全 文 ：收稿日期:2010-06-05; 修订日期:2010-10-27
基金项目:江苏省公益研究项目(No． BM2006104)
作者简介:朱玲英(1953-) ，女(汉族) ，上海人，现任江苏省中医药研究院
副主任技师，主要从事中药分析工作．
凤仙透骨草药材高效液相指纹图谱研究
朱玲英，钱士辉，沈 红，陈秀梅
(江苏省中医药研究院，江苏 南京 210028)
摘要:目的 研究建立凤仙透骨草 HPLC指纹图谱分析方法，为其质量控制和药材鉴别提供依据。方法 利用高效液相色
谱法，采用反相 Alltima C18柱 (4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相:甲醇和 0． 1%冰乙酸溶液(梯度洗脱) ;检测波长:300
nm;柱温:35℃;流速:1． 0 ml /min。进样体积 20 μl。结果 在选定的色谱条件下确定 12 个共有峰构成凤仙透骨草药材的
指纹特征，各批次药材均具有上述特征，但特征峰的相对含量分布差异导致色谱概貌存在一定差异。确定了凤仙透骨草
药材 HPLC 中原儿茶酸、东莨菪素两个成分所对应的保留时间一致;不同产地 12 个批次的凤仙透骨草药材 HPLC 指纹图
谱共有峰相似性较好。结论 该方法准确、简单、稳定，其色谱指纹图谱可用于凤仙透骨草的鉴别和质量控制。
关键词:凤仙透骨草; 指纹图谱; 高效液相法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 06． 076
中图分类号:R284． 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)06-1444-02
凤仙透骨草为凤仙花科植物凤仙花 lmpatiens balsumina L．的
茎，别名:透骨草、凤仙梗、凤仙花梗等，产于江苏、浙江、安徽、湖
北、四川等地。凤仙透骨草因其疗效独特，入药具有祛风、活血、
通经、软坚、消肿等功效，而在临床被广泛应用于抗风湿痹痛，筋
骨挛缩，寒湿肢气，疮癣肿毒等［1，2］。我们对江苏产的凤仙透骨
草进行了化学成分的分离与提取，提取到了东莨菪素(scopole-
tin)。文献报道东莨菪素有很好的镇痛、抗炎作用［3，4］。然而凤
仙透骨草的指纹图谱研究报道极少，故采用 HPLC － PDA检测器
检测技术对不同产地凤仙透骨草进行指纹图谱研究，用有机溶剂
提取的凤仙透骨草药材中原儿茶酸、东莨菪素成分首次建立
HPLC指纹图谱，不同产地不同批次的 HPLC 指纹图谱有很大的
相似。本实验就凤仙透骨草 HPLC 指纹图谱分析方法的建立为
凤仙透骨草药材质量控制提供科学依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 Waters 2695 高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，
Empower色谱工作站，Mettler万分之一，十万分之一，百万分之一
电子天平，Milli － Q纯水器，KQ －250E超声提取器。
1． 2 材料 试剂:甲醇为色谱纯(江苏汉邦科技有限公司) ，其它
试剂均为分析纯，对照品:东莨菪素由江苏省中医药研究院中药
化学研究室提供，纯度达 98%以上，原儿茶酸由中国药品生物制
品检定所提供;药材来源:江苏品种采自江苏省盱眙县，其余样品
为市售商品，经本院中药资源化学研究室钱士辉研究员鉴定均为
凤仙透骨草。样品信息见表 1。
2 方法
2． 1 色谱分析条件 色谱柱:Alltima C18柱 (4． 6 mm × 250 mm，5
μm) ;柱温:35℃ ;检测波长:300 nm 流动相: (A)甲醇和(B)
0． 1%冰乙酸溶液，(5 ∶ 95)梯度洗脱，运行时间 60 min。1 ～ 8
min甲醇从 5%线性梯度至 8%;8 ～ 10min线性梯度至 20%;10 ～
20 min线性梯度至 30%;20 ～ 30 min 线性梯度至 30%;30 ～ 45
min 线性梯度至 10%;45 ～ 46 min线性梯度至 5%;46 ～ 60 min线
性梯度至 5%。流速:1． 0 ml /min;进样量:20 μl。流速:1． 0 ml /
min。
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取原儿茶酸、东莨菪素适量，用
甲醇溶解并稀释定容，得对照品溶液，浓度分别为原儿茶酸
0． 189 mg /ml，东莨菪素 0． 048 9 mg /ml，再分别精密吸取原儿茶
