全 文 ：云 南 中 医 中 药 杂 志
* 基金项目:辽宁省博士启动基金项目:黑参抗肿瘤药效物质基础研究(NO:20121135)
作者简介:袁媛(1980 －)，女，辽宁人，博士后，副研究员，研究方向:生药学，E － mail:yuanyuanvictory@ 163. com
·实验研究·
超高液相色谱法分析人参新炮制品—黑参制作过程中人参皂苷成分变化*
袁 媛1，2，徐荣培2
(1. 辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 110034;2. 韩国大田大学，韩国 大田 300716)
摘要:目的 采用超高效液相色谱法(UPLC)分析人参新炮制品—黑参制作过程中人参皂苷的含量变化。方法 色谱柱:
Waters BEH C18 色谱柱(2. 10mm × 50mm × 1. 7μm);流动相:以乙腈 － 水梯度洗脱;检测波长:203nm;柱温:35℃;流速:1. 0
mL /min;进样体积:10μL。结果 在选定的色谱条件下，从黑参不同蒸制温度、不同蒸制次数的制作过程中化学成分发生了变化。
结论 实验中所建立的方法稳定、可靠，为黑参的标准制作工艺、质量评价控制提供了依据。
关键词:黑参;指纹图谱;UPLC
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1007 － 2349(2016)01 － 0062 － 02
Analysis of Ginsenosides Composition Changes in the Making ofBlack Ginseng
by Ultra － high Performance Liquid Chromatography(UPLC)
YUAN Yuan1，2，XU Ｒong － pei2
(1. Liaoning Institute of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica，Shenyang 110034，Liaoning;
2. Daejeon University，Daejeon 300716，South Korea)
【Abstract】Objectives:To analyze the content changes of ginsenosides in the process of makingBlack Ginseng by UPLC. Methods:
Chromatographic column was Waters BEH C18 (2. 10mm × 50mm × 1. 7μm)and mobile phase was acetonitrile － water gradient elution，
with 203nm of detection wavelength，at 35℃ of column temperature，in 1. 0mL /min of flow rate and 10μL of sample injection volume. Ｒe-
sults:Under the selected chromatographic conditions，the chemical compositions ofBlack Ginseng changed when processed by different
steamed temperatures and times. Conclusion:The method established in the experiments is stable and reliable，providing a basis for stand-
ard production process and quality control to makingBlack Ginseng.
【Key words】Key words:Black Ginseng，fingerprint，UPLC
人参(Panax ginseng C. A. Meyer)为五加科植物人参的干
燥根及根茎，其性平，味甘、微苦，微温，归脾、肺、心、肾经，具
有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津止渴、安神益智之功
效，用于体虚欲脱、肢冷脉微，脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、
内热消渴、气血亏虚、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷［1］。现代
临床医学和药理学研究表明，人参具有提高机体免疫力、抗疲
劳、抗肿瘤、降血糖以及抗炎等多种活性，因此在医学及养生
方面具有可观的价值。近 5 年，各种各样的人参炮制品作为
功能食品用于饮食文化中，以往有白参、红参，现又出现一种
人参新炮制品—黑参，它是将人参反复蒸制烘干而得到的一
种人参深加工品［2 － 4］。在黑参的制作过程中，不同的蒸制温
度和不同的蒸制次数，其化学成分也会随之改变。为了探讨
制作过程中成分的变化，本实验分别测定按课题组前期研究
中的制作方法制得的黑参的 UPLC图谱。
1 实验仪器与试药
1. 1 仪器 Waters ACQUITY UPLC 超高液相色谱仪系统;
