全 文 ：干地黄提取物 A对胃猫膜血流 t 的影响
崔 颖 王竹立 叶美红
摘要 目的 探讨干地黄提取物 A对胃钻膜血流的影响及其机制 。 方法 分别向正常大鼠 、 辣椒素去
神经大鼠和阿托品阻断胆碱能神经大鼠胃内灌注干地黄提取物 A液 , 用激光多普勒徽循环血流计浏定 胃钻
膜血流圣 。 结果 干地黄提取物 A 液使正常大鼠胃私膜血流黄明显增多 ,但不能使去神经大鼠和阻断胆碱
能神经大鼠 胃私膜血流童增多。 结论 干地黄通过辣椒素敏感神经元和胆碱能神经介导 , 引起胃钻膜血流
童增多。
关键词 干地黄 ;细胞保护 ;辣椒素 ; 胃钻膜血流量
E布eC t or E Xt ar c t A of D ir ed F助司恤 R e加口 a . 吐a e on G 侧 st d c M u c倪川 B I侧〕d n o w C UI Y i n g , WA N G Z h u 一11 ,
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一
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A加吐ar c t o 材ec it v e oT ex P l o er ht e e fe e t an d i st m e e han is m o f e x t ar c t A of idr e d R a d ix R e hm an n iae
( DR R )
o n 脚itr e m u e o sal bl o d if o w . M e ht 以坛 E x actr t A of D R R w as ig v e n b y gas tm , v娜 t o n o mr al , e a p s a i -
e in d e n e vr a t ed
, 咖 p i n e b l o e k ed ac e tyl e h o l i n ig e asrt . G朋 itr c m u e o sal b l以妇 fl ow w as d e te mr in e d b y las e r d o Pp le r
m i e ocr i比过 a ti o n h e m 以七o m o gr a Ph
.
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K e y w o r d s 面 e d R a d ix R e hm amr iae ; e yt OP or et e it o n ; e叩 s ia e i n ; g as itr e m u e os al b il 洲 x l fl ow
地黄 (双e入anI n 她 g之以 iosn a Rad 议 . ) 为玄参科植
物 , 根据炮制方法的不同分为鲜地黄 、 干地黄和熟地
黄 。 本实验室曾经报道 , 干地黄煎剂或提取物 A 能有
效抑制胃酸分泌及幽门结扎型胃溃疡的发生 ,对无水
乙醇 、 NaO H 、 HCI 、消炎痛和冷束缚应激等多种因素引
起的急性胃猫膜损伤有预防作用 ,并能促进已形成的
无水乙醇和慢性乙酸性 胃溃疡的愈合 。 地黄的保护
作用起效快 ( 1m in 起效 ) ,持续时间较长 ( Zh 以上 ) ,其
作用的发挥有赖于与胃肠猫膜表面的直接接触 ,可能
由乳膜内辣椒素敏感的初级传人神经元介导 〔’ 一 ’ ] 。 本
研究旨在进一步探讨干地黄胃猫膜保护作用与胃内
辣椒素敏感神经元 、 胆碱能神经元 及 胃猫膜血流
( GM B F )之间的关系 。
材料与方法
基金项目 :广东省中医药管理局基金项目 ( No . 98 38 0)
作者单位 :广州中山大学北校区墓础医学院生理学教研室 (广州
5 1X() 8 9 )
通讯作者 : 王竹立 , T e l : 02 0 一 87 3 306 25 , Fax : 02 0 一 8 7 3 3肠2 5 , E -
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: 切艺】w 目@ ot m . c om
1 材料
1
.
1 动物 SD 纯种 2 级大 白鼠 , 体重 ( 150 士
20 ) g
,雌雄各半 。 由本校实验动物中心提供 。
1
.
2 药物及试剂 20 % 干地黄提取物 A 的提
取 :称取干地黄 10 9 ,稍加冲洗后切成 Zm m x s m m 小
块 ,加清水共 1 50 而 , 加热煮沸 1 . 5 h ,用 6 层纱布过
滤 ;将残渣加水至 1 s o d ,加热煮沸 hl 过滤 ,如是连
续 3 次 。 将 4 次所得滤液分别加热浓缩至 150 ml 后混
合均匀 ,再浓缩至 l o ml ,制成浓度为 1 . 0扩而 的水煎
剂 。 将 g so ml 无水乙醇和 145 耐 双蒸水混匀后 , 缓慢
加人 10 耐 煎剂中不断搅拌 30 m in 。 密闭容器 , 使乙
醇保持在 so % ,静置 7 2 h 。 期间再搅拌 2 次 , 每次约
or m in
。 经滤纸过滤后 ,将醇溶部分在水浴中加热蒸
发去除乙醇 ,至体积约为 45 时 ,再加双蒸水至 50 ml 制
成浓度为 2 0 % 的 A 液 。 1 , 25 % 辣椒素溶液 :参照阎
长栋等 e[] 方法制备 : 精确称取 1 . 2 5 9 辣椒 素粉末
( V g 13 0
,
5 1,
a公司产品 ) , 加人 10 m l 吐温名0 ( S i g m a
公司产品 )溶液里搅拌 s m in ,待其充分溶解后再加人
ro 而 无水乙醇和 so 而 生理盐水搅拌 s mi n , 即得到澄
清透明的 1 . 25 % 辣椒素溶液 。
1
.
