全 文 ：烟 台大学学报 (自然科学与工程版 )
] 9 95年第 4期 Jo u rd n !o f Ya nt di U l ;i ve r、 i t y( N、 :t u d rlS ci e e e a l rnd En gi e e n ri n g )N o.4 ] 5 9 9
罗氏海盘车海星皂贰的提取分离
及其分析鉴定
郭承华 贫凤 丽 ` 李长华 `
(烟 台大学 )
摘要 用 甲醉提取法和 乙 醉提取法从 罗氏海盘车提取 了海星总皂戒 , 其产率分
别 为 0 . 09 % 和 0 . 1 % 。 产品经 理化实验 、 溶血 实验及紫外和 红外光谱分析鉴定 ,
证 明提取物为海星总皂贰 ; 总皂贰经 薄层层析及柱层析分离出五种 主要组分 , 其
中两种 初 步断 明 为海 星皂贰 A (拓 . 、 一 24 4n m ) 和海星皂贰 B (拓 a 、 一 2 30 n m ) 。 六月
份从黄海 潮下 带 采集的 罗氏海盘车其体壁 、 胃 、 幽 门 盲丈及生殖腺 皆含有海星皂
贰 . 其中 以体壁含量最高 ( H . 1. / g 组 织为 6 . 7 1 ) 。
关键词 罗氏海盘车 海星皂贰
0 引 言
罗氏海盘车 ( A s妙 uI 、 、 le s ot 。 乙)在黄海有 大量分布 , 对海星资源的开发利用是一个很有
研究价值的问题川 。 从海星体内可提取的生物活性物质很多 ,其中海星皂贰是可发展成为实
用药物的一种重要活性物质「’ 」, 应用前景广阔 。 自 H as hi m ot 。 和 Y as u m o ot[ 3 〕最初发现海星的
水提取物中存在着几种有毒的皂贰 . 并对其结构 和物化性 质进行 了测定以来 , 国外许多学
者 〔` 一 ’ “ 〕对生活在不同海域的数 十种海星及其皂贰的 化学结构 、 药理 、 毒理作用等进行了大
量的研究 。 我们对分布在黄海海域罗氏海盘车的海星皂贰进行 了提取制备及皂贰在海星体
内不同组织分布的研究 。
1 材料与方法
罗氏海盘车 , 1 9 9 4 年 3一 6 月采 自烟台潮下带 。
1
.
1 海星皂试的提取方法
取冰冻贮备的海星粉碎混匀 ,分别称取 5 0叱 材料同时分别用甲醇和 85 %的乙醇提取
( 图 l ) , 从下列几方面对 H a s h i m o t o 和 Y a s u m o t o 的方法 [ ’ ]加以改进 : (一)将两次脱脂过程合为
一 次 , 时间为 20 h ; ( 2) 浓缩液可不经静 止过夜直接 用苯进行 脱脂处理 ; ( 3 ) 利用 透析膜
v( isk i
n g co
,
2 7 / 3 2) 透析除去无机盐 、 单糖 、 双糖等杂质 , 达到分离纯 化的 目的 。
收稿 日期 : 1 9 9 4一 09一 2 1
, 烟 台大学生化系九四 届毕业生 。
DOI : 10. 13951 /j . cnki . 37 -1213 /n. 1995. 04. 004
烟 台大学学报 ( 自然 科学与工程版 ) 19 9 5年
冰
冻 川 厂残渣
盆空沐 绪` 提取液— 浓缩液 ( ) 1— 竺望 1竺浓缩液 竺竺 厂积 二 二 侧 匕上清液剧层丁水正。一
层苯水
海星
羹
图 1海星皂试的提取方法
(l ) 粉悴成浆状 ,室沮下用甲醉 (甲醉提取法 )或 85 %的乙 醉 ( 乙阵提取法 )提取三 次 .
