全 文 ：　　收稿日期: 2002-09-19
　　基金项目:湖北省“十五”重点科技攻关计划资助项目
( 2001AA204B03)
　　作者简介:李小定 ( 1968— ) 男 , 讲师 ,在职博士研究生。
灰树花多糖粗品与纯品的抗肿瘤作用和
对免疫功能的影响
李小定 ,　吴谋成 ,　曾晓波 ,　荣建华
(华中农业大学食品科技系 ,武汉 430070)
　　【摘　要】目的　比较灰树花多糖粗品 ( PGF)与纯品 ( PGF-1)的抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免
疫功能的影响。 方法:　采用 S180移植瘤模型 ,观察 PGF与 PGF-1的抗肿瘤效果 ,并进行免疫学指
标测定。 结果:　 PGF与 PGF-1有抑制 S180肿瘤生长的作用 ,并能显著增强荷瘤小鼠脾指数、巨噬
细胞吞噬功能、二硝基氟苯 ( DN FB)所致的迟发型超敏反应 ( DT H)、淋巴细胞转化能力、脾细胞抗
体生成能力和血清 IgM溶血素的含量 , PGF的抑瘤效果优于 PGF-1。 结论:　灰树花多糖粗品与
纯品具有抑瘤和免疫调节作用。
　　关键词: 　灰树花 ;　多糖 ;　抗肿瘤 ;　免疫功能
　　中图分类号: 　 R151. 41　　文献标识码:　 A　文章编号: 　 0512-7955( 2003) 01-0007-03
　　灰树花 (Grifola f rondosa )是一种生长在亚热
带至温带的食、药兼用真菌 ,在我国主要分布于河
北、吉林、广西、四川和福建等地 ,其性味“甘、平” ,有
“益气健脾、补虚扶正”的功效。 近年来 ,灰树花的保
健功能及药用价值已受到人们的重视 ,已证明灰树
花多糖是灰树花中主要的活性成分 [ 1, 2]。本研究探讨
灰树花粗多糖与均一多糖口服给药对小鼠肿瘤生长
的抑制作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。
1　材　料　与　方　法
1. 1　材　料
1. 1. 1　受试药物: 　灰树花粗多糖 ( po lysaccharide
o f Grifola frondosa , PGF)由本实验室自制。制备过
程:灰树花子实体加水煮沸浸提 ,过滤 ,浓缩 ,乙醇沉
淀 ,热水溶解 ,冷冻干燥得粗多糖 ( PGF)。 PGF经
DEAE-Sephadex A-25柱层析纯化得葡聚糖 PGF-
1,经柱层析及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析为均一多
糖 ,分子量 11× 104u。
1. 1. 2　试剂:　 DEAE-Sephadex A-25为 Pharma
-cia产品 , RPM I-1640培养基为 Gibco产品 , M T T
为 Amresco产品 , ConA为 Sigma产品 ,环磷酰胺
( Cy )为江苏恒瑞医药公司产品 ,其他试剂均为国产
生化试剂或分析纯试剂。绵羊红细胞 ( SRBC)由湖
北省卫生防疫站实验动物中心提供 ,鸡红细胞
( CRBC)采自健康成年公鸡。
1. 1. 3　动物:　雌性纯系昆明小鼠 ,体重 18～ 22 g,
由湖北省卫生防疫站实验动物中心提供。S180腹水瘤
种鼠 ,由武汉同济医科大学提供。
1. 2　方法
1. 2. 1　 PGF与 PGF-1对 S180小鼠的抑瘤作用及对
免疫器官重量的影响: 　取接种 7 d的种鼠腹水癌
细胞 ,用生理盐水制成细胞数为 1× 106个 / m l的细
胞悬液 ,以每鼠 0. 2 ml接种于小鼠右腋皮下 , 24 h
后随机分组 ,每组 8只 (表 1)。同时开始每日灌胃给
药 0. 2 ml。对照组用等量生理盐水灌胃 ,连续 9 d,
第 10 d眼眶取血后处死小鼠 ,摘取瘤块、胸腺、脾 ,
分别计算肿瘤抑制率 ,胸腺指数 ( mg胸腺重 /g体
重 ) ,脾指数 ( mg脾重 /10 g体重 )。
　　肿瘤抑制率 (% ) = (对照组平均瘤重—给药组平均瘤
重 ) /对照组平均瘤重× 100
1. 2. 2　巨噬细胞吞噬试验 [ 3]:　按腹腔巨噬细胞吞
噬 CRBC的方法测定。
1. 2. 3　迟发型超敏反应 ( DTH) [4 ]: 　用药第 5 d,
7营养学报 2003年第 25卷第 1期DOI : 10. 13325 /j . cnki . acta . nutr . si n. 2003. 01. 002
小鼠腹部去毛 ,用 1%二硝基氟苯 ( DN FB)丙酮麻油
溶液在去毛处均匀涂抹致敏 (每鼠 25μL) , 24 h后
同法加强致敏一次。致敏第 4 d用 10μL DN FB溶
液均匀涂抹右耳进行攻击 ,对照组同样涂耳但未致
敏。第 2 d处死小鼠 ,剪下左右双耳 ,用打孔器在双
耳相应部位各打一直径 8 mm的耳片 ,称重 ,以小鼠
左右耳片重量之差为肿胀度。
1. 2. 4　 T淋巴细胞转化试验:　 M TT法 [5 ]。
1. 2. 5　脾细胞抗体生成的测定: 　小鼠灌胃 5 d后
腹腔注射 0. 2 ml 20%的绵羊红细胞 ( SRBC) ,第 10
d取脾脏 ,常规制备脾细胞悬液 ,以 pH 7. 0的磷酸
缓冲液配成细胞浓度为 5× 109个 /L,试管中依次加
入脾细胞悬液 , 0. 4% SRBC和 1∶ 10的豚鼠血清各
1 ml, 37℃水浴 1 h后离心 ,取上清液 413 nm处比
色。
1. 2. 6　血清 IgG、 IgM溶血素 HC含量的测定: 　
取小鼠血清 10μl,分 2管 ,按文献 [6 ]操作 , 540 nm
处比色 ,分别计算 IgG和 IgM溶血素 HC的含量。
1. 3　数据处理
　　以 x±s表示 ,组间差异用 t检验 ,用 SAS软件
处理。
2　结　果
2. 1　PGF与 PGF -1对 S 180小鼠的抑瘤作用及对免
疫器官重量的影响 (表 1)
