全 文 ：第 2期
1 9 9 3年
东 北 师 大 学 报 自 然 什 学 版
JO U R NA I O F N () R TAE HS T NO RMA LUI N VE S RI TY
闪 (二 .竺
1 9乞户 3
红缘层孔菌多糖对小鼠核酸蛋
白质合成及对肿瘤 S一 1 80病毒
C B V3
、
S H V
一
I 细胞增殖的影响
张丽萍 苗春艳 许丽艳
(东北师大生物系 ) (白求恩医大地方病研 宛所 )
摘要 本文用放 射性前体持 入 法研 完红 缘层孔菌多糖对小 鼠体内核酸及蛋 白质
合成的影响 。 结果表叨 .该多 糖较明显地提高了 [3 H一 Le t门掺 入 正 常刁、 鼠 _血 清
蛋 白及肝脏蛋 白的速率 .对部 份肝切 除小 鼠肝 脏 合成蛋 白质的能力也有显著的
促进作用 ; 同时 , 该 多糖使 「, H 一 U R」掺入肝脏脾脏 R N A 的量对比照 组 分别增
加 了 1 2% 及 2 6% , 但对 「3H 一 T d R」接入 肝 、 牌 D N A 的量无显著影响 。 红 缘层
孔菌多糖分别与 S 一 1 8 0 肿瘤 细胞 . 柯萨奇病毒 ( C B V 3 ) 及 工型单纯疙垮病毒
( H S V 一 I ) 进行体外培养 , 结果表明该多糖对三 种细 胞的增殖无显著影响 _
关键词 红 缘层孔菌多塘 . [ 3 H ] 一亮氛酸 . [ 3 H ] 一尿普 。
近 30 年来 , 人们对真菌多糖 、 植物多糖的研究 日益深入 . 并发现许多种多糖均具有
抗肿瘤 、 抗 炎 、 抗放 、 保肝 、 增强机体免疫功能等作用 L` · : · 3 〕我们从红缘层孔菌 [ F o m外 、
iP in co la ( SW
e x F r ) ] 子实体中提取的水溶性多糖也有类似的生物活性 匕` { 。
多糖类是从整体水平增强机体的免疫机能 ,其必然和生命活动的物质基础 一 核酸 、 蛋
白质的代谢 密切相关 。 脱氧胸腺啼陡核昔 、 尿嚓睫核昔是 D N A 、 R N A 生物 合成的基础原
料 ; 亮氨酸是蛋白质生物合成的前体 。 [ 3H 一 T d R ] 、 「3 H一 U R ] 、 [ 3 H 一L eu ] 在细胞掺入的速
率可反映细胞合成 D N A 、 R N A 、 蛋白质能力的大小 。 本文用放射性同位素前体掺 入法观
察红缘层孔菌多糖对小鼠核酸及蛋白质 合成的影响 。 为探讨多糖的作用机理 , 在进行小
鼠体内试验的同时 , 将该多糖分别与 s 一 1 8 0 肿瘤细胞 、 c B V 。 及 H S V 一 I 两种病毒进行
体外培养 , 从细胞 的增殖情况观察红缘层孔菌多糖对肿瘤及病毒有无直接的作用 。
实验材料
1
.
1 实验动物 选用白求恩医大实验动物部饲养的普通小 白鼠 , 体重 18 一 20 9 . 雌雄不限 。
1
.
2 红缘层孔 菌多糖 子实体采 自长 白山山区 , 按文献 [ 4〕 方法制备水溶性多糖 。
1
.
