全 文 ：西北林学院学报 2( X )3, 1 5 (4 ) : 89 一 9 -
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核桃叶抑菌成分的提取及其抑菌活性
翟梅枝 , ,2 , 李晓明’ , 林奇英` , 谢联辉
( 1
. 福建农林大学 植物病毒所 , 福建 福州 3 50 X() 2 汉 . 西北农林科技大学 林学院 ,陕西杨艘 71 21 0
3
. 西北农林科技大学 资源与环境学院 ,陕西 杨陵 71 21 加 )
摘 要 :对核桃叶 乙醉提取物和其不同溶剂苹取部分及层析组分进行抑菌试验 , 结果显示 : 乙
醉提取物和 乙酸乙醋革取物对金黄色菊萄球菌 、枯草芽艳杆菌 、蜡状芽袍杆菌 、 大肠杆菌和 黑
根霉有较强 的抑制作 用 。 且乙醉提取物的抑菌作用随浓度增 大而增强 。 不同浓度处理时 ,提
取物对金黄色菊萄球菌 、枯草芽艳杆菌和黑根霉的抑菌作用均达差异极显著水平 ,时蜡状芽艳
杆菌的抑菌作用差异显著 。 结果还显示 : 同一浓度提取物对不 同细菌的抑菌作用 亦不同 。
关钻询 : 核桃叶 ;提取物 ;抑菌活性
中圈分类号 : 57 92 . 13 0 . 8 文献标识码 : A 文章编号 :l 0 1一4 61 ( 20 3) 以戒X)8 9习 3
Ex tr a c t of In h ib i t in g C o m op s i t ion an d Ihn ib i t
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.
K e y 研lo n 如 : w山 u t lea v e s ; e x tr a e t ; in h ib i ot 理 a e it v iyt
随着生活水平和文化素养的提高 ,人们的保健
意识逐渐增强 ,对天然无公害 、无污染产品的需求越
来越多 , 为了满足这种需要 , 国内外学者对天然产物
提取成分在抗菌 、 抑菌方面作了许多工作 〔’ 一 ’ l ,从资
源丰富的植物中寻找高效 、低毒的杀菌 、 抑菌成分 ,
并由此开发无公害植物源杀菌剂 , 已成为该研究领
域的方向和热点 。
核桃口咭勿。 egr 她 . )L 是我国分布较广的重要
树种 ,其青果皮 、枝条可药用 ,具有杀菌 、消炎 、抗癌
等作用 [’, 5 1。 据分析 , 核桃叶内含有胡桃醒 、 胡桃
贰 、柠株烯 、 没食子酸 及油酸等多种生物化学成
分 6t] , 核桃叶提取物的杀虫活性 t ’ ]和抗油脂氧化作
用工’ ]已有报道 。 为了更全面地了解核桃叶提取物
的多方面活性 , 笔者对其进行了抑菌试验研究 ,希望
从中寻找到抗菌活性物质 , 为核桃叶资源的多途径
开发找到新的出路 。
1 材料和方法
1
.
1 材料
供试细菌 : 金黄色葡萄球菌 (凡叩人了阮哪。 a ,
er 。 ) ; 枯草芽抱杆菌 (刀配边。 ,动椒臼 ) ; 蜡状芽抱杆
菌 ( B . cer 。 ) ;大肠杆菌 (凡亡加叮众加 a col i
.
)
。
供试真菌 : 青霉 ( eP 硫说`um sP . ) ;毛霉 (材此份
sP
.
) ;黑根霉 ( hR 众o p。 , . ) 。
收摘日期 : 2以 )3扳 -24` 全项目· :福建省科技厅重点项目 ( 9 一 Z一 193 )
作音简介 :租梅枝 ( 1% 3 一 ) ,女 ,河南西平人 ,副教授 ,在读博士生 . 研究方向 :植物病理学 ;林奇英为通讯作者。
西北林学院学报 18卷
供试菌种均由西北农林科技大学资源与环境学
院微生物实验室提供 。
方法
待测样品的制备 以 7 0 %乙醇为提取溶
剂 , 回流提取 3 次 ( s h* 3 h一争 Z h ) ,合并提取液减压
浓缩至浸膏状 , 留少部分醇提物稀释后直接用于抑
菌试验 ; 剩余部分依次用乙醚 、 乙酸乙醋和正丁醇萃
取 ,各萃取液回收溶剂后得相应萃取物及萃余水相 。
取一定量的乙酸乙醋萃取物进行聚酞胺柱层析 , 水
洗脱后 ,直接以 95 % 乙醇洗脱 , 收集醇洗脱液并浓
缩至干 .得总黄酮组分 。
供抑菌试验的待测样品见表 l 。
表 1 待测样品及绷号
几 b le I T阮 n u m阮 r 明 d *喊ed s抑p les
编 号 待测样品
A 核桃叶 70 % 乙醇提取物
A 一 } A样乙醚萃取物
A 一 Z A 样乙酸乙醋峨取物
A 一 3 A 样正丁醇萃取物
A 一 4 A 样萃余水相
R 总黄酮组分
宁卜 l ) A 样品测试 4 个浓度 , 以无苗水稀释至 10 , 50 , 2 5 , 12 . 5
m了耐 . , 以尤菌水作对照 ; 2 ) B 样及各萃取物样品 以 二 甲亚矾助溶
( A 一 4 除外 ) ,测试浓度 2 5 m岁m L , 以二甲亚矾作对照 。
1
.