　　Table 1　Effect of PGF and PGF -1on tumor growth and thymus index , spleen index in S 180-bear ing mice ( x± s,n= 8)
Group
Dosage
( mg /kg )
Body w eight ( g)
Init ial Finial
Thym us index
(mg /g )
Spleen index
( mg /10g)
Tumor w eight
( g)
Tumor inhibit ion
rate (% )
Cont rol - 20. 36 27. 74 3. 82± 0. 55b 42. 54± 10. 81b 　　　 - -
S180 mice - 20. 55 23. 87 2. 06± 0. 65 92. 41± 14. 08 1. 44± 0. 34 -
Cy 20 20. 38 27. 56 2. 13± 0. 56 62. 14± 7. 73b 0. 82± 0. 32b 43. 06
PGF 50 20. 65 27. 23 3. 48± 0. 52b 120. 51± 24. 76a 1. 03± 0. 29a 28. 47
100 20. 53 27. 85 3. 79± 0. 73b 105. 93± 20. 40 0. 91± 0. 30b 36. 81
150 20. 35 27. 26 3. 61± 0. 64b 117. 16± 23. 68a 0. 88± 0. 33b 38. 89
PGF-1 50 20. 58 28. 01 2. 97± 0. 42b 103. 69± 18. 37 1. 11± 0. 35 22. 92
100 20. 34 27. 34 3. 66± 0. 61b 114. 08± 17. 92a 0. 95± 0. 33a 34. 03
150 20. 47 27. 58 3. 75± 0. 68b 98. 84± 16. 29 0. 92± 0. 34b 36. 11
　　 a P < 0. 05, b P < 0. 01 compared wi th S180 mice group
　　在实验剂量下 , PGF与 PGF-1对 S180均有抑制
作用 ,且呈现剂量效应关系 , PGF的抑瘤效果优于
PGF-1。两种多糖还能显著增加小鼠胸腺重量 ,与肿
瘤对照组相比 ,差异显著 (P < 0. 01)。小鼠脾脏重量
也略有增加 ,但不明显。Cy的抑瘤效果最好 ,但同时
显著降低小鼠脾脏重量。
2. 2　对S 180小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 (表 2)
　　Table 2　Effect of PGF and PGF -1on phagocytosis of
macrophage in S 180-bearing mice ( x± s,n= 8)
Group
Dosage
( mg /k g)
Phagocytic
rate (% )
Ph agocytic
index
Cont rol - 43. 54± 4. 32b 2. 41± 0. 24b
S180 mice - 33. 17± 5. 56a 1. 79± 0. 18a
Cy 20 34. 58± 6. 87a 1. 96± 0. 23a
PGF 50 52. 21± 4. 14ab 2. 56± 0. 45b
100 47. 93± 12. 26b 2. 23± 0. 28b
150 51. 79± 10. 77b 2. 42± 0. 21b
PGF-1 50 52. 34± 6. 31ab 2. 12± 0. 19b
100 55. 87± 13. 48b 2. 73± 0. 26b
150 58. 22± 9. 45ab 2. 28± 0. 21b
　　 aP < 0. 01 com pared w ith cont rol group; bP < 0. 01 compared
wi th S180 mice g roup
　　肿瘤对照组与 Cy组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率
与吞噬指数均明显低于正常小鼠 ,两种多糖在 50～
150 mg /kg剂量下明显提高 S180小鼠腹腔巨噬细胞
吞噬率与吞噬指数。
2. 3　对 S180小鼠细胞免疫功能的影响 (表 3)
　　Table 3　Effect of PGF and PGF -1on T lymphocytes
and DTH response in S 180-bearing mice ( x± s,n= 8)
Group
Dosage
( mg /kg)
M TT( OD) D TH ( mm )
Cont rol - 0. 441± 0. 018b 10. 25± 2. 36b
S180 mice - 0. 255± 0. 016a 5. 28± 1. 57a
Cy 20 0. 268± 0. 019a 9. 71± 1. 22b
PGF 50 0. 322± 0. 018ab 9. 87± 3. 12b
100 0. 367± 0. 016ab 12. 45± 3. 37b
150 0. 395± 0. 022ab 10. 55± 2. 96b
PGF-1 50 0. 318± 0. 017ab 9. 27± 1. 89b
100 0. 339± 0. 020ab 11. 02± 2. 56b
150 0. 377± 0. 028ab 11. 74± 2. 87b
　　 aP < 0. 01 compared wi th cont rol g rou p; bP < 0. 01 com pared
w ith S180 mice group
　　各荷瘤鼠组的淋巴细胞转化能力均明显低于正
