全 文 ：匆
第 4期
19 8 8年
东 北 师 大 学 报 自 然 科 学 版
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反。 · 4
19 8 8
红缘层孔菌多糖生理活性的初步研究
张丽萍 张翼伸
净
矜
摘 要
从红缘层孔 菌中提 取的水溶性多仿对小反单核互噬细胞的吞噬功能有明显
的刺激作 用 , 可才加小且肝胜 、 脾胜 的重 t , 并对 由四燕化碳所致肝损伤 , 具
有一 定的保护作用 。
关键词 红缘层孔菌 多糖 ; 吞噬功能声球蛋白
引 宫
近年来许多研究成果表明 ,植物多糖类 ,如香菇多糖 、 猪等多糖 、 云芝多糖、 黄茂多
糖 、 人参多糖 、 刺五加多糖等均具有提高机体免疫机能的作用 “ 、 , 、 “ , 。
我们从红缘层孔菌中提取水溶性多糖 , 并对该多糖进行 了分离 、 纯化 、 结构及性质
的初步研究 。 本文主要观察红缘层孔J菌多糖对小鼠某些生物功能的影响 。
实 脸 材 料
1
. 红缘层孔菌多糖 : 将长白山产红缘层孔菌子实体经热水抽提 , 醇析干燥后 , 重
新溶于水 , 经 3 0。。转 / 分离心 20 分钟后 , 上清液浓缩后再次醇析 。 股水干燥 。 使用前 ,
将该多糖用生理盐水溶胀一夜 、 加热溶解配成 20 11梁 /m l的胶体浓液 。
2
. 实验用动物 : 均购白白求恩医大实验动物室 。 选用体重 20 、 2 克纯系 I o R 小 `
最 , 刊:重 18 ~ 2 0克普通小白鼠 , 体重 30 09豚鼠。
3
. 绵羊红细胞悬液 : 绵羊血购自长春生物制品研究所 。 将羊血置于有玻璃珠的三
角瓶内 , 摇动 10 分钟后除去纤维蛋白 , 加入相当羊血体积 2 倍的 A I · o v 心溶液 , 摇匀 ,
置于 4 ℃冰箱内保存备用 。
4
。 碳粒清除试验 川墨汁 : 系北京一得阁墨汁厂产墨汁 , 用前经离 心 处 理 后 , 按
1
: 2 比例稀释 。
5
. 豚显血清 , 临用前取豚鼠血制血清 。 川生理盐水将血清稀释 10 倍后 , 立即用于
实验 。
誉 实 验 方 法 与 结 果
,
一 、 对溶血素含量的影响 ’
以羊红细胞免疫小鼠 , 其休内琳巴细胞可产生抗体 -一溶血素 。 在补体参与下 , 翠
此文 x , 8 7年 3 月 5日收到
DOI : 10. 16163 /j . cnki . 22 -1123 /n. 1988. 04. 034
东 北 一师 大 学 报 自 然 科 学 版 9 188年 诊
红细胞被溶血素所裂解而释放出血红蛋白。 定量测定血红蛋白 , 可推知溶血素生成的数
量 。
将 I OR小城20 只随机分为两组 。 取A l , e v . 液中保存的羊红细胞 , 经三次生理盐水
洗涤后 , 按 3 : 5 体积比用生理盐水稀释压积的红血球 。 按 o . Z m l / 只给小鼠 腹 腔 注
射 , 隔 日一次共免疫三次 。
由免疫第一天开始给药 。 每只鼠每 日灌胃红缘层孔菌 多糖 0 . 15 nI l ( 150 照 /蚊体
重 ) 、 连续给药 7 天 , 对照组每 日灌胃同体积生理盐水 。
于末次给药后 2 4小时 , 剑眼球取血制血清。 血清稀释50 。倍 , 取 1m l加。 . 5二 1绵羊
红细胞 , 1 m l脉鼠血清进行溶血反应 。 把溶血产生的全部血红蛋白与都氏试荆反 应 转
化成氛化血红蛋白 , 于 540 n 。 比色测定其含量并计算半数溶血值且 O 。。 , 结果见表 1 。
二 、 对凝集素含量的影响 。
用绵羊红细胞免疫 , 小泉体内还可产生抗体— 凝集素。 疑集素能特异地使抗原血球凝集。
对 I O R小鼠免疫 、 给药 、 取血方法均与溶血素测定相同 。
在血清盘上 、 用生理盐水将待测小鼠血清按 2 的等比级数连续稀释 。 各孔和入等量
绵羊红细胞 , 37 ℃保温 1小时后 , 从产生凝集反应的极限稀释度作为该样品的轰价 。 结
果见表 1 。
令
裹 1 红缘层孔 , 多粉对 I C R小吸落血众 、 凝绍素含 I 的影晌
尺
溶血素 ( H 0 5 0 )
M士 S D 1 2 1
.
7士 2 1 . 5 1 1 1 . 3士 2 5 . 3 P》 0 . 0 5
凝集素 (效价 )
M士 S D 1 5
.
