全 文 ：收稿日期:1999-10-08
RP-HPLC法测定板蓝根 、大青叶中
靛蓝 、靛玉红的含量
孙立新　唐　虹1　尹　萍　宁黎丽　毕开顺
沈阳药科大学药学系 , 沈阳　110015;　1 辽宁卫生职工医学院 ,沈阳　110015
摘　要　用 RP-HPLC 以安宫黄体酮为内标物同时测定板蓝根 、大青叶中靛蓝 、靛玉红的含量.色
谱条件:色谱柱为 Spherisorb C18柱;流动相为甲醇-水(62∶38 , V∶V);检测波长 280 nm;靛蓝和靛玉
红的平均回收率分别为(99.0±1.1)%和(104.2±3.5)%.本法操作简便 , 结果准确.
关键词　板蓝根;大青叶;靛蓝;靛玉红;高效液相色谱法
分类号　R914.1
　　板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica
Fort.)和爵床科植物马蓝 Baphicacanthus cusia
(Nees)Bremek.的干燥根〔1〕.大青叶为菘蓝 、马蓝
和蓼科草本植物蓼蓝(Polygonum tinctorium
Ait.)的枝和叶〔2〕.板蓝根和大青叶均具有清热解
毒 、抗菌消炎 、凉血消斑等功效 ,二者在中药成方
中经常配伍入药 ,如金青感冒颗粒 ,小儿退热颗
粒 ,复方板蓝根颗粒等.板蓝根和大青叶的有效成
份都是靛蓝(indigo)和靛玉红(indirubin)〔3〕.靛玉
红对治疗慢性粒细胞白血病有较好疗效.靛蓝 、靛
玉红的含量测定方法已有氧化滴定法 、直接比色
测定法 、薄层色谱法 、双波长分光光度法 、反相高
效液相色谱法〔4〕.其中反相高效液相色谱法采用
外标法定量 ,对获得操作的重复性来说有其不足
之处 ,本文则采用安宫黄体酮为内标物以内标法
定量 ,结果令人满意.
1　仪器与材料
日本岛津公司高效液相色谱仪 LC-6A系列;
LC-6A 溶剂输送泵;SPD-6AV 紫外-可见分光检
测器;LC-R3A数据处理装置;7125 20μL 定量进
样阀.
对照品安宫黄体酮 、靛蓝 、靛玉红(中国药品
生物制品检定所);甲醇为色谱纯;氯仿为分析纯;
水为重蒸馏水;板蓝根 、大青叶样品购于各地药材
公司.
2　方法与结果
2.1　分离条件
以甲醇∶水(62∶38 , V∶V)为流动相 ,安宫黄
体酮为内标物.靛蓝 、安宫黄体酮 、靛玉红的保留
时间分别为 15.8 ,23.8 , 31.1 min.靛蓝与内标物
的分离度为 2.90;靛玉红与内标物的分离度为
1.51.
2.2　色谱条件
色谱 柱:Spheriso rb C18 柱 (4.6 mm ×
250 mm , 10 μm);流动相:甲醇-水(62∶38 , V∶
V);流速:1.0 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:
室温;进样量:20μL .
2.3　标准曲线
精密称取靛蓝 1.5 mg 于 50 mL 量瓶中 ,靛
玉红 2.0 mg 于 100 mL 量瓶中 ,安宫黄体酮 50
mg于 25 mL 量瓶中 ,分别用氯仿溶解并稀释至
刻度.精密吸取靛蓝标准液 0.8 、1.6 、2.4 、3.2 、
4.0 mL 分别于 10 mL 量瓶中 ,各加入安宫黄体
酮内标液 2.0 mL ,用氯仿稀释至刻度.精密吸取
靛玉红标准液 0.4 、0.8 、1.2 、1.6 、2.0 mL 分别于
5 mL 量瓶中 ,各加安宫黄体酮内标液 1.0 mL ,用
氯仿稀释至刻度.分别进样 20 μL ,得色谱图 ,计
算出回归方程.靛蓝回归方程:Y =0.078 8C+
0.367 2 , r =0.999 9 ,靛蓝在 2.4 ～ 12.0 μg/mL
范围内呈线性.靛玉红回归方程:Y =0.156 8C-
0.103 5 , r=0.999 9 ,靛玉红在 1.6 ～ 8.0 μg/mL
范围内呈线性.其中:Y 是靛蓝或靛玉红与安宫
黄体酮峰面积之比;C是靛蓝或靛玉红的浓度.