常对照组 ,而各多糖剂量组均明显高于肿瘤对照组
( P < 0. 01)。肿瘤对照组与 Cy组的耳廓肿胀度显著
低于正常对照组 ,而各多糖剂量组均显著高于肿瘤
8 Acta Nutrimenta Sinica , Mar. 2003, Vo l. 25 No. 1
对照组 ,与正常对照组相比无显著性差异。
2. 4　对 S180小鼠体液免疫功能的影响 (表 4)
　 　 Table 4　 Effect of PGF and PGF -1 on antibody
formation in splenic cells and serum hemolysin in S 180-
bearing mice ( x± s ,n= 8)
Group
Dosage
( mg /k g)
OD413 HCIgG HCIgM
Cont rol - 0. 642± 0. 022b 221± 78 677± 135b
S180 mice - 0. 345± 0. 020a 153± 43 332± 84a
Cy 20 0. 401± 0. 021a 151± 38 295± 92a
PGF 50 0. 428± 0. 025ab 170± 45 576± 121b
100 0. 551± 0. 033ab 168± 51 538± 116b
150 0. 524± 0. 027ab 164± 42 622± 130b
PGF-1 50 0. 474± 0. 031ab 158± 32 528± 108b
100 0. 523± 0. 033ab 155± 38 610± 112b
150 0. 551± 0. 041ab 163± 41 534± 103b
　　 HC: hemolysin aP < 0. 01 com pared w i th con trol g roup;
bP < 0. 01 compared w ith S180 mice group
　　各荷瘤鼠组的脾抗体生成能力均明显低于正常
对照组 , 多糖各剂量组均明显高于肿瘤对照组。各
肿瘤组的 IgG与 IgM溶血素含量均低于正常对照
组 , PGF与 PGF-1各剂量组的 IgM溶血素含量接
近正常对照组 ,且明显高于肿瘤对照组 ( P < 0. 01) ,
而 IgG溶血素的差异并不明显。
　　上述实验表明 ,灰树花多糖粗品与纯品均有抑
制 S180肉瘤生长的作用 ,同时能提高荷瘤小鼠免疫
器官的重量 ,恢复荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的活性 ,显
著增强荷瘤小鼠淋巴细胞增殖能力、且能促进
ConA诱导的荷瘤小鼠淋巴细胞增殖反应和脾抗体
形成能力 ,明显增强 ( DT H) ,显著提高荷瘤小鼠血
清溶血素含量。 PGF对 S180肉瘤的抑制作用略优于
PGF-1,这是由于 PGF中可能存在比 PGF-1更具
抑瘤活性的多糖 ,且各种活性多糖也可能具有协同
作用。作为广谱性的免疫调节促进剂 ,真菌多糖具有
多种生物活性 ,其中一些已作为癌症的辅助治疗剂
或抗病毒药应用于临床 ,并成为寻找新药的重要资
源。 灰树花多糖表现出较强的抗肿瘤作用及免疫增
强活性 ,有必要对其进行深入研究。
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EFFECTS OF CRUDE AND PURIFIED POLYSACCHARIDE
FROMGRIFOLAFRONDOSA ON TUMOR GROWTH AND IMMUNE
FUNCTION IN MICE
LI Xiao-ding , WU Mou-cheng , ZEN G Xiao-bo , RON G Jian-hua
(Department of Food Science and Tech nology , Huazhong A gricultural Universi ty , Wuhan 430070, China)
　　【Abstract】　 Objective: To compa re the anti-tumor activi ty and immune enhancing effect o f crude
( PGF) and puri fied ( PGF-1) polysaccha ride f rom Gri fola frondosa. Methods: S180 -bearing mice w ere used
as animal model. The ef fects on tumor w eigh t and immune function w ere investigated. Results: PGF and
PGF-1 showed inhibi to ry activity on S180 g row th. They could also increase weight of immune organs and
improved the phagocy tic function, DTH response, lymphocy te prolifera tion, antibody forma tion in splenic
cells and content of serum HCIgM markedly. PGF w as bet ter than PGF-1. Conclusion: Both PGF and PGF-
1 can inhibit S180 tumor g row th and enhance immune function in S180-bea ring mice.
　　Key words:　Grifola f rondosa;　 polysaccharide;　ant i-tumor;　 immune function
9营养学报 2003年第 25卷第 1期