全 文 :中国药业 China Pharmaceuticals ·29·
2011年第 20卷第 2期
木芙蓉根提取物的体外抑菌作用研究
曾晓芳,黄 显,游枫慧
(福建医科大学附属协和医院药学部,福建 福州 350001)
摘要:目的 比较木芙蓉根不同提取物的体外抑菌作用。方法 采用不同溶剂提取药材,用连续稀释法进行体外抑菌活性研究。结果 木芙蓉
根不同提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和表皮葡萄球菌均有一定抑制作用。结论 木芙蓉根乙酸乙酯提取物抑菌作用
最强。
关键词:木芙蓉根;提取物;抑菌作用
中图分类号:R285. 5;R282. 71 文献标识码:A 文章编号:1006 - 4931 (2011 )02 - 0029 - 02
Study on Bacteriostasis In Vitro of Extracts from Cottomrose Hibiscus Roots
Zeng Xiaofang, Huang Xian, You Fenghui
( Department of Pharmacy, Affiliated Union Hospital, Fujian Medical University, Fuzhou, Fujian, China 350001 )
Abstract:Objective To evaluate the bacteriostasis in vitro of extracts from Cottomrose Hibiscus roots. Methods The different solvents were
adopted to extract Cottomrose Hibiscus roots. The bacteriostatic activities were tested by serial dilution method. Results The different extracts
from Cottomrose Hibiscus roots had a certain inhibiting effects on the growth of Staphylococcus aureus,Escherichia coli,Pseudomonas aerugi-
nosa and Staphylococcus epidermidis. Conclusion The antibacterial activity of the extract ethyl acetate ( EtOAc ) from Cottomrose Hibiscus
roots is most powerful.
Key words: Cottomrose Hibiscus roots;extract;anti - bacterial activity
与胃癌发生密切相关 [ 5 ]。药物或胆汁逆流所致的黏膜抵抗力减低
等均可导致慢性萎缩性胃炎的发生。
本试验采用 20 mmol / L去氧胆酸钠、30%及 60%乙醇灌胃 13
周建立了慢性萎缩性胃炎大鼠模型。乙醇可直接损伤胃黏膜,引起
胃壁血液循环障碍、组织坏死脱落,造成溃疡形成 ;去氧胆酸钠模
拟胆汁反流入胃,直接破坏胃黏膜上的脂蛋白,使卵磷脂转变为溶
血卵磷脂后进一步破坏胃黏膜,引起胃壁组织破坏、炎症反应和血
液供应障碍,造成溃疡、糜烂等胃黏膜损伤 [ 2 ]。
模型对照组大鼠胃游离酸浓度明显减小,胃黏膜血流量和胃
蛋白酶活性明显降低;胃黏膜的炎症细胞浸润明显,表层上皮细胞
有坏死脱落和缺损严重;部分黏膜肌层增厚并成束深入固有膜,使
固有膜变薄,腺体数目减少并呈局灶性或片状性萎缩。与模型对照
组比较,金不换总生物碱可改善慢性胃炎大鼠体重,明显增加胃液
游离酸浓度、胃蛋白酶活性和胃黏膜血流量,并能明显减轻胃黏膜
炎症浸润和腺体萎缩,表明金不换总生物碱有治疗大鼠慢性萎缩
性胃炎的作用。
金不换为蓼科植物,又名土大黄,味苦、性寒,具有清热解毒、
消炎、破瘀生新、杀虫、活络止痛之功效 [ 6 ]。金不换富含大量生物
碱,且多种生物碱都有镇痛、镇静、消炎等作用。具有生物活性的生
物碱主要分为原小檗碱型、阿朴菲型、原阿朴菲型、吗啡型、莲花氏
烷型、苄基异喹啉型和双苄基异喹啉型等几大类 [ 7 ]。金不换总生物
碱除具有镇痛作用外 [ 8 ],本研究结果显示其还具有保护胃黏膜的
作用。金不换总生物碱可能是通过镇痛、抗炎、抗氧化、改善胃黏膜
血液循环来发挥作用。金不换除含有生物碱外,还可能含有皂苷、
内酯、油脂、强心苷等成分 [ 9 ]。除生物碱之外,金不换中发挥胃黏膜
保护作用的其他成分的作用机理有待进一步研究。
作者简介:吴丽萌(1962 -),女,副主任药师,从事临床药学与
合理用药研究; 陈健文,男,从事药物药理学研究以及新药研发,本
文通讯作者,(电子信箱)cjw1975@ 263. net。
参考文献:
[ 1 ] 朱建伟,刘 谨,李 岩,等 . 胃平胶囊对大鼠实验性慢性胃炎的保护
作用 [ J ] . 时珍国医国药,2006,17 (7 ):1 204 - 1 206.