3 实验仪器 P e ir if ux 4仪 ! 1 型激光多普勒循环
血流计和 4 18 型 DL F 光纤探头 (瑞典 FE IR M ED 公司 ) 。
D H
一
150 动物人工呼吸机 (浙江大学医学仪器厂 ) 。
2 动物造模 、分组
2
.
1 动物造模 去神经大鼠模型制作 : 采用文
献 [ 6 ]方法 。 取 1 . 2 5% 辣椒素总剂量 125 m岁 k g , 分 3
天皮下注射 ,每天的剂量分别按总剂量的 1/ 5 、 2乃 和
2乃 给予 , or 天后以 0 . 01 % 辣椒素溶液滴眼 , 去神经
大鼠无反应 ;若没有去神经的大鼠则出现显著的前肢
擦摸眼部反应 , 为不符合要求大鼠 , 应被淘汰掉 。 阻
断胆碱能神经大鼠模型 :皮下注射阿托品 0 . o 25 m岁
10 9
,
3 o m i n 后用于实验 。
2
.
2 动物分组 将 38 只大鼠随机分为 5 组 。 空
白对照组 ( n = 6 ) :手术后不注射任何药物或试剂 , 记
录 3o m i n 的 GM BF ;生理盐水对照组 ( n 二 9 ) :通过细软
管向胃内注人 37 ℃ 0 . 9 % 生理盐水 0 . 3 m F l o g ;A 液
组 ( n 二 10 ) :通过细软管向胃内注人 37 ℃ 20 % 干地
黄提取物 A 液 0 . 3 m F l o g ;去神经加 A 液组 ( n 二 7 ) :
用去神经大鼠 ,通过细软管向胃内注人 37 ℃ 20 % 干
地黄提取物 A 液 0 . 3 m F l o ;g 阿托品加 A 液组 ( n =
6 )
:用阿托品阻断大鼠胆碱能神经 , 通过细软管向胃
内注人 37 ℃ 20 % 干地黄提取物 A 液 0 . 3m l/ l o g 。
上述各实验组与对照组均同时进行 , 以保证实验
条件的齐同性 。
3 胃勃膜血流量测定 参考段建中等v[] 所用方
法改良而成 。 大鼠禁食 24 h , 自由饮糖盐水 ,实验前 h2
禁水。 20 % 乌拉坦 0 . 6m F l o g 腹腔麻醉 , 仰卧固定 ,
用恒温灯维持肛温于 36 一 37 ℃ ,气管切开 ,插管接呼
吸机后开腹 。 在 胃大弯腺膜交界处的膜部针刺一小
孔 , 插人直径 l m m 的细软管至胃窦部 , 同时将 LD F 光
纤探头插人胃内 ,轻轻固定于离腺膜交界约 I c m 的胃
大弯腺胃部 , 测量胃勃膜血流量 ,待血流稳定后开始
实验 。 每隔 0 . 25 采样 1 次 。 血流量单位以灌注单位
( p U )表示 , l p U 约等于 0 . I iln · m i n 一 ’ · 10 9 一 ’ 组织 。
每个时间点取连续测量的 10 个读数的平均值为该时
间点所得的 UP 值 。 o m in 的 UP 值是未给予处理因素
的 UP 值 , 以后每 s m in 所测的 UP 值则为给予处理因
素以后所测的 PU 值 ,持续观察 30 m in 。 通过下式将
UP 值转化为 UP 值变化百分率 : UP 值变化百分率 =
(每一时间点的 P U 值/ Om in 的 UP 值 ) x 10 % 。
4 统计学方法 所有数据均经过 S邢 5 1 . 0 软
件包处理 。 有关 UP 值百分率的资料是具有一个重要
因素的双因素计量资料 , 组内采用多个相关样本的非
参数检验 ( irF ed m an eT st ) 和 K 组秩均值的多重 比较 ,
组间采用独立样本均数间多重比较 , 用 比D 一 t( 晚 as t
5 1, iif
e a n t Di fe er
n e e 一 t )检验 。
结 果
各组大鼠不同时间胃猫膜 GM B F变化 见表 1。
空白对照组 GM B F在 30 m in 内保持平稳 ,上下波动不
明显 , 差异无显著性 。 生理盐水对 照组 G M B F 在
30 m in 内无显著变化 ,与空白对照组比较 , 差异无显著
性 。 A 液组 GM B F 在给予 A 液后迅速升高 , 在 s m in
和 or m in 时比较明显 ,与本组 o m in 时比较差异均有显
著性 ; 30 m in 时回复到正常水平 ;与生理盐水对照组比
较差异有显著性 ,说明 A 液能使 G M B F升高 。 去神经
加 A 液组 30 m in 内 G M B F 无明显变化 ,但与 A 液组比
较差异有显著性 。 提示 A 液升高 G M B F 作用通过辣
椒素敏感传人神经元介导 。 阿托品加 A 液组 30 m in
内 G M B F 保持平稳 , 与 A 液组比较差异无显著性 , 提
示 A 液促进 G M B F 增加的作用可能部分通过迷走胆
碱能神经介导 。
讨 论
从实验结果可 以看到 , 给大鼠灌 A 液后 G M BF 迅
速升高 , or m in 即达高峰 , 持续 30 而 n 回复到正常 ,说
明干地黄有刺激 GM BF 增多作用 。 在辣椒素 “ 去神
经 ” 后的大鼠 ,用 A 液灌胃 ,不再能引起 GM B F 升高 ,
衰 i 各组大鼠不同时间胃戮膜 GM B F测定结果比较 (% ,牙 士 , )
组 别 n GM B F
30 (而 n )
空白对照
生理盐水对照
A 液
去神经加 A液
阿托品加 A液
! 0
.