2.4　样品测定
精密称取板蓝根或大青叶粗粉 8 g 置索氏提
取器中 ,加氯仿 100 mL ,80℃回流 8 h ,浓缩提取液
第 1 7 卷　第 3 期
2 0 0 0 年 5 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.17 　　No.3
May 2000　p.191
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2000.03.012
置10 mL量瓶中 ,加入内标液 2.0 mL ,用氯仿稀释
至刻度 ,进样 20μL ,得色谱图.由回归方程计算靛
蓝 、靛玉红的含量 ,并计算出药材中二成分的含量 ,
样品色谱图及样品测定结果如图 1 、表 1所示.
Tab.1　Content of indigo and indirubin in the idigowoad root and leaf from various origins
Sample Origin Indig o/μg·g-1 Indirubin/μg·g-1
Indigowoad Leaf Sichuan 397.6 153.6
Indigowoad Leaf Anhui 421.5 863.9
Indigowoad Leaf Anhui 384.0 164.8
Indigowoad Leaf Yunnan 957.4 1 117.7
Indigowoad Roo t Anhui 17.5 18.5
Indigowoad Roo t Hebei 14.6 24.2
Indigowoad Roo t Hebei 8.3 22.0
Indigowoad Roo t Yunnan 5.7 7.5
Indigowoad Roo t Guangdong 6.8 0
Indigowoad Roo t Jiang su 8.5 18.3
Fig.1　Chromatogram of idigowoad root and leaves
A — Indigo;B—Medroxyprogeterone acetate;C— Indirubin
2.5　重复性实验
同时提取四川大青叶(样品 1)粗粉 4 份 ,按
上述方法制备样品液 ,色谱条件同上 ,测定 ,并计
算出药材中二成份的含量.靛蓝 x =397.4 μg/g ,
RSD =1.9%;靛玉红 x =149.7 μg/g , RSD =
2.0%.
2.6　加样回收率测定
精密称取四川大青叶(样品 1)粗粉 4 份 ,其
中一份作为对照 ,另 3份分别加入不同量的靛蓝 、
靛玉红对照液 ,按样品液方法操作 ,计算回收率 ,
结果见表 2.
Tab.2　Results of recovery tests
Constit-
uentes
Added/ mg Obs/mg Recovery/ % Mean±SD/ %
1.200 1.193 99.4
1.200 1.191 99.3
Indigo 1.500 1.500 100.0 99.0±1.1
1.500 1.501 100.1
1.800 1.765 98.0
1.800 1.753 97.4
2.000 2.014 100.7
2.000 2.009 100.5
Indirubin 2.400 2.460 102.5 104.2±3.5
2.400 2.571 107.1
2.800 3.050 109.0
2.800 2.951 105.4
3　讨论
作者试用联苯 、萘 、苯甲酸苯酯 、安宫黄体酮
等作为内标物 ,从分离度和保留时间上看 ,以安宫
黄体酮为宜;避光条件下 ,24 h 内板蓝根 、大青叶
中靛蓝 、靛玉红在氯仿中稳定 ,时间过长 ,靛蓝 、靛
玉红分解 ,故应保证在 24 h 内完成实验;作者首
次采用内标法 ,准确地测定了板蓝根 、大青叶中靛
蓝 、靛玉红的含量 ,结果准确 、可靠 ,重复性好.