[2 ] 翦林宏,彭志辉,陈立峰,等 . 大鼠慢性萎缩性胃炎模型的建立 [ J ] . 中
国比较医学杂志,2007,17 (3 ):161 - 164.
[3 ] 侯家玉,陈鸣宇,王 晶,等 . 芪佛胶囊对大鼠慢性萎缩性胃炎的治疗
作用 [ J ] . 中国中西医结合杂志,2003 (23 ):93 - 96.
[4 ] 姒健敏,王良静,陈淑洁,等 . 鼠慢性萎缩性胃炎胃粘膜形态特征和细
胞增殖调控因子变化研究 [ J ] . 中华消化杂志,2004 (24 ):478 - 479.
[5 ] Genta RM. Atrophy and atrophic gastritis: one step beyond and the Syd-
ney system [ J ] . Ital J Gastroenterol Hepatol,1998,30 ( Suppl 3 ) : 273 -
275.
[ 6 ] 严光俊,黄 缨,桂 壮 . 金不换冲剂治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的疗
效研究 [ J ] . 中国中西医结合消化杂志,2003,11 (6 ) : 359 - 360.
[ 7 ] 赵凤娟,徐 羽,佘东来,等 . 若干金不换生物碱抗药物依赖的药理研
究进展 [ J ] . 中国药物依赖性杂志,2010,19 (2 ) : 90 - 93.
[ 8 ] 霍佩琼,马仁强,罗 超,等 . 金不换总生物碱对小鼠的镇痛作用 [ J ] .
中国新药杂志,2008,17 (14 ) : 1 226 - 1 228.
[ 9 ] 张 洁,孙 骄,王德良,等 . 民族药金不换的生药学研究 [ J ] . 云南中
医中药杂志,2008,29 (6 ) : 67 - 69.
(收稿日期:2010 - 11 - 10 )
锦葵科木槿属植物木芙蓉(Cottomrose Hibiscus)性味微辛、凉,
具有清热解毒、消肿排脓、凉血止血之功效、内用治疗肺热咳嗽、月
经过多、白带,外用治痈肿疮疖、乳腺炎、淋巴结炎、腮腺炎、烧烫
伤、毒蛇咬伤、跌打损伤 [ 1 ]。木芙蓉在我国分布广泛,药材资源丰
富,近年来对其研究日益增多,尤其是在临床应用方面有了较大发
展 [ 2 ]。目前关于木芙蓉叶的药理作用研究较多,但尚未发现对木芙
蓉根的研究报道。本试验中,选取木芙蓉根,用不同的试剂对其进
行提取,并观察各自的抑菌效果,旨在为木芙蓉植物资源的利用与
开发提供一定的依据,报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
仪器和试剂:YXQ - LS - 50S1 型立式压力蒸汽灭菌器(上海博
迅实业有限公司医疗设备厂);DHP 2000 型电热恒温培养箱(天津
市华北实验有限公司); 水平层流净化工作台(苏州洁净技术研究
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
药物研究
·30· 中国药业 China Pharmaceuticals
2011年第 20卷第 2期
醇提取物 乙酸乙酯萃取物 正丁醇萃取物 水提取物质量浓度
(g / L)
注:A 为金黄色葡萄球菌,B 为表皮葡萄球菌,C 为铜绿假单胞菌,D 为大肠杆菌;“ +”表示细
菌生长,“ -”表示细菌不生长。
表 1 木芙蓉根各提取物抑菌作用试验结果
200. 00
100. 00
50. 00
25. 00
12. 50
6. 25
3. 13
1. 56
A
-
-
-
-
-
-
+
+
B
-
-
-
-
-
+
+
+
C
-
