kg/d;④EELYQ中剂
量组:2.5g/kg/d;⑤EELYQ低剂量组:1.25g/kg/d。各组动
物在同样条件下饲养 ,均以每日 1次空腹灌胃给药 14 d。于
用药前(T0)、用药 1W(T7)、用药 2 W(T14)、停药 3 d(P3)
时 ,分别从胫静脉采血 , 每只 0.5mL左右 ,分离血清 ,于 -20
℃保存备用。
2.3　FQ-PCR检测血清 DHBVDNA
2.3.1　DHBVDNA提取　采用直接加热法。每次取血清
100 μL,沸水浴 10min, 10 000 r/min离心 5 min。
2.3.2　FQ-PCR反应体系　2×SYBRPremixExTaqTM 12.5
μL;10 μM上游引物 1.0 μL;10 μM下游引物 1.0 μL;加无
菌双蒸水至 23 μL;血清提取物 2.0 μL。
2.3.3　FQ-PCR反应条件　95 ℃变性 10s;55℃退火 , 20s;
72 ℃延伸 30 s。共反应 45个循环。
2.3.4　FQ-PCR的结果判读　扩增过程及数据的储存和分
析均由仪器及自带的软件自动完成。
2.4　统计学处理
采用 SPSS10.0统计软件分析数据 ,治疗前后比较采用
配对资料 t检验 , 组间比较采用方差分析 ,各均数两两比较。
3　结果
3.1　EELYQ对 DHBVDNA的抑制作用
与模型组比较 ,阳性对照组与 EELYQ高 、中剂量组用药
2 W(T14)后 ,均可使麻鸭血清 DHBVDNA拷贝数显著降低
(P<0.01),抑制作用有明显的量效和时效反应关系;停药 3
d(P3)后 , EELYQ各剂量组和阳性对照组血清 DHBVDNA
均有反跳现象 ,其中 EELYQ高剂量组血清 DHBVDNA反跳
现象较轻。 EELYQ高剂量组体内抗DHBVDNA的作用效果
最佳。说明 EELYQ抑制 DHBVDNA的作用与其剂量大小
470
2009年 3月
第 31卷　第 3期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
March2009
Vol.31　No.3
和作用时间有一定的关系。结果见表 1。
表 1　 治疗前后鸭血清 DHBVDNA水平比较( x±s×108 , n=10Copy/mL)
组别 DHBVDNAT0 T7 T14 P3
模型组 1.16±0.32 1.22±0.39 1.22±0.40 1.27±0.42
阳性对照组 1.15±0.33 0.15±0.05＊＊ 0.14±0.06＊＊ 0.31±0.07＊＊
EELYQ高剂量组 1.17±0.35 0.20±0.06＊＊ 0.17±0.05＊＊ 0.18±0.05＊＊
EELYQ中剂量组 1.19±0.38 1.06±0.87 0.76±0.26＊＊ 0.92±0.07＊
EELYQ低剂量组 1.21±0.38 1.20±0.46 0.99±0.46 1.08±0.54
　　注:与模型组比较 , ＊P<0.05;＊＊P<0.01。
4　讨论
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的 ,以肝脏炎性
病变为主的一种传染性疾病。目前实验普遍采用 DHBV感
染 1 ～ 3日龄雏鸭建立慢性携带状态的鸭乙肝模型 ,其病程
较规律 , 病毒血症持续时间较长且较稳定 , 无明显的自然转
阴现象 , 保证了模型的稳定性和可靠性。
本实验采用快速 、准确的实时荧光定量 FQ-PCR技
术 [ 4] , 检测六月青乙醇提取物对广西麻鸭血清中 DHBVDNA
含量的变化。 FQ-PCR是一种简便 、敏感 、特异 、准确的检测
DHBV的方法 , 污染少 , 是目前国际公认的核酸分子定量定
性检测标准方法 , 广泛用于药物疗效考核和病原体检测等领
域。
我们应用广西 1日龄雏鸭经腹腔感染 DHBV的方法来
建立鸭乙型肝炎动物模型进行六月青乙醇提取物抗病毒实
验。研究结果表明 , 六月青乙醇提取物能够有效抑制 DHBV
DNA的复制 , 说明六月青乙醇提取物在体内有抗病毒作用 ,
且抗病毒效果与药物剂量大小有一定的关系 ,这可能是其治
疗慢性乙型肝炎的其中一条途径。
参考文献:
[ 1] 　林　兴 ,黄权芳 ,黄仁彬 ,等.广西民间药六月青的性状与显微
鉴定 [ J] .中药材 , 2005, 28(7):541-543.
[ 2] 　徐国钧 ,徐珞珊 ,金蓉鸾 ,等.中国药材学 [ M] .北京:中国医药
科技出版社, 1996:16.
[ 3] 　DuflotA, MehrotraR, YuSZ, etal.Spectrumofliverdisease
andduckhepatitisBvirusinfectioninalargeseriesofChinese
duckswithhepatocelularcarcinoma[ J] .Hepatology, 1995, 21
(6):1483-1491.
[ 4] 　BrechtbuehlK, WhaleySA, DusheikoGM, etal.Arapidreal-
timequantitativepolymerasechainreactionforhepatitisBvirus
[J].JVirolMethods, 2001, 93(1-2):105-113.
参松养心胶囊对中华小型猪心脏电生理的影响
金振一 1 , 　龚　箐 2 , 　浦介麟2＊ , 　孙　抒 1
(1.延边大学医学院附属医院 ,吉林 延吉 133000;2.中国医学科学院阜外心血管病医院 ,北京 100037)
收稿日期:2008-05-18
作者简介:金振一(1968-),男 ,副主任医师 ,硕士生导师 ,博士研究生 ,主要从事心血管病基础 、心脏起搏与电生理研究。
＊通讯作者:浦介麟 , E-mail:jielinpu@yahoo.com
关键词:参松养心胶囊;电生理;心脏;中华小型猪
中图分类号:R285.6　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)03-0471-02
　　参松养心胶囊为治疗心律失常的复方中药 , 由人参 、甘
松等十几种中药组成 , 方中多数药物均有较好的抗心律失常
作用 [ 1] 。动物模型的研究报道参松养心胶囊能明显抑制药
物诱发的心律失常 , 并对缺血再灌注所致心律失常有明显的
保护作用 [ 2] 。最近的随机双盲临床试验显示 , 参松养心胶囊
对冠心病心律失常有明显的疗效 [ 3-4] , 也有报道治疗窦性心
动过缓获满意疗效 [ 5] , 但其治疗缓慢性心律失常机制方面的
研究罕见。本研究旨在探讨参松养心胶囊对中华小型猪心
率以及心脏腔内电生理的影响 ,以进一步了解其抗心律失常
的内在机制。
1　材料与方法
1.1　材料　实验用规范健康成年中华小型猪 20只(购于北
京农业大学), ♀♂不拘 ,体重 30 kg左右。随机分为实验组
12只和对照组 8只 , 实验组中 1只在实验中期因肺部感染
471
2009年 3月
第 31卷　第 3期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
March2009
Vol.31　No.3