2
.
2 菌悬液的制备 欲先将供试菌种用适宜的
培养基进行活化 ,量取 10 m L 无菌水于试管中 ,然后
用接种环磨擦培养基表面 ,取出接种环 ,将菌苔放人
无菌水中 , 充分振荡摇匀 ,得菌悬液 。
1
.
2
.
3 抑菌实验 采用滤纸片法 ,将已灭菌培养基
(细菌培养用牛 肉膏蛋白脉琼脂培养基 , 真菌培养
用马铃薯琼脂培养基 )冷却至 45 一 50 ℃ , 在无菌条
件下 ,将其倒人培养皿中 , 每皿 10 m L 左右 , 冷却后
每皿加人菌悬液 1 m L , 用刮铲涂抹均匀 , 然后取灭
菌的圆片滤纸 ( d = 13 m m ) , 分别浸渍提取液 30 5 后
取出 ,滤干药液后贴 于琼脂平板上 一 ,每皿放置 3 片 ,
各纸片间的距离均等 , 每一样品重复 3 次 ,将细菌置
28℃恒温箱中培养 24 h , 真菌置 2 8℃培养 7 2 h , 用
!
·字交叉法测量抑菌圈直径 , 取其平均值作为试验
结果 。
2 结果与分析
2
.
1 核桃叶不同提取物抑菌活性比较
由表 2 的抑菌结果可以看出 : ( 1 ) 6 个提取物样
况,中 A 和 A 一 2 对供试菌种 中的金黄色葡萄球菌 、
枯草芽抱杆菌 、蜡状芽抱杆菌 、 大肠杆菌和黑根霉 5
个菌种有较强的抑制作用 . 而 A 一 1 、 A 一 3 和 B 二个
裹 2 核挑叶提取物抑苗结果
1袖 le 2 B a e et ir 朋比比 1. 花阳 l t s Of th e , a lun t le va 。 以佗介 . t
样品编号 5 . 。 B . 5 B . e E . e p , 叩 M u · 叩 p卜. 叩
A + + 十 十 + + + 十 + 十 十 + 一 ~ + + +
A ~ ! + + 十 十 + 十 + 一 一 十
A 一 2 + + + + + + + + + + + 一 ~ + + +
A 一 3 + + + + + + 一 一 + +
A 一 4 十 一 + 一 一 一 一
B + + + + + + + + 一 一 + +
注 : 1) 一 : 无抑曲 ; + : d < 巧 . 0 m m ; + 十 : d 二 15 . 0 一 20 . 0 m m ; +
+ + : ` > 20 . 0 ~
。
2) 5
. 。 金黄色葡萄球菌 ; B . 。 枯草芽抱杆菌 ;
B
. 。 蜡状芽抱杆菌 ; E一 大肠杆菌 ; P . 叩 青霉 ; Mu . sP 毛盆 : 外 , 叩
黑根霉 。 3 )人样的药液浓度 l o m了 m L , 其它样品的药液浓度 2 5
m岁 m L 。
样品对 4 种细菌和真菌中的黑根霉有不同程度的抑
菌作用 。 说明核桃叶 70 % 乙醇提取物和其乙酸乙
醋萃取物含有活性较高的抑菌成分 。 ( 2 ) A 一 4 样
除对金黄色葡萄球菌和蜡状芽抱杆菌有微弱的抑菌
作用外 , 对其它 5 个供试菌无抑菌作用 。 这说明
70 % 乙醇提取物经乙醚 、 乙酸乙酷和正丁醇萃取后 ,
剩余水相中抑菌活性成分含量已相对较少 ,因而表
现出较弱的抑菌作用或无作用 。 ( 3 ) 6 个样品对供
试真菌中的青霉和毛霉均无抑制作用 。 ( 4 ) A 一 2
样经柱层析得到的黄酮组分 ( B ) , 其抑菌作用从总
体上看较强 ,但不如 A 一 2 。 可能因 A 一 2 中的抗菌
活性物质种类多 ,成分间有协同增效作用所致 。
2
.