-
-
+
+
+
+
+
D
-
-
-
+
+
+
+
+
A
-
-
-
-
-
-
+
+
B
-
-
-
-
-
-
+
+
C
-
-
-
-
-
+
+
+
D
-
-
-
-
-
+
+
+
A
-
-
-
-
-
-
+
+
B
-
-
-
-
-
+
+
+
C
-
-
-
+
+
+
+
+
D
-
-
-
+
+
+
+
+
A
-
-
-
-
+
+
+
+
B
-
-
-
-
+
+
+
+
C
-
-
+
+
+
+
+
+
D
-
-
+
+
+
+
+
+
提取物
醇提取物
乙酸乙酯萃取物
正丁醇萃取物
水提取物
金黄色葡萄球菌
6. 25
6. 25
6. 25
25. 00
表皮葡萄球菌
12. 50
6. 25
12. 50
25. 00
铜绿假单胞菌
50. 00
12. 50
50. 00
100. 00
大肠杆菌
50. 00
12. 50
50. 00
100. 00
表 2 木芙蓉根各提取物对试验菌的 MIC值(g / L)
所制造);RE - 52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。琼脂粉
和蛋白胨(广州海洋生物有限公司);化学试剂均为国产分析纯。
药材: 木芙蓉根购自福建古田,按传统方法加工干燥后粉碎,
备用。
菌种: 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC29213、大
肠埃希菌(Escherichia coli)ATCC29523、铜绿假单胞菌(Pseudomonas
aeruginosa)ATCC27853、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)由
福建医科大学附属协和医院微生物实验室提供。
1.2 方法
1. 2. 1 营养琼脂培养基制备
按 2005 年版《中国药典(一部)》规定比例加入适量琼脂,调节
其 pH,使灭菌后 pH 为 ( 7. 2 ± 0. 2 ),在 115 ℃灭菌 30 min,无菌操
作倒入平板,培养过夜,无菌生长,备用。
1. 2. 2 菌液制备
取试管若干,装入融化的培养基灭菌后摆成斜面。在无菌条件
下用划线法将供试菌种移接入相应的斜面培养基上,每个菌种活
化多支,放入培养箱中,37 ℃下培养 18 ~ 24 h。取出,置 4 ℃冰箱中
冷藏。取出活化好的菌种,无菌操作,用适量的灭菌生理盐水洗入
已灭菌的干净试管中,根据试验的需要采用比浊法配制成含菌数
为 107 ~ 108 CFU /mL的菌悬液,备用。
1. 2. 3 供试液制备
醇提物制备:精确称取木芙蓉根粉末100. 57 g,置索氏提取器
中。用 8 倍量 70%乙醇在 85 ℃左右水浴中冷凝回流 3 h,过滤,收
集滤液。回收的滤渣用 6 倍量 70%乙醇以相同方法提取 2 次,每次
2 h,收集滤液。合并 3次收集的滤液,置旋转蒸发仪中进行浓缩,温
度控制在 65 ℃左右,浓缩至约 150 mL时将提取物移至蒸发皿,置
水浴上继续蒸发至膏状,再置干燥箱中,干燥至恒重。
萃取物制备:取一定量提取物,配制成约100 mL的混悬液,加
入石油醚除去色素、油脂等杂质。萃取多次,直到石油醚层透亮且
颜色不再变浅为止。将水相均分成 2 份,分别用乙酸乙酯、正丁醇
各萃取 3 次,每次萃取剂的用量为溶液量的 1. 5 倍。收集萃取的溶
液,置旋转蒸发仪上浓缩,浓缩至约 100 mL时移至蒸发皿,置水浴
上继续蒸发至膏状,再置干燥箱中,干燥至恒重。
水提物制备:精确称取木芙蓉根粉末100. 21 g,用 8 倍量的蒸