酸、东莨菪素各 1 ml置 10 ml量瓶内加甲醇稀释至刻度，摇匀，作
为混合对照品溶液。
表 1 样品信息
序号 来源
1 江苏省盱眙县(自采)
2 江苏省盱眙县(自采)
3 江苏省盱眙县(自采)
4 浙江中药饮片厂(商品)
5 浙江中药饮片厂(商品)
6 浙江中药饮片厂(商品)
7 湖北中药饮片厂(商品)
8 湖北中药饮片厂(商品)
9 湖北中药饮片厂(商品)
10 安徽亳洲徐重道中药饮片厂(商品)
11 安徽亳洲徐重道中药饮片厂(商品)
12 安徽亳洲徐重道中药饮片厂(商品)
2． 3 供试品溶液的制备 精密称取透骨草细粉约 2． 5 g 置具塞
100 ml三角烧瓶中，用 50ml甲醇浸泡 20 h超声(功率为 250 W，
频率 40 kHz)超声 20 min，上清液滤过，药渣继用甲醇 25，20 ml
分别超声 2 次，每次超声 20 min，上清液滤过，最后用甲醇 5 ml
洗涤药渣，合并提取液，回收甲醇，残渣用甲醇转移并定容至 5 ml
容量瓶内，过 0． 45 μm滤膜，作为供试品溶液。分别取对照品溶
液、供试品溶液各 20 μl按“2． 1”项下色谱条件测定。
3 结果
3． 1 共有峰的标定 取样品溶液 20 μl，注入高效液相色谱仪，按
选定的梯度洗脱，记录 60 min内色谱图，结果表明 40 min 后无有
意义峰出现，故确定图谱记录时间 60 min。共标定 12 个共有峰
构成凤仙透骨草药材的指纹特征，以凤仙透骨草的东莨菪素色
谱峰为参照峰，计算其他主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面
积，峰 5 为原儿茶酸峰，10 号峰为东莨菪素峰。各批次药材均具
有上述特征，但特征峰的相对含量分布差异导致色谱概貌存在一
定差异。
3． 2 精密度实验 精密称取凤仙透骨草 1 号样品细粉 2． 5 g，按
供试品溶液制备方法制得供试品溶液，连续重复进样 6 次，记录
指纹图谱。考察各共有峰相对保留时间及相对峰面积比值的一
致性，结果显示各共有峰相对保留时间 RSD为 0． 01% ～ 0． 19%，
相对峰面积的 RSD为 1． 17% ～ 2． 49%，符合指纹图谱研究技术
的要求［5，6］。
3． 3 重复性实验 精密称取凤仙透骨草 1 号样品细粉 2． 5 g，平
行 6 份，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，进行测定，考察
各共有峰相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，各共有峰相
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对保留时间的 RSD 为 0． 03% ～ 0． 18%，相对峰面积的 RSD 为
1． 07% ～ 2． 62%，符合指纹图谱研究技术的要求［5，6］。
3． 4 稳定性实验 精密称取凤仙透骨草 1 号样品细粉 2． 5 g，按
供试品溶液制备方法制得供试品溶液，分别在 0，2，4，8，12，24 h
不同时间点进样 20 μl进行检测，记录指纹图谱。考察各共有峰
相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，各共有峰相对保留时
间的 RSD为 0． 03% ～ 0． 69%，相对峰面积的 RSD 为 1． 46% ～
2． 38%，结果表明样品稳定性较好。
3． 5 样品指纹图谱测定 分别取不同产地不同批次凤仙透骨草
样品 12 个，按供试品溶液的制备方法获得供试溶液，测定，通过
12 批凤仙透骨草样品的指纹图谱的测定，比较其色谱图，相对保
留时间、相对峰面积见表 2 ～ 3。色谱图结果见图 1 ～ 2。
表 2 样品相对保留时间
峰名 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0． 085 4 0． 084 9 0． 085 2 0． 086 0 0． 086 1 0． 085 4 0． 085 7 0． 085 8 0． 085 4 0． 085 5 0． 084 8 0． 085 1
2 0． 098 8 0． 098 4 0． 098 7 0． 098 5 0． 098 8 0． 098 3 0． 099 0 0． 099 0 0． 098 7 0． 098 9 0． 098 2 0． 098 5