5士 7 . 6 1 2 . 6士 4 . 3 P> 0 . 0 5
三 、 对血清蛋白组份的影响
I O R小鼠血清在测定凝集素含量的同时 ,利用醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清 ( P H
8
.
6的巴比妥— 巴比妥纳电极缓冲液 ,点样 2月 ;电泳电压 1 6 v /c m , 电流为 0 . s m A / 。 m ,通电 60 分钟 。 电泳后的薄膜于氮基黑 I OB染色液中染色 10 分钟 , 经漂洗液漂洗后透明 ,
可见到血清经醋酸纤维素薄膜电泳可分离成血清清蛋白 , 。 : 、 a : 球蛋白 , 月球蛋白和犷 -
球蛋 白等区带 (见图 1 ) 。 对透明的图谱用 日本产O OM O D E N斑 T O M E T E R M O D
E L D 一 60 7 型凝胶扫描仪扫描 (见图 2 示例 ) , 并自动得出各谱带的相对百分含最 (见
表 2 ) 。
扮
勺 张丽萍 、 张翼伸 :红缘层孔菌多糖生理活性的初步研究 1 1 1
吟
图 1R C I小眼血清蛋白的醋酸纤维案薄膜 电泳图谱
( 1)对照小取血清( 2)夕含药小叹血清
户咪、 _
1 2
刃
I夕ù
呼
图 2
表 2
凝胶扫描仪对图 2等醋纤膜的扫描图谱
( l)对照( 2)给药
红缘层孔菌多糖对小限血清蛋白组份的影响
检 测 项 目 给 药 幻. 对 照 绍 补 了…
a :+a :球蛋 白( % )
M士 SD
月一 球蛋白( % )
M士 D S
了 一 球蛋白( % )
M士 SD
血清清蛋 白( % )
M士 D S
4 1
.
5 1士 3. 0 0 1. 4士 4. 卜一 、0. 0 1
6 1
.
8士5. 1 7. 6士 4. 丁》 )0. 0 5
嘴
1 7
.
3士 6. 16. 6士5. I〕 >0. 0 5
8 4
.
9士 3. 85 3. 3士 7. 2 P>0. 0 5
东 北 师 大 学 报 自 然 科 学 版 1889 年 妙
从表中数据可见 , 服红缘层孔菌多搪的小最 , 其血清中 a 球蛋白的含量明显高于对
照组 。 两组的月一 球蛋白 。 f 一球蛋白、 血清清蛋白的含 t 无显著差别 。
四 、 对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响 。
机体单核巨噬细胞系统具有吞噬与清除异物的能力 。 如给小鼠静脉注入碳粒 , 碳粒
随血流流经肝脾等巨噬细胞系统器官时 , 可被吞噬细胞吞噬而从血流中清除 。 血流中碳
粒被廓清的速度可表明单核巨噬细胞的功能 。 巨噬细胞被激活后 , 则吞噬能 力 明 显 加
强 。
将昆明小泉随机分为两组 。 给药组每日灌胃两次 , 每次 O . 15 nI l红缘层孔菌多糖 ,
对照组给与同体积生理盐水 。 给药 10 天后 , 给小鼠尾静脉注射 0 . 2 m l墨汁 , 立刻取内眺
血 5。月 , 加入 3 . s m l 0 . 1% N a : O仇 溶液中使之溶血 , 10 分钟后 , 摘眼球 取 血 5 0闪 ,
按前述方法溶血 , 用 7 21 型分光光度计于 6 5 o n m侧其光密度 , 后从标堆曲线查出相应血
碳浓度 , 代人公式 K 二 l( 电。 1 一 l啥 O , ) / T 求出吞噬指数 K值 。 以 K值表示血流中碳粒
廓清速率 。 测定结果为 : 给药组小鼠 ( 12 只 )吞噬指数 K 为。 . 1 1 3士。 . 0 42 , 对照 组 小 显
( 10 只 ) K 值为。 . 0 5 6士 。 . 0 32 , 经统计学处理 , p < 。 . 05 两组差别显著 , 说明红绿层孔
菌多糖对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能有明显的刺激作用 。
五 、 对小赢肝 、 脾及胸腺重量的影响
将进行凝集素含量测定的 I OR小鼠 , 称体重 、 放血致死后 , 立即剖 腹 取 肝 脏 、 脾
脏 、 胸腺放人生理盐水中 , 用滤纸吸干血水后立即称重 。 结果见表 3
衰 3 红缘层孔 , 多抽对 I C R小限肝 、 碑及脚膝 , l 的形晌
动 物 分 组
幸
检 测 项 目 p 值
给 药 组 对 照 组 派
肝脏重 (功 g /1 09体重 )
M士 S D
脾脏重 O n g /1 09体重 )
M士 S D
胸腺重 (功 g /1 09体重 )
M士 S D
3 9 3
.
3士 8 1 . 7 3 6 7 . 7士 5 7 . 0 P < 0 . 0 5
6 2
.
3 6士 4。 4 5 5。 1士 5 . 2 IK 0
.
0 5
1 4
.