(幻真空浓缩后 , 先用 0 . ] m o l/ L H cl 将水层的 p H 值调节到 3 . 0( 用 。 . l m o l/ L N a以 { 中 和 ) , 再用流动的 白来水透析 6h ,透 析液用正 丁
醉提取 3 次 .
工. 2 海星皂试的分析鉴定
对提取的海星总皂贰产品分别进行理 化实验 、 溶血实验及紫外和红外光谱分析鉴定 。
1
.
2
.
1 溶血实验 按 F u j ita 和 N is h i m o t o 方法 〔川进行 . 同时以标准皂贰 ( s e r v a 进 口分装 ) 的
溶血指数 ( he m ol yt ic i n d ex , H . 1. )作参考 , 海星皂贰的含量及纯度以每克试样溶血指数 ( H .
1
.
/ g )表示 。
1
.
2
.
2 侮星皂贰的薄层层析 硅胶 G 薄层板 ; 展开剂 : 正丁醇 一异戊醇 一水 (2 : 1 : 1 ) ; 显色剂 :
磷钨酸乙醇溶液 ;薄层板于 1 10 ℃干燥箱烘干后观察 。
1
.
2
.
3 柱层析帅〕 将 0 . 2 5 9 海星皂贰产品溶解于 0 . 5ml 水中 ,与 0 . 59 硅藻土 ( u v ict 。 进 口
分装 )混合 ,将混合物悬浮于少量的含水正丁醇中 , 置于 1 09 硅藻土与 1 0ml 水制备的 1 . s x
2 c0 m 的柱上 , 用水饱和 的正丁醇洗脱级分 , 流速 s x 1o 一 `~ 2只 1 -0 ` L/ im n ,每管收集 s ml 洗
脱液 ,用 5 3w 分光光度计进行紫外光谱测定 。
2 结果和讨论
2
.
1 甲醇提取法与乙醉提取法的海星皂试产率及含量的比较
表 1 甲醉提取各步骤产量及回收率 .
1 11 111 I V
甲醉提取液 苯脱脂后水层 正丁醇提取液 海星总皂贰
固体重量 / 9 1 9 . 2 8 5 6 5 . 1 5 8 7 2 . 1 5 2 8 0 . 4 5 8 2
H
.
1
.
/ g 固体 3 1 7 5 3 5 7 1 7 5 19 1 8 5 6 7
总 H . 1 . 6 1 2 3 2 18 4 2 2 ] 6 18 7 8 5 0 7
各步回收率 ( % ) 1 0 0 3 0 . 1 2 6 . 4 ] 3· 9
, 将第 l 步总溶血指数定为 1 0 % , 其它各步 回收率为其总溶血指数与第 l 步总溶血指数相比所得结果 。
表 2 乙醉提取各步骤产量及回收率 ’
1 11 111 I V
甲醇提取液 苯脱脂后水层 正丁醉提取液 海星总皂贰
固体重量 / 9 3 5 . 5 0 一 5 0 一 3 9 6 1 0 . 5 4 0 1
H
.
1
.
/ g 固体 8 1 6 2 6 6 6 7 9 3 6 9 0 4 9
总 l : 1. 2 8 9 6 8 1 1 9 9 7 1 1 0 7 9 4 8 8 7
各步回收率 ( % ) 2 0 0 一1 . 4 3 8 . 2 ] 6 . 9
表 1 、 2 中结果为两次实验的平均 f亡〔, 际准皂俄平均 H . 1. / g 为 2 8 5 71 , 所用材料为 5 0 09
4期 郭承华等 :罗氏海盘车海星皂戒的提取分离及其分析鉴定 · 1 5·
冰冻海星 。 , 回收率计算同表 1 。
由表 1 、 表 2 可以看出 , 同样条件下 ,用 乙醇提取法海星皂贰的回收率 (l 6 . 9% ) 高于 甲
醇提取法 ( 13 . 9% ) , 但从海星皂贰的纯度看 , 后者却高于前者 , 这与海星皂贰各组分在甲醇
和含水乙醇中的溶解度有关 2[] 。 由表 l 、 表 2 各步骤的回收率可以看出 ,苯脱脂及丙酮沉淀
等过程应为海星皂贰提取制备的关键条件 ,海星皂贰提取条件的优化选择有待进一步研究 。
2
.