3 放射性 同位素标记前休 D L 一 ( 4 . 5 一 3 H ) 亮氨酸 ( 3H 一 L eu ) . 放射 比度为 5 2 ic / m M ;
( 5一 3 H ) 尿嚓咙核营 ( 3H 一 U R ) , 放射比度为 2 1c i/ m M ; ( 甲基一 3H ) 一 胸腺崛陡核营 ( 3H
一 10 4 一
DOI : 10. 16163 /j . cnki . 22 -1123 /n. 1993. 02. 024
一 T d R) 放射比度为 5 2i c /m M、 以上药品均购 自北京中国原子能科学研究院
1
·
4闪烁液 二苯基昭哇 (PO P) 4 . 09 ;1 . 4 .双 一 [5 一苯基晤哇基 一 习 苯 (P) ( PO P) 。 . 29
溶于 7 。。m ! 二甲苯及 3 0 0m l无水 乙醇的混 合液中 。
1
.
5 F L羊膜细胞 .柯萨奇病毒 、 单纯疤疹病毒均来 自白求恩医大应用基础研究所 ;S 一
1 8。 细胞来 自医大预防医学院放射生物室 。
l
·
6细胞培养液 R PM l l 6 4。 培养液 (G I K CO 美国 ) 内含 1。 % 小牛血清为生长液 .含 5 %
小牛血清为维持液 。
7 L仪器 美 国 PA RC K公 司产 I T R一 CA R B Zo。。 A C型液体 闪烁计 数器 .计数效 率
6。叭 , 。 实验结果经内标准源法进行了淬灭校正 , 样品的放射性强度直接用 cl, m 表示 。
2 方法与结果
2
.
1 红缘层孔 菌多糖对 口H一 L e、 1〕 掺入正常小 鼠血清蛋 白及肝脏蛋 白的影响
将小鼠随机分为两组 . 多糖试验组小鼠按照 2 0 m g /K g 体重剂量每 日注射一次多糖
水溶液 . 对照组注射同体积的生理盐水 , 连续给药七夭 。 停药次 日 , 每鼠按 4衅 i / 1馆 体
重剂量注射 [ :`H ] 一 L 。 , 。 h4 后摘眼球取血制血清 。 取 0 . l m L 血清加 10%三氯 乙酸沉淀
蛋 白质 . 经 3 0 0 o rP m 离心 l o m i n 后 . 沉淀用相同浓度的三氯乙酸洗涤 , 离心清除游离的
同位素标记物 . 再用 1 : l 的乙醇一乙醚洗涤沉淀 ,离心清除脂类 。 沉淀加 8 % 甲酸 l m L ,
沸水浴消化沉淀至溶解 . 冷却后 . 取 。 . l m L 消化液加 s m L 闪烁液 。 每鼠平行制备三份样
品 . 经液体闪烁计数器对样品每分钟的放射性进行计数 、 结果如表 1所示 。
给药组及对照组小鼠在摘眼球取血的同时 , 剖腹取肝 , 用滤纸吸干血水后称重 , 并
制成 4 o m g / m L 的肝 匀浆 。 取 l m L 肝匀浆按与血清相同方法制备样品及测定 。
表 l 红缘层孔菌多糖对 〔, H ] 一 L e 。 掺入正常小鼠
及部分肝切除小鼠血清及肝脏蛋白质的影响
实验项 目 组别 动
/
’ 0“ m g 肝 百 P 值
物 C p m
{
’凹nT ,血清 分数 } ( X 士 S E〕 率
正 掺 入肝脏 对照组 8 3 4 9 2士 28 9 10 0 P < 0 . 0 1
常 蛋 白速率 给药组 7 43 6 5士 5 3 5 12 5
小鼠 掺入血清 对照组 8 6 90士 1 0 2 10 0 P < 0 . 0 5
蛋 白速 率 给药组 7 7 93士 8 3 1 17
部 掺入肝脏 对照组
:
3 2 87 士 2 4 6 10 0 P < 0
.
0 5
分 蛋白速 率 给药组 4 0 8 1士 4 7 0 12 4
肝
切 掺 入血 清 对照组 8 69 3士 16 2 10 0 P < 0 . 0 5
除 蛋白速率 给药组 8 83 2士 15 8 12 0
,J
、
鼠
10 5
从表 l数据可见 , 红缘层孔菌多糖对 [ 3H ] 一 L eu 掺入血清蛋 白及肝脏蛋白起到了较
明显的促进作用 。
2
.