馏水煎煮 3 h,过滤,收集滤液。回收的滤渣用 6 倍量的蒸馏水煎煮
2 次,每次 2 h,收集滤液。合并 3 次收集的滤液,置旋转蒸发仪中进
行浓缩,浓缩至约 150 mL 时将提取物移至蒸发皿,置水浴上继续
蒸发至膏状,再置干燥箱中,干燥至恒重。
供试液制备:取适量木芙蓉根乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正
丁醇萃取物及水提物,用灭菌注射用水配制成含生药 1 g /mL的溶
液,灭菌备用。临用前再用灭菌注射用水稀释成质量浓度为 1 000,
500,250,125,62. 5,31. 25,15. 62,7. 81 g / L的溶液。
1. 2. 4 抑菌试验 [3 - 4 ]
吸取上述各种药物溶液 3 mL,置无菌平皿中。将营养琼脂培
养基加热融化,加入 12 mL 培养基于无菌平皿中迅速混匀、冷却,
制成含不同质量浓
度药物(200,100,
50,25,12. 5,6. 25,
3. 125,1. 562 g / L)
的营养琼脂平板,
用笔将药物平板分
为 4个区,分别用接
种环将上述试验菌点种于药物平板上,于 37 ℃恒温培养 16 ~ 18 h。
以不加提取物溶液的培养基为阴性对照。以每种药物对 4 种菌分
别做 3 次重复试验。观察药物对测试菌生长的抑制作用,记录最低
抑菌浓度(MIC)值。
2 结果
结果见表 1 及表 2。
3 讨论
固体培养基连续稀释法可同时测定大批菌株的 MIC,且不受
药物颜色及混浊度的影响,适合于中药制剂体外抗菌活性测定。
本试验提取所得的药液为颜色较深的中草药制剂,若采用试
管法则会因溶液颜色深而导致观察结果不准确,若采用滤纸片法
则会因中草药扩散慢、抑菌作用弱而无法得到准确的抑菌质量浓
度。为避免这些缺陷,因此,本试验利用平板法。平板法稳定,比较
适合于中草药抑菌浓度的测定,但其缺点是无法测定提取物的最
低杀菌浓度(MBC)。
本研究结果显示,木芙蓉根提取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡
萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌都有一定的抑制作用;木芙蓉
根醇提取物和各萃取物对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的抑制
作用均优于铜绿假单胞菌和大肠埃希菌,且在药物质量浓度相同
时,木芙蓉根乙酸乙酯萃取物对上述 4 种细菌的抑制作用最强,木
芙蓉乙醇提取物与木芙蓉根正丁醇萃取物的抑菌作用相似,而木
芙蓉根水提物的抑菌作用最弱。
作者简介:曾晓芳 ( 1975 - ),女,福建古田人,主管药师,硕士
研究生,从事临床药学工作,(电子信箱)zxfadr@ 126. com。
参考文献:
[ 1 ] 中华人民共和国卫生部药典委员会 . 中华人民共和国卫生部药品标准·中
药材(第 1 册)[M ] . 广州:广东科学技术出版社,1992:16.
[ 2 ] 黄初贵,雷秀霞 . 木芙蓉软膏治疗疖、痈 539 例疗效观察 [ J ] . 中草药,
1987,18 (5 ):10.
[ 3 ] 边才苗 . 白花蛇舌草提取物的抑菌作用研究 [ J ] . 时珍国医国药,
2005,16(10):991.
[ 4 ] 蔡宏亚,王泽平,何宁先,等 . 连续稀释法研究淡红忍冬体外抑菌作
用 [ J ] . 临床和实验医学杂志,2007,6(9):155.
(收稿日期:2010 - 01 - 14 )
药物研究
本栏目由
协 办
重庆药友制药有限责任公司