2 罗氏海盘车各组织的皂试分布
表 只 罗氏海盘左不同组织 的皂试含量
材料重蜻 / g 恶 健 已兄 成 / 9 H . 且. / g 皂试 总 “ . 1 . 日 . 1. / g 组织
才刀丈壁 1门` 1 0 . 0几0又 1 3 3 3 3 6 7 1 6 . 7 1
胃 即 , . , . ’ 之 ’ 1 9 3从 1 17 3 . 5苏
生殖腺 1 0 0 . 0 16 0 1 6 6 7 2 7 2 . 6 7
幽门盲龚 9 1 0 . 0 1 3 3 9 5 2 4 1 2 7 1 . J 0
取 18 个 6 月份采集的新鲜海星 , 分别剪取 各组织 ,用甲醇提取法提取 ,标准皂贰 H . 1. / g
为 2 5 5 7一。
从表 3 可以看出 . 六月份罗氏海盘车各组织皂贰含量不同 ,其中体壁皂贰含量最高 , 胃
次之 .幽门盲囊含量最低 。 这与 日本产多棘海盘车 ( 4 5妙 il( 、 “ !I 。二昭`、 )各组织海星皂贰含量不
同 L” 1 ,黄海产罗氏海盘车各组织海星皂试含量的差异进一步说明海星皂贰的分布与海星种
类 、 地理分布及季节变化有关 。
2
.
3 海星总皂试及其各组分 朋步分离后的测定结果
海星总皂贰呈淡黄色 , 微有粘性 , 其水溶液振荡时产生持久的泡沫反应 . 微量的皂贰 即
能使家免血液产生溶血作用 : 该品溶于水 、 甲醇 、 含水 乙醇及 正丁醇 , 不溶于茉 、 醚 、 丙酮等有
机 溶剂 , 烙 点为 1 86 一 1 90 ` C 。 经 u 一 3 4 0 0 紫外 川 见 近红外分光光度计测 定 , 其水 溶液在
2 2 4 n m 处有一弱的紫外特征吸收峰 (图 2 ) , 通过 IR 一 8 10 红外分光光度计测得 的红外光谱观
察 , 样品与标准皂贰在 3一S Oe m 一 ’ 、 2 3 7 5 e m 一 ’ 、 1 6 5 0 e m 一 ’ 、 1 0 8 Oe m 一 ’ 、 8 0 Oe m 一 ’均有相似 峰形 的
吸收峰 ,符合文献规定 · ’ 2 ! . 如图 3 。
ǎ味à翻众孚督冲
2
.
00
淤g
… 岁
。.0
400
.
350 0
.
30
.
250
.
20
.
人/unI
图 2 紫外吸收图谱
。 . 标准 皂贰 ; b . 海星 偿. 皂硫 祥品
3 0 0 0 2 0 0 0 1 5 00 1 0 0 0 4 0 0
,
c/ m
一 ,
图 3 红外吸收图谱
:
. 际准 仑贰 ; b . 海星 总皂试 洋品
·
6 1
· 炯 台大学学报 (日然抖学与工 程版 ) 19 9 5年
海星总皂俄经薄层层析初步分离出 5个组分 (图 4), 其 fR 值分别为 0 . 2 1 、 0 . 5 8 、 0 . 60 、
0
.
6 9
、
0
.