ＲE － 52 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);KQ － 250B 型
超声波清洗器(大连桦通器械公司);十万分之一电子天平
(德国 Sartorius公司);Milli － Q Ｒeference超纯水系统制备(德
国 Merck公司);SIGMA3 － 18K低温高速离心机(德国 SIGMA
公司)。
1. 2 试剂 乙腈(色谱纯，德国 Fisher公司);水为超纯水，其
它试剂均为分析纯。
1. 3 试药 白参购买于辽宁省中医药研究院，黑参按课题组
前期研究自制得到。
2 实验方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备 分别取制得的黑参粉末(过四号
筛)，各约 0. 5 g，精密称定，分别精密加入甲醇 25 mL，称定重
量，密塞，超声处理(功率 100W，频率 40KHz)45 min，放冷，再
称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过 0. 22 μm 微孔滤
膜，取续滤液，即得。
2. 2 标准品溶液的制备 精密称定人参皂苷 Ｒe 对照品
26 2016 年第 37 卷第 1 期
DOI:10.16254/j.cnki.53-1120/r.2016.01.031
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1. 16 mg，置于 5 mL容量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度，摇
匀，即得，过 0. 22 μm微孔滤膜，备用。
2. 3 色谱条件 Waters ACQUITY UPLC BEH C18(2. 1 mm ×
50 mm，1. 7 μm)色谱柱;柱温:30℃;样品管理器温度:15℃;
流速:0. 3 mL·min －1;进样量:4 μL;流动相 A(水)—B(乙
腈)，梯度洗脱，洗脱程序见表 1。
表 1 梯度洗脱程序
时间(min) 流动相 A(%) 流动相 B(%)
0 ～ 9 95 ～ 75 5 ～ 25
9 ～ 15 75 ～ 55 25 ～ 45
15 ～ 24 55 ～ 25 45 ～ 75
24 ～ 35 25 ～ 10 75 ～ 90
35 ～ 43 10 ～ 0 90 ～ 100
43 ～ 50 0 ～ 95 100 ～ 5
图 1 供试品溶液自动进样色谱图
2. 4 UPLC图谱测定
2. 4. 1 线性关系考察 精密吸取“2. 2”项下对照品溶液 2、3、
4、6、8μL，自动进样器进样，测定峰面积，以各色谱峰峰面积积
分分值(Y)对其质量浓度(X)进行线性回归，线性方程为 Y =
6195. 2X + 26649，Ｒ2 = 0. 9936，结果表明质量浓度与峰面积成
良好的线性关系。
2. 4. 2 精密度实验 吸取 Ｒe对照品溶液 2μL，按“2. 3”色谱
条件，连续进样 6 次，峰面积的 ＲSD 为 0. 45%，表明仪器精密
度良好。
2. 4. 3 重复性实验 取不同黑参样品 0. 5 g各 6 份，按“2. 1”
项下方法制备供试品溶液，按“2. 3”色谱条件测定，峰面积的
ＲSD分别为 0. 87、0. 96、1. 24、0. 43、0. 58、0. 61、0. 74%，表明
该方法重复性好。
2. 4. 4 稳定性实验 按“2. 1”项下取不同黑参供试品溶液各
5 份，在 0、2、4、6、8h 进样，按“2. 3”色谱条件测定，峰面积的
ＲSD分别为 0. 59、0. 75、0. 63、1. 01、0. 97、0. 24、0. 76%，表明
不同黑参的供试品溶液 8h内稳定。
2. 5 结果 分别精密吸取供试品溶液，自动进样，记录色谱
图，结果如图 1。
3 讨论
从上述图谱中可以看出，随着蒸制次数的增加，非极性成
分逐渐增多，极性成分逐渐减少。有研究表明，黑参比红参、
白参有更强的抗肿瘤、抗炎、提高免疫力等生物活性，这可能
与黑参的特有成分有关［5］。因此，寻找黑参特有的标志性成
分还需进一步深入研究。
参考文献:
［1］国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 . 一部［S］．北京:化工出
版社，2010:8.
［2］袁媛，徐荣培 . 人参新炮制品—黑参的研究进展［J］．中华中医药
学刊，2013，31(11):2379 － 2381.
［3］袁媛，于艳，徐荣培 . HPLC法测定 19 个人参新炮制品—黑参样品
中的人参皂苷含量［J］．辽宁中医杂志，2013，40(10):1993 － 1995.
［4］Seo YB. High value － added health food of black ginseng. Korea，2008，
35 － 36.
［5］Seo YB. Standard manufacture process of red ginseng by nine － time
steaming and nine － time drying. Korea，2010，40 － 46.
(收稿日期:2015 － 11 － 11)
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