参考文献
1　崔熙 , 李松林 ,王建新 , 等.南 、北板蓝根的鉴别和氨基
酸含量比较分析.中药材 , 1995 , 15(5):17～ 19
2　乔传卓 , 崔熙.大青叶类药材的研究概况.中药材 ,
1986 ,(5):41
3　仲坚.板蓝根与大青叶在河北固安的生产代用情况与
原植物辨别.中药通讯 , 1959 , 9(4):15
4　杨军 ,王京霞.反相高效液相色谱法测定板蓝根 、大青
叶中靛蓝 、靛玉红的含量.中药新药与临床药理 ,
1996 , 7(2):43 ～ 44
192 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 17卷
Determination of the Content of Indigo and Indiru-
bin in the Indigowoad Root and Leaves by RP-
HPLC
Sun Lixin , Tang Hong ,Yin Ping ,Ning Lili ,Bi Kaishun
Department of Pharmacy , Shenyang Pharmaceut ical University , Shenyang 110015
Abstract　An analy tical method fo r determination of indig o and indirubin in the indigow oad root and leaves
by RP-HPLC was developed.The HPLC conditions were as follow s:spherisorb C18 column(4.6 mm×250
mm);the mobile phase , methanol-H2O(62∶38 , V∶V);detection w aveleng th , 280 nm;internal standard ,
medroxyprogesterone acetate.The mean recoveries for the indigo and indirubin w ere(99.0±1.1)% and(104.2±3.5)%, respect ively .The method was simple and accurate.
Key words　indigowoad root;indigowoad leaves;indigo;indirubin;HPLC
1富山医科药科大学
西南忍冬花蕾中的三个新三萜皂苷
相　婷　吴立军　郑　璐　吴　斌　门田重利1　杨继芳2
沈阳药科大学中药系 , 沈阳　110015;　2 吉林省人民医院 ,长春　130021
　　从西南忍冬 Lonicera bournei Hemsl花蕾中
分离得到三个新的三萜皂苷 ,通过理化性质和谱
学分析(MS 、1D-NMR 、2D-NMR),确定结构分别
为3-O-[ β-D-吡喃葡萄糖基-(1※2)-β-D-吡喃葡
萄糖基] -23-羟基-羽扇豆烷-20(29)-烯-28-酸-28-
O-[ β-D-吡喃葡萄糖基-(1※6)-β-D-吡喃葡萄糖]
酯 ,命名为西南忍冬皂苷 C.3-O-[ β-D-吡喃葡萄
糖基-(1※2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1※6)-β-D-吡
喃葡萄糖基] -23-羟基-羽扇豆烷-20(29)-烯-28-酸
-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯 ,命名为西南忍冬皂苷
D .3-O-[ β-D-吡喃葡萄糖基-(1※2)-β-D-吡喃葡
萄糖基]-羽扇豆烷-20(29)-烯-28-酸-28-O-[ β-D-
吡喃葡萄糖基-(1※6)-β-D-吡喃葡萄糖]酯 ,命名
为西南忍冬皂苷 E.
西南忍科冬皂苷 C 为白色粉末(甲醇),
Lieberann-Burchard 反应 、Molish 反应均呈阳性 ,
薄层酸水解色谱只检出葡萄糖.FAB-MS(m/ z):
1143[ M+Na] +.结合其核磁共振谱数据的分析 ,
化合物 1的结构如图所示.西南忍冬皂苷 D为白
色粉末(甲醇), Liebermann-Burchard反应 、Molish
反应均呈阳性 ,薄层酸水解色谱只检出葡萄糖.
FAB-MS(m/z):1143[ M +Na] +.结合其核磁共
振谱数据的分析 ,化合物 2的结构如图所示.西南
忍冬皂苷 E 为白色粉末(甲醇), Liebermann-Bur-
chard反应 、Molish反应均呈阳性 ,薄层酸水解色
谱只检出葡萄糖.FAB-MS(m/ z):1104[ M +
Na] +.结合其核磁共振谱数据的分析 ,化合物 3
的结构如图 1所示.
Fig.1　The structures of the three new saponins
R1 R2 R3
1 glu6— 1glu —glu2— 1glu CH2OH
2 glu glu2— 1glu6— 1glu CH2OH
3 glu6— 1glu glu2—1glu H
(收稿日期:2000-04-25)
193第 3 期 孙立新等:RP-HPLC 法测定板蓝根 、大青叶中靛蓝 、靛玉红的含量