7 4
, 产品经柱层析收集 5 管洗脱液 ,分别测 各管紫外吸收值 ,结果仅第 l 管与第 2 管
有紫外吸收峰 ,分别位于 2 4 4 n m 和 2 3 On m ( 图 5 ) . 其它各管洗脱液未测到紫外吸收峰 。 将第
1
、
2 管样液进行薄层层析 , 其 R f 值分别为 0 . 58 和 0 . 6 0 , 与海星总皂俄中的两种主要组分的
R f 值一致 (图 」 ) 。
L”了
卜月
1
..w`e
l
胜`二八Uù”
:
,ù,里
男式
应立剑 0 12 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0久厂n r n
图 4 薄层层析图谱
川起始海星总皂贰产品
( 2) 柱层 析后第 1 管样品 (组分 l)
( 3) 住层析后第 2 管 样品 (组分 1”
图 5 紫外吸收图谱 (水饱和正丁醉中 )
a . 组分 l( 海星皂贰 A )
b
. 组分 1 (海星皂贰 u)
从海星总皂贰及其初步分离后主要组分的紫外吸收图谱和薄层层析图谱观察 ,海星总
皂 贰 由混 合组 分 组 成 。 初步 分 离 后所 得 的两 种 主要组 分 可初 步判 明为海 星 皂 贰 A
( a s t
e r o s a卯 n i n A ) ’ 2 ]和海星皂贰 B ( a s t e r os a卯 n i n B ) [川 , 其它几种组分有待于进一步鉴定 。 通
过 比较海星总皂贰与标准皂贰的红外吸收图谱 , 可确定罗氏海盘车海星皂贰与标准皂贰存
在有相似的结构 。
致射 :本工作承蒙陆瑶 华教授的指导 , 荆济荣 、 赵岩 、 林彩玲 、 吕建刚等老师给予大力帮助 , 最后 经陆瑶
华教授审阅 , 特此致谢 。
参 考 文 献
1 郭承华 . 海星资源的开发利用 . 生物学通报 , 1 989 ; ( 1 1 ) : 7
2 巴斯洛 . M H 著 , 林泰湛等译 . 海洋药物学 . 海洋出版社 , 1 9 85 : 2 3 2一 2 5 9
3 日a 、 h i n l o t o y , Y d 、 u ; 】,o 一。 ’ F . B u l l J : . p s戊 S e i F : 、 h , 1 9 6 0 ; 2 6 ( 1 1 ) : 1 1 3 2
4 F r i e 、 s S L
,
D u r : , x l r R C
.
T o x
,e o ] 入 p p l l ) h : : r l l l : , e o ] , 1 9 6 5 ; ( 7 ) : 3 7 3
5 R i o G J
.
R u 朋 ie r i G D . S l e n l p ie n 卜I F e t : t l . 入 n z e r Z o l , 1 9 6 3 ; ( 3 ) : 5 5 4
6 S h im i z u Y
.
E x pe r i e n t i J
,
19 7 1 ; ( 2 7 )
:
1 1 8 8
7 M i
n : 一l e L
.
P i z劝 C . R i e e i o R e r : 11 . J N : . r P r浏 . 1 9 8 3 ; 4 7 ( 3 ) : 5 5 8
8 1
了1 Jl d l ;* 》· J 气 , J : .父 Jd 人1 . B L一r ll c l l D J c t ` I ] . C ` t , 1 J C l飞e l l l , 1 9 8 7 ; 6 5 ( 6 ) : 1 3 8 4
g K : 一p u s t jn 之, 1 1
.
K h i n 一 P r i r S o e。一l门 ( I ’ : , 、 }I k ) , 1 9 8 8 ; 0 ( 2 〕 : 2 5 0
1 0 2 0 110 1
了 .
1
: l x一:: r , l o r e E , 卜1; . r [一 e e ]0 C e t : t l . J N : , r l’ r 、 司 , 1 9 9 0 ; 5 3 (
一
} )
:
1 0 0 0
4期 郭承华等 :罗氏海盘车海星皂式 划 提取 分离及其分析鉴定 · 1 7·
1 l Fu ji taM
.
Y a su m o to
N i s hin l o toK
.
J P ha r1 nS又
T 2 HJ s hi n l o toY
.