2 不同浓度的醉提物对细菌的抑苗效果
以醇提物的不同浓度进行抑菌活性试验 , 由表
3 可看出 : ( l) 同一浓度醇提物对不同细菌的抑制作
裹 3 不同浓度醉提物的抑苗效果
毛山】e 3 B ac t酬璐at8 拍 e压咒 t of ht e id 玉er n t c叨 e e n t n吐 ion e x知即 t
处理 B . 。 5 . a B一 E . 。 外 . 叩
A : 25
.
10 乃 . 5 7 2 3 . 5 7 2 1 . 83 26 . 8()
AZ 2 3
.
17 24
.
40 2 2
.
5 0 17 9 3 24
.
47
A 3 1 9
.
3 0 2 0
.
X() 2 1
,
5 5 一 一9 . 20
A; 19
.
0 3 19
. 的 17 . 27 一 , 6 . 30
· : 人一 A。各处理浓度 ( m g . m l一 ’ )为 : 10 , 50 , 25 , 12 . 5
用不同。 A : 和 A : 两处理对 4 种细菌的抑制作用顺
序一致 。 即 :金黄色葡萄球菌 > 枯草芽抱杆菌 > 蜡
状芽抱杆菌 > 大肠杆菌 ; A 3 和 A ; 对大肠杆菌均无
抑菌作用 ,但对其它 3 种细菌的抑菌作用大小顺序
恰好相反 , A 3 处理为 : 蜡状芽抱杆菌 > 金黄色葡萄
球菌 > 枯草芽抱杆菌 ; A 。 处理为 : 枯草芽抱杆菌 >
金黄色葡萄球菌 > 蜡状芽抱杆菌 。 对不同浓度 、不
同菌种抑菌效果进行方差分析后得知 : 凡 ; 二 巧 . 83
* * , F 。 二 9 . 4 * *
,凡 = 2 . 04 ,凡 二 L 34 ,而 0F 。 ,
:8
.
02
,
OF
. 。 二 5 . 14 。 说明了 A , 、 A Z两处理对菌种
2,
-
第 4期 翟梅枝 等 核桃叶抑菌成分的提取及其抑菌活性
对其它供试菌无作用 。
核桃叶醇提物对供试细菌和黑根霉 (真菌 )的
抑菌作用随浓度增大而增强 。 不同浓度处理对金黄
色葡萄球菌 、枯草芽抱杆菌和黑根霉的抑菌作用达
差异极显著水平 ,对蜡状芽抱杆菌的抑菌作用差异
显著 ;同一浓度处理对不同细菌的抑菌作用亦不同 ,
A ,
、
A Z两处理对菌种间抑菌效果的影响达到极显著
水平 ; A 3 与 A` 两处理则无显著差异 。
由此可见 ,核桃叶提取物具有较好的抑菌活性 ,
开发利用前景广阔 。 活性成分的确定和分离筛选工
作正在进一步研究中 。
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.
间抑菌效果的影响达到极显著水平 ; A 3 、 A 4 两处理
对菌种间抑菌效果的影响无显著差异 。
( 2 ) 不同浓度醇提物对同种细菌的抑制作用大
小为 : A . > A : 》 A 3 > A 4 , 均呈现浓度越大 ,抑菌作用
越强的趋势 。 对各菌种不同浓度处理后 , 抑菌效果
进行方差分析 ,结果表明 : 1 ) F 枯 二 13 . 5 ” > 0F 。 ,
( 8
·
0 2 ) ; F 金 二 2 9
·
4 8 ” > .oF 。 , ( 8· 0 2 ) ; F蜻 二 7 · 7 2 ’
> OF
.
os “ . 26 ) 。 即不同浓度提取物对枯草芽抱杆
菌 、金黄色葡萄球菌的抑菌作用存在极显著差异 ;对
蜡状芽抱杆菌的抑菌作用差异显著 。
2
.
3 不同浓度的醉提物对真菌 (黑 . )的抑菌效果
从表 3 直观分析可知 :随着浓度的增大 ,提取物
对黑霉的抑菌作用逐渐增强 。 对不同浓度提取物的
抑菌效果进行方差分析后知 : F 二 98 . 68 ” > OF . 。 ,
( 8
.
02 )
,由此说明不同浓度处理对黑根霉抑菌效果
存在极显著差异 。 多重 比较显示 : A , 、 A Z 、 A , 与 A `
处理间抑菌效果均达到极显著水平 ; A、与 A 3 处理
间抑菌效果存在显著差异 ,其它处理间差异不显著 。
A ,
、
A: 两处理对菌种间抑菌效果的影响达到极显著
水平 。
3 结论
6 种核桃叶提取物样品中乙醇提取物和乙酸乙
醋萃取物对供试的 4 种细菌和黑根霉 (真菌 )有较
强的抑制作用 ; 乙醚萃取物 、 正丁醇萃取物和黄酮组
分对这 5 种菌有不同程度 的抑制作用 ;萃余水相仅
对金黄色葡萄球菌 、蜡状芽抱杆菌有微弱抑菌作用 ,
(上接第 80 页 )
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