2 红缘层孔 菌多糖对部分肝切除小 鼠血清及肝脏蛋 白质合成的影响
动物分组及给药途径同前 。 对多糖试验组小鼠连续给药 6 天后 , 按文献 [ 5 ] 方法给
每 只小 鼠进行部分肝切除手术 。 继续给药 2 天 , 于末次给药 hl (部分肝切除 (50 h ) , 按前
述方法测定 [ , H ] 一 L eu 掺入小鼠血清及肝脏蛋 白质的速率 。 结果如表 1所示 。
红缘层孔菌多糖对部分肝切除小鼠肝脏 合成蛋 白质有明显的促进作用 , 「3 H ] 一 L e t , 掺
入量比对照组增加 2 4% ; [ 3 H ] 一 L e t , 掺入血清蛋白量比对照组增加 。
2
.
3 红缘层孔 菌多糖对 [ 3H ] 一 T d R 、 仁3 H ] 一 U R 掺入肝脏 . 脾脏 D N A 、 R N A 的影响
将小鼠分为 4 组 . 两组对照 , 两组按前述方法与剂量给 小鼠注射红缘层孔菌多糖 。 连
续给药七 日后 . 一组按 4衅 i / 1 09 体重的剂量给每鼠注射 [ 3 H 」一 T d R ; 另一组则以相同剂
量注射 [ 3H J 一 U R 。 h2 后 , 处死动物 . 取肝 、 脾 . 按前述实验程序制样品 ; 两对照组按
相同方法处理 。 各组的放射性强度如表 2 所示 。
试验结果表明 . 红缘层孔菌多糖 明显地促进了小鼠肝脏 、 脾脏 R N A 的 合成代谢 ,
「3 H 〕 一 U R 掺入肝脏 R N A 的量 比对照组增加了 1 8 % ; 掺入脾脏 R N A 的量比对照组增加
了 2 6 % 。 该多糖对 「3H 〕 一 T d R 掺入肝脏 、 脾脏 D N A 的速率均无显著影响 。
表 2 红缘层孔菌多糖对 [ 3H ] 一 T dR 、 仁3 H ] 一 U R 掺
人小鼠肝脾 D N A 、 R N A 的影响
实验顶 目 组别 动 C P nr / l {、 ( ) , n g 组织 百 P 值
物 1 (。 ( )。 I血清 ( X 士 S E 〕 分
娄交 率
月下 [ 31工〕 一 T 〔 IR 又·于照组
:
l
:::
}脏 掺入 速率 给药组 3 8 9 5士 5 3 3 P > ( ) 5 …
4 (、 8 6 士 6 7 2 一
[
3
H口 一 L JR 对照组
:
3 3 6 9士 8 2 1 l ( ) ( ) 一掺入 速率 给药组 4 () (, 5士 3 9 8 1 18 P < () . 、) 5 一一
脾 [ 3 H〕 一 T 〔 IR 对照组 6 5 14 3士 9 36 1 0 0 P> 0 . 5
脏 掺入速率 给药组 8 …`。 “ 」
仁“ H口 一 U R 对照组
:
3 2 6 5士 78 7
:::
一
掺入速率 给药组 4 11 3士 6 0 2 P < ( ) ( ) 5
2
.
4 红缘层孔 菌多糖 对 S一 180 肿瘤 细胞体外作用的 影响
取 S 一 1 80 肿瘤细胞进行常规培养 , 达对数生长期时使用 , 临用前将细胞液稀释成
2
.