3 0． 315 0 0． 314 8 0． 314 8 0． 317 7 0． 317 8 0． 317 0 0． 3155 0． 315 3 0． 315 1 0． 315 8 0． 312 8 0． 315 7
4 0． 380 9 0． 381 1 0． 381 0 0． 379 4 0． 379 7 0． 377 7 0． 380 3 0． 379 6 0． 381 6 0． 380 1 0． 379 6 0． 379 5
5 0． 469 0 0． 469 0 0． 468 8 0． 469 1 0． 469 2 0． 468 1 0． 469 9 0． 469 8 0． 469 8 0． 469 6 0． 467 0 0． 469 3
6 0． 493 3 0． 493 0 0． 493 0 0． 469 1 0． 493 0 0． 491 8 0． 493 7 0． 493 6 0． 493 5 0． 493 5 0． 491 0 0． 493 3
7 0． 600 9 0． 600 8 0． 600 7 0． 600 3 0． 600 4 0． 5992 0． 6014 0． 601 4 0． 601 6 0． 601 0 0． 598 8 0． 600 9
8 0． 726 5 0． 726 3 0． 726 3 0． 726 0 0． 726 1 0． 724 7 0． 726 8 0． 726 7 0． 727 2 0． 727 0 0． 724 5 0． 727 0
9 0． 959 0 0． 960 3 0． 959 6 0． 955 7 0． 955 6 0． 955 2 0． 956 5 0． 955 9 0． 955 1 0． 958 1 0． 956 0 0． 957 6
10 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
11 1． 048 0 1． 048 2 1． 048 5 1． 04 6 1． 046 1 1． 046 8 1． 047 7 1． 047 6 1． 147 2 1． 047 3 1． 049 0 1． 047 5
12 1． 125 6 1． 125 8 1． 125 9 1． 122 4 1． 122 3 1． 124 3 1． 124 1 1． 123 8 1． 123 3 1． 124 4 1． 127 2 1． 124 5
表 3 样品相对峰面积
峰名 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0． 379 7 0． 392 0 0． 381 7 0． 091 0 0． 074 9 0． 098 2 0． 229 7 0． 226 8 0． 188 8 0． 284 2 0． 274 1 0． 322 7
2 0． 674 0 0． 659 9 0． 670 3 0． 279 7 0． 260 1 0． 307 4 0． 867 8 0． 856 2 0． 842 4 0． 399 2 0． 389 4 0． 384 3
3 0． 243 6 0． 253 6 0． 274 7 0． 060 3 0． 064 3 0． 081 0 0． 084 9 0． 083 2 0． 063 1 0． 063 3 0． 049 9 0． 043 7
4 0． 103 7 0． 095 5 0． 056 6 0． 015 9 0． 012 6 0． 011 2 0． 103 7 0． 104 2 0． 072 5 0． 160 0 0． 075 6 0． 157 7
5 0． 120 7 0． 119 9 0． 119 3 0． 5738 0． 568 8 0． 598 9 0． 232 6 0． 215 4 0． 219 8 0． 198 6 0． 202 7 0． 210 8
6 0． 135 7 0． 123 5 0． 125 3 0． 1197 0． 113 7 0． 125 0 0． 091 6 0． 088 7 0． 085 4 0． 093 5 0． 091 4 0． 110 2
7 1． 632 1 1． 761 3 1． 626 9 0． 0911 0． 075 4 0． 105 0 0． 381 3 0． 365 3 0． 313 4 1． 030 5 0． 911 7 0． 958 4
8 0． 165 9 0． 147 1 0． 163 7 0． 343 3 0． 338 5 0． 334 5 0． 171 0 0． 163 6 0． 179 1 0． 246 6 0． 216 9 0． 2359