8士 3 . 1 1 0 . 3士 2 . 2 P> 0 . 0 5
六 、 对四氯化碳 中毒小鼠转氨酶 ( S G P T ) 活性的影响 。
将体重 20 ~ 2 克小 白鼠随机分为三组 , 每组 10 只 。 第 1组为正常对 照 , 第 2 组 为
四氮化碳中毒对照组 , 第 3 组为给药组 。
给药组以 1 50 11艰 /墉沐重的剂量 , 给小鼠灌胃红绿层孔菌多糖液 , 每日一次 , 连续
给药 7 天 , 其余两组灌胃同体积生理盐水 。
于末次给药后 24 小时 , 给药组 、 四氯化碳中毒对照组均按 10 m l/ 翰体重剂量由腹腔
注射。 . 1% 0 0 14 豆油溶液 ,正常对照组注射同体积豆油 , 1 6小时后 , 对三组小白城摘眼
球取血制血清 , 按 K i n g 氏法测定谷丙转氨酶活性 ( 1 0。坦 l血清与基质液在 37 ℃条 件 下
份
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作用0 6分钟 , 每生成 1 户M丙酮酸为 1 个活性单位 ) , 结果见表 4 。
七 、 对磺澳酞钠 ( B S P ) 排泄的影响 。
小 白鼠分组 , 给药剂量及途径如前所述 。 连续给药 5 日 , 末次给药后 l 小时 , 2 ,
3 组腹腔注射。 . 1% 0 01 . 豆油液 (1 。。 l/ 橄体重 ) , l组注射同体积豆油。 1 61小时 后 , 给每
只小鼠由尾静脉注入 B S尸 ( 2。巾 1艰 /权体重 ) 溶液 。 20 分钟后 , 摘眼球取血制血清 。 取血
清。 . l m l 、 加 。 . 01 N H O1 5 m l ,用 7 21 型分光光度计于 5 2 o n 。 比色后 , 加入 ZN N a O H I 滴再
比色 。 以前后两次光密度读数之差代表血中B S P 滞留量 , (查标准曲线 , 将 O D值换算
成 B S P含量 ) , 侧定结果见表 4 。
呼 衰 4 红缘层孔菌多抽对 C C I ` 中. 小限 S G P T及 B S P排泄的形晌
S G P T ( u % )
M士 S D p 值
B 6 P (瑰 / 0 . 1m l )
M士 已D p 值
正 常 对 照 组
0 0 1 . 中毒组
给 药 组
2 0 5 士 1 7 1 . 8 2士 0 。 4 2
3 3 6士 3 4
P > 0
.
0 5
2 1 7士 1 3
。 3礴 1士 0 . 5 8
2
.
2 3 士 0 . 3 7
p <芝0 . 0 5
移
由表中数据可见 , 红绿层孔菌多糖可抑制由四氯化碳损伤肝细胞引起的小鼠血清谷
丙转氨酶活性的升高 , 也可以明显加快肝脏对 B s P的排泄作用 。
够
讨 论
据国内外报导已有百余种真菌多糖具有增强机体免疫机能 , 保护肝功能 , 及抗肿瘤
等生物学作用 。 我们从红绿层孔菌中提取了水溶性多糖 、 并对该多糖有无上述功能进行
了初步研究 。
在实验中 , 我们观察到红绿层孔菌多糖对小鼠单核亘噬细胞的吞噬功能有明显的刺
擞作用 , 可增加小鼠脾脏 、 肝脏的重量 , 刘四 氯化碳所致肝损伤具有一定的保护作用 。
以上结果提示 , 和云芝多糖 、 银耳多糖等植物多糖类似 , 红绿层孔菌多糖也是一种非特
异性的免疫增强药物 。
日本曾报导 ,裂纹层孔菌 ( F o卿 ` : i m o s u “ ) 、 扁平层孔菌 ( F o me s 即p zan a t u , ) 、
心腐层孔菌 ( F o m n , i妙 i ar i小 ) 的热水提取物能抑制瑞士小鼠皮下移植肿瘤 q 一 1 80 的
生长 ` , ’ 。 又据M a, 、小 , Y . Y 等报导 , 具有抑瘤作用的多糖如 : 香菇多糖 、 酵母多糖 、
获芬多糖等可使小鼠血清中 a 一 球蛋白和月一 球蛋白含量显著增加 〔 6 ’ . ’ 。
我们注意到 , 从红绿层孔菌 ( F o 盯·只 iP n ic ol a) 中提取的多糖可明显增加小显 a -
球蛋 白的含量 , 但对 召一 球蛋 白含觉无显著影响 , 此多糖是否也具有抗肿瘤作用 , 尚有
待注一步研究 。
1 1 4东 北 师 大 学 报 自 然 科 学 版 玛“ 年 分
、
, 考 文 蔽
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〔 8 〕 M a e d a , Y . Y . , e t a l : 尺 a ut r e 2 5 2 : 2 5 0 , 1 97 4
〔 9 〕 杨本文译 : 《生物活性天然物质》 , 人民卫生出版社 , 3 95 页 , 19 84 .
幸
S T U D I E S O F B I O L O G I C A L A C T IV E O F
P O L Y S A C C H A R I D E F R O M F O M E S P I N I C O L A
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