5 火 1 0 5 个 / m L , 取 96 孔板 . 每孔加 0 . l m L 瘤细胞悬液 , 再加不同浓度等量的红缘层孔
菌多糖液 于 37 C . 5 % C O : 中培养 。 分别于 48 1、 、 96 h 、 1 4 h4 , 用中性红摄入法于 5 40 12 二
比色测定 , 并 以 O D 值代替存活的细胞数 L,」. 结果见表 3。
将表中数据进行统计学处理 , P 均大于 0 . 肠 表明该多糖对肿瘤细胞的生长无明显的促进
或抑制效应 。
10 6
表 3红缘层孔菌多糖对 S一 8 0 1肿瘤细胞的体外作用
多糖浓度 肿 瘤 细 胞 存 活 数
( 共￡ gn /们 4 8卜 一 14
`
4 1
1
6 1 9 1
飞
一
生理盐水 ( ). 26 士 ( ).( ) 5兀 ). 19士 ( ).( ) 3 { ).( )8 士 ( ).〔, 2
12了)〔、 () . 3 2士 ( ) . ( ) 4 ( ). 1 5士 ( ) . (巧 ( ) . ( ) 6士 ( ). 〔 ) l
6 ( ) (飞 ()
.
2 7士 (飞. 〔) 6 ( ). 1 1士 ( ) . ( 1 1 ( ) . () 8士 () . () 2
3 ( ) 〔冬 () . 2 3士 0 . ( ) 7 0 . 14士 0 . ( ) 2 0 . ( )7士 〔 ). () l
一一 f飞. 3 3士 ( ) 0 8 () 1 2士 0 . ( ) 2 (、 . ( ) 6士 () . ( ) 7
15 (、
2
.
5 红 缘层孔 菌多糖对病毒 C B V 3 、 H SV 一 I 体外作用的观察
将 F L 羊膜细胞常规传代培养 , 待成单层后 , 加含红缘层孔菌多糖维持液 ; 经 3 7 C .
5 ;石C O : 培养 2 4 11 后 . 弃 去多糖液 ; 用 H a :飞k ` S 液洗 3 次 ; 加 l o o T C I D 。。的柯萨奇 B 3 病毒
( C B V 3 ) 或加 I 型单全屯疤疹病毒 ( H S V 一 I ) 0 . l m L 。 吸附 l h 后 , 经 H a : I k ` S 液洗 3 次 , 加
含多糖维持液培养观察 . 等对照组病毒出现份或洲时取出 , 用中性红摄入法测存活细胞
数 . 结果如表 4 所示 。
表 4 红缘层孔菌多糖对毒 C B V 3 、 H S V 一 I 的外体作 用
对 C B v : 的作用 对 H S v 一 I 的作 用
细月包又于照 0 . 18士 (〕 . ( ) 6 〔) . 2 7士 〔) . ( 1 1
病毒 又、士照 (、 . ( ) 2 5 士 〔) . f )〔) 7 〔, . ( ) 9 士 ( ) . ( ) 2
多 l 艺() () ( ) . 〔) 9 士 () . 12 {搪 ( ) . 13士 (〕 ( ) 3
浓尸 g /。 : l
度 6 0 0 ( ) . ( ) 6士 ( ) . ( )5 ( ) . 15 士 ( ) . 【巧
3 () 0 O
,
14 士 ( ) . 19 () . (飞7 士 ( ) . ( ) l
1 5 ( ) 0
.