9 0． 147 0 0． 225 0 0． 143 4 0． 217 7 0． 251 7 0． 207 2 0． 534 6 0． 510 2 0． 497 8 0． 158 8 0． 080 1 0． 169 0
10 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
11 0． 053 9 0． 043 3 0． 049 7 0． 141 3 0． 139 1 0． 148 1 0． 125 7 0． 124 3 0． 135 5 0． 079 8 0． 111 8 0． 067 5
12 0． 235 2 0． 214 1 0． 229 7 0． 700 9 0． 682 5 0． 714 9 0． 343 5 0． 329 8 0． 345 3 0． 354 2 0． 310 0 0． 358 2
图 1 凤仙透骨草 HPLC指纹图谱
4 讨论
4． 1 样品提取条件优化 我们比较了用纯甲醇、80%甲醇、无水
乙醇、80%乙醇作为提取溶剂，结果发现纯甲醇提取效果较好，故
确定纯甲醇作为提取溶剂，比较了浸泡时间、超声次数、提取方
法，发现浸泡 20 h 再超声效果较好且简单，浸泡时间短影响含
量，浸泡时间超过 20 h 含量不再增加。在超声提取时比较了超
声时间和超声次数，结果发现超声 20 min × 3 次，比超声 60 min
× 1 次效果好，最终确定文中“2． 3”项所述提取条件。
4． 2 分离条件选择 本实验用甲醇:水，甲醇:0． 1%冰乙酸进行
分离，发现在有酸条件下峰型对称，并考察了甲醇与 0． 1%冰乙
酸不同比例下各峰分离情况，观察到甲醇:0． 1%冰乙酸在等度流
动相未得到满意的分离效果，然后又选择了不同梯度的流动相体
系，最终确定以本实验现在采用的甲醇:0． 1%冰乙酸溶液(5 ∶
95)梯度流动相体系各成分分离效果最佳。
图 2 12 批凤仙透骨草药材指纹图谱
4． 3 最大吸收波长选择 本实验用二极管阵列检测器，在 200 ～
400 nm 范围内进行光谱扫描，提取原儿茶酸，东莨菪素的色谱峰
光谱图，在 254 ～ 345 nm 处分别有最大吸收，综合多个成分考虑，
故选取 300 nm 作为透骨草指纹图谱的检测波长，以提高检测的
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灵敏度，提高分析方法的准确性和可靠性。
4． 4 凤仙透骨草指纹图谱的建立与评价 本文采用 HPLC － PDA
检测器检测，优化色谱条件，建立凤仙透骨草药材的指纹测定方
法，对不同产地供试品所得指纹图谱进行分析，选择稳定性较好，
吸收强，特征明显的色谱峰为共有峰共标定了 12 个峰。除已标
定的色谱峰外，还有一些不太明显的共有峰及每批样品各自特有
的色谱峰，可作为测定特定类型凤仙透骨草的指标。从 12 批凤
仙透骨草供试品的色谱指纹图进行叠加相似比较和相对保留时
间可以看出，12 批的供试品 HPLC 指纹图谱具有较好的相似性，
它们可作为鉴别凤仙透骨草的必要条件之一。由表 2 可以看出
12 个峰相对峰面积相差较大，说明其产地不同其生长条件不同;
相同化学成分的含量有所不同，以及药材质量间存在一定的差
异，进而反映凤仙透骨草药材的内在质量，为凤仙透骨草药材判
断真伪、评价优劣、考察稳定性和一致性提供依据。本实验中所
建立的测定方法快速准确，灵敏度高，可作为凤仙透骨草质量控
制和应用的依据以及中药研究的方法学借鉴。
参考文献:
［1］ 江苏新医学院．中药大辞典，上册［M］． 上海:上海科学技术出版
社，1977:485．
［2］ 国家中医药管理局． 中华本草，第 5 卷［M］． 上海:上海科技出版
社，1999:137．
［3］ 宋 蔚，刘锁兰，李秀青，等． HPLC 测定 4 种丁公藤类生药中东莨
菪素及东莨菪苷的含量［J］．中国中药杂志，2004，29(2) :185．
［4］ 朱才庆，曾宪仪，徐晓艳，等． HPLC 法测定白酱感冒颗粒中东莨菪
素［J］．中草药，2006，37(4) :553．
［5］ 刘小瑜，吕圭源，俞景华．指纹图谱在中药研究中的应用概况［J］．
天津药学，2006，18(1) :46．
［6］ 国家药品监督管理局．关于印发《中药注射剂指纹图谱研究的技术
要求(暂行)》的通知［S］．中成药，2000，22(10) :671．
收稿日期:2010-05-04; 修订日期:2010-09-08
基金项目:河北省唐山市科学技术研究与发展计划课题(No． 08360202A-3)
作者简介:赵 雷(1977 － ) ，男(汉族) ，河北唐山人，现为华北煤炭学院