Agr Bi ol
J ::阳 门 , 1 9 5 2 ; ( 7 2 ) : 16 4 5
C h e n l
,
1 9 6 5 ; 2 , ( 9 )
:
8 0 4
1 3 Y a s u n l o ! o
1 4 Y日 s u n l o ! o
T找 n a k a
.
M } { a s h in , o , 0 Y
.
B L」l l J 找 p 凡尤 反 , f i、卜一 , 1 9 6 6 : 3 2 ( 8 ) : 6 7 3
T
, 卜一`, 5 1一i r一 。 r o 丫 . A g r B i o 1 C }一e 一, ] , 1 9 6 7 ; ( 3 1 ) : 3 6 8
E x t r a e t i o n
,
I s o l a t i o n
,
a n d I d e n t i f i e a t i o n o f A s t e r o s a P o n in
f r o r n A s l c r i
` , 5 r o l l c s l o n 诬
G u o C ll e r l g lz一二a H e F e n g li L i C h a n g ll u a
( Y J n r: l一 L J n一v e r、 l r y )
A b s t r . e t A s t e r哪 OP n i n f r o m 4 、 乙`甲 ; ` ,习 r 口 lle `勿 I, ` e o l l e e t e d a t t h e e o a s t o f Y a n t a i 15 P r e P a r e d b y
e x t r a e t io n w i一h m e t h a n o l a n d e t h a n o l . l ’ h e y ie ld s a r e 0 . 4 6 9 a n d 0 . 5 4 9 r e s洋 e t iv e l y f r o m 5 0 09 w e t
m a t e r i
a l
.
D a ra o f r h
e Ph y s ie a l a ll d e h e n l i e a l t es t s
,
h e m o l y t i e t e s t
, u l t r a v io l e t a n d i n f r a r e d s pe
e t r u r n
a n a ly s es s h o w r h a t th e e x t r a e t s 15 a s t e r眺a P o n i n . F i v e m a i n e o n 1 P o n e n t s a r e is o la t e d f r o m t h e
a s t e r o 、 a po
n i n a f t e r t h 又n la y e r a n d 5 11一e a g e l e o l u m n e h r o m a r o g r a Ph y . T w o o f t h e m a r e id e rl t if ie d t o
be a
s t e r o s a P o n in A w i t h a n
u lt r a v i
o le t a b s o r P t io n p ea k a t 2 4 4 n
n 、 , a n d a s re r
osa
P o n i r 1 B
, a t 2 3 On m
.
1
’
h e b od y w
a l l
, s t o m
a e h
.
P y lo r i e e a e ca
a n d g o n a d s o f th e s t a r f i s h e o l l e e t e d i n J u n e 19 9 4 a t
H
u a n幼 a i e o n t a i n a s t e r o 、 a OP n l n . 『r h e e o , l t e n t i n b浏 y w a ll 15 th e h i g h es t . l t s t o at l h e m o ly t i e i n d e x 15
6
.
7 I H
.
1
.
/ .g
K e y W o r d s 月人八, 、 i 矛`月 r 。 ) lle 泞 to , 11 . A s t e r o sa po n i n
.
(责任编辑 苏晓东 )
(上接 第 78 页 )
N e t一t r o n I n t e n s i t y M e a s
t一r e l n e n t o f t h e M o d e l
C T Z
一
1 0 0 N e t一t r o n G e n c r a t o r
W
a n g Q ix i
n
( N 一 c l护 o r飞一c l`一b o r j t o r y o f 丫 J ]l t j i T e j c h e r 、 C o j l护 g e )
A b s t r a e t N e u t r o n i n t e n s l t y m ea s
u r e m
e n t o f t h e n 、 od
e l C r Z
一
1 0 0 N e u t r o n g e n e r a t o r a r e i n t r od
u e e d
.
K e y W o r d s N e u t r o n i n 一e n s it y . M e a s u r e n l e n t .
(责任编辑 苏晓东 )