2 1士 0 . 18 () . 〔) 9士 ( ) . ( ) 3
实验结果表明 . 红缘层孔菌多糖分别与病毒 C B V 。 及 H SV 一 工共同培养时 , 对病毒细胞的
生长 、 繁殖无显著影响 (P > .0 05 ) 。
3 讨论
红缘层孔菌多糖以 2 ()0 m g / K g 剂量连续给药 7 天 . 较明显地提高了 [ 3H ] 一 L eIL 掺入
正常小鼠血清及肝脏蛋 白质的数量 ; 使部分肝切除小鼠 [ 3 H ] 一 L e L ; 掺入 肝脏蛋 白质的量
比对照组增加了 2 4 % , 表明该多糖对损伤组织的修复有一定的促进作用 。 红缘层孔菌多
糖也能加速 [ , H ] 一U R 掺入肝脏脾脏 R N A 的速率 ; 但对两脏器 D N A 的合成无显著影响 。
这提示红缘层孔菌多糖对小鼠蛋 白质生物 合成的促进作用可能是通过对转录过程的促进
而实现的 。
将红缘层孔菌多糖分别与 S 一 1 80 肿瘤细胞 , 病毒 C BV 3 及 H S V 一 I 共同培养 , 结果
表明该多糖对细胞增殖过程无显著的抑制或促进效应 。 这种现象是 否表明动物机体正常
一 1 0 7 一
细胞与肿瘤 、 病毒细胞的代谢过程有着显著不同的特点 . 或者是多糖的药效是通过从整
体水平调节机体的代谢过 程 . 增强机体的兔疫机能 。 许多人称多糖为扶正固本药物也说
明它是一种非特异性的免疫增强剂 , 因此 于体外不会对细胞产生直接的作用 。
参 考 文 献
水野卓等 . B ul ! . F a 。 , A g : .
刘耕陶等 . 药学学报 , 1 9 7}t .
5 1
112 、 ]o k 、 U n lv 1 9 8 2
,
3 2 : 2 9
5 : 2 8毛
林志彬 . 药 用真菌 . 19 8 3 , 2 8 1
张丽萍 . 张翼伸 . 东北师大学 报 , 19吕吕 , 4
5 岳 微 , 丛铮 , 中国药理学报 . 1 9 8 ` 7 : :伟 4
关洪 昌
黄祯祥 .
丛铮 . 北京医 学院学 报 , lt) 8 1 . 岭
1〔)公
2 6 1
医学病毒学荃础及实验技 术 , 科学 出版社
E f f e e t s o f F o m e s P i n ie o l a P o l y s a e e h r id e s o n B io s y n t h e s is
o f N u e l e i e A e id s a n d P r o t e in G r o w t h o f s 一 1 8 0 , C B V : , H S V 一 I
Z I/ a , , 9 L tP i
, , g
·
M 人, 。 C]/ , , , ,脚 z , a , , d X , , L砂 a , ,
A b s t r a e t A w a t e r 5 0 1、 l b le p o ly s a e c h o r i d e h a s be e l: i, o la t e d f r o n l p il l ie o la ( SW
o x F r )
.
F o m e s p o l y s o e e l
: 。 r i ol e Z () Om g / K g /d x 7d i p i; l e r e o s e d t h o . : : e o r p o r a : 10 ,: o f仁3 H〕万 L 。 : 2 1, l t o I iv -
e r p
r o t e i r l i: 1 11 o r rn a l a
z l d l) a
l
·
t io l ]y h e P o t e e t o l l: i z e d m i e e ; 。 一飞d i一l e ,℃。 s e d t h o i一飞e o r p r o t i o l l o f
[
3
H ] 一 L e 、卫 i , 1 t o s e r 、 Zm p r o t e i n i , 1 , l o r n 飞a l n l i e e .
F o ur e s p o ly s a e e h a
r id e o a
x: p r o m o t e t h e R N A s y l飞 t h e s is i n L i v o r o x飞d s p le e一: b t l r 一1 0 s i g x飞 i f
-
i e a ; I t e f f e e t o n t h e i l l e o r p o r a t io ; 1 o f 〔, H 〕 一 T d R i ,飞t o D N A .
F o m e s l〕 o l y s a e e h a r id e d o e s 11 o t e x e r t i n f lu e一飞 e e o n g r o w t }1 e e l ls o f s 一 18 0 a n d C B V 3 .
H S V
一 工 .
K e y w o r d s f o m e s p o ly s a e e h a r id e [
3 H ]
一
L e u 〔3H〕 一 U R .