在读硕士研究生，学士学位，主要从事心血管药理学及中药研发工作．
* 通讯作者简介:齐亚娟(1970 － ) ，女(汉族) ，河北昌黎人，现任华北煤
炭医学院教授，博士学位，主要从事心血管药理学及中药研发工作．
郁金煎剂对实验性胃溃疡的保护作用
赵 雷1，张博男1，白 静1，贾 欣1，吕 华1，刘淑梅1，张 楠 2，齐亚娟1*
(1．华北煤炭医学院，河北 唐山 063000;
2．华北煤炭医学院附属医院，河北 唐山 063000)
摘要:目的 研究郁金煎剂对实验性胃溃疡的保护作用。方法 采用小鼠水浸应激、利血平和无水乙醇诱发胃溃疡及大鼠
醋酸刺激性、幽门结扎性胃溃疡模型，观察溃疡指数和溃疡抑制率。结果 郁金煎剂能使各种胃溃疡指数明显降低，溃疡
抑制率明显增加。结论 郁金具有较好的抗急慢性胃溃疡作用。
关键词:郁金;煎剂;胃溃疡;溃疡指数
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 06． 077
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)06-1446-02
普胃丸(Puwei Pill，PWP)由郁金、巴豆、雄黄、豆蔻、陈皮等
中药组成，是在临床疗效满意的古方基础上，结合现代药理研究
方法制成的纯中药复方制剂，用于治疗胃溃疡、胃炎、胃脘痛。其
君药之一郁金来源于姜科姜黄属植物，史载于《新修本草》，性
寒，味苦、辛，归肝、胆、心经，具有活血止痛、行气解郁、凉血、利胆
褪黄的功能。但目前并无对郁金抗胃溃疡作用的报道。本实验
采用多种实验性胃溃疡模型考察郁金抗胃溃疡的药效，并为进一
步揭示普胃丸的组方依据提供参考。
1 材料
1． 1 药物与试剂 郁金煎剂(18． 8 mg 生药 /ml) :由华北煤炭医
学院药理教研室制备;盐酸雷尼替丁胶囊:批号 070609，石家庄
四药有限公司(规格:150 mg /粒) ;无水乙醇:批号 20050902，唐
山市路北区化工厂生产(规格:500 ml /瓶) ;利血平:批号
070308，广东邦民制药厂有限公司生产(规格:1 ml:1 mg) ;冰醋
酸:批号 070609，唐山市路北区化工厂生产(规格:500 ml /瓶)。
1． 2 动物 昆明种小鼠，♀♂兼用，体质量 18 ～ 22g;Wistar大鼠，
♀♂兼用，体质量 180 ～ 220 g;均由河南郑州实验动物中心提供。
合格证号:scxk(豫)2005 － 0001。
2 方法与结果
2． 1 郁金煎剂的制备 将郁金(购于唐山市同和药店。产地:广
西)15 g加水 400 ml，浸泡 30 min，常规煎煮 2 次，分别 40 min 和
20 min，将两次滤液合并后浓缩至 80 ml，置于 4℃冰箱备用。
2． 2 郁金煎剂对小鼠急性水浸应激性胃溃疡的作用 小鼠随机
分为模型组、雷尼替丁组(0． 04 g /kg)、郁金组(5． 63g / /kg) ，每
天灌胃给药 1 次，对照组灌服等量的蒸馏水，连续 5d。并于末次
给药后造模。模型制备采用束缚浸水法，将小鼠身体禁锢于网架
上绑住其四肢限制活动，放入(20 ± 1)℃左右的水浴中，水面达
剑突处，正常组不给予束缚水浸处理。20 h后处死小鼠。取出胃
后沿胃大弯剪开，于 10 倍放大镜下计数溃疡点数，并计算溃疡
指数［1］:溃疡点或面 1 mm以下者，计 1 分;1 ～ 2 mm者，计 2 分;
2 ～ 3 mm者计 3 分;3 ～ 4 mm 者，计 4 分;大于 4 mm 者，计 5 分;
若病灶内径 ＞ 2mm 者计分加倍，将计分相加即为该动物的溃疡
指数。并计算溃疡抑制率:胃溃疡抑制率(%)［2］ = (模型组溃
疡指数 －给药组溃疡指数 )/模型组溃疡指数 × 100%。表明郁
金煎剂对大鼠水浸应激性胃溃疡具明显的保护作用。见表 1。
2． 3 郁金煎剂对大鼠慢性醋酸性胃溃疡的作用 采用醋酸刺激
性胃溃疡模型［3］，将禁食 24 h 的大鼠，腹腔麻醉后，常规消毒，
于剑突下纵向切开腹壁约 2 cm，打开腹腔，取出胃，在胃窦前壁
近小弯侧达胃壁肌层与浆膜层之间，注入 20%醋酸 0． 05 ml，缝
合。术后 3 d分组给药，随机分为模型组、雷尼替丁组(0． 03 g /
kg)、郁金组(2． 82 g / kg) ，每天灌胃给药 1 次，对照组灌服等量的
蒸馏水，连续 5 d。于末次给药后 48 h 取材，观察溃疡指数及溃
疡抑制率。结果郁金组溃疡指数明显减少，溃疡抑制率明显增
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 6