0
士 O
! 0
.
0
士 O
10
.
0
士 O
10
.
0 士 O
10
.
0 土 O
9
.
X()
土 3 . 16 1X()
.
5 0 土 4 . 93 1X()
.
8 3 土 3 . 肠 10 1 . X() 土 2 . 4 5 1X() . 3 3 士 4 . 2 3
9 3
.
X() 土 10
.
1 1
.
92
.
5 6 士 10 . 1 1 . 9 1 . 1 1 土 19 . 9 3 . 87
.
1 1 土 15 . 2 7 . 8 8. X() 土 14
.
18
.
l 3 0
.
4()
士 17 . 3 0△ 13 2 . 90 土 20
.
15△ 124
.
7 0 土 3 1 . 0 3 1 l 1 . 9() 土 2 3
.
7 0 102
.
20
士 16 . 18
9 8
.
2 1 士 13 . 5 4 . 9()
.
4 士 1 1
.
8 8
.
84
.
63 土 16
.
0 2 80
.
5 6 士 17 . 8 5 . 7 9 . 29 土 17
.
24
105
.
8 8 士 9 . 55 10 8 . X() 土 23
.
49 9 8
.
5 3 土 15 . 7 7 10 1 2 3 土 15 . 64 1肠 . 9 2 土 18 . 4 2
9 7
.
17 士 6 . 24
8 6
.
2 2 t 16
.
9()
.
9 3
. 侧〕土 11 3 9
7 5
.
3 7 士 2 1 . 7 2
107
. 伪 土 20 . 2 6
注 :与 A 液组比较 , . p < 0 . 05 ;与本组 。而 n 比较 , △ p < 0 . 05
提示干地黄升高 G MB F 作用有赖于胃勃膜内辣椒素
敏感的初级感觉神经元介导 。 大量的文献资料证明 :
辣椒素敏感的感觉传人神经元兴奋 , 能引起 GM B F 增
多 ;而 G M B F 增多能减轻无水乙醇等对胃猫膜的伤
害〔吕.91 。 结合本实验室关于干地黄具有快速保护胃猫
膜 、大大减轻无水乙醇性胃猫膜损伤等作用的报道 4[, , 〕 ,
以及本实验结果 ,我们推测 :干地黄及其提取物 A 液 ,很
可能通过兴奋胃猫膜内辣椒敏感的感觉传人神经元 ,引
起 MG B F 升高 ,进而保护胃猫膜免受损伤 。
用阿托品阻断胆碱能神经后 ,给大鼠灌注 A 液 ,
G M BF也不再升高 ,提示胆碱能神经也参与了 A 液升
高 GM B F 作用 。 一般认为 , 辣椒素敏感神经元介导的
GM B F增多 ,主要与肤类递质的作用有关 ,与胆碱能神
经关系不大 。 因为用 M 一胆碱能受体阻断剂和 a 、 p 肾
上腺素能受体阻断剂均不能阻断胃内灌注低剂量辣
椒素引起的 G M B F 增多效应 〔`“ 1 。 本实验研究却发现 ,
胃内灌注 A 液引起的 GM B F 增多 , 既可被大剂量辣椒
素 “ 去神经 ” 所阻断 ,又可被 M 一胆碱能受体阻断剂阿托
品所阻断 ,提示在辣椒素敏感神经元与胆碱能神经之间
可能存在某种联系 ,具体机制有待进一步研究 。
参 考 文 献
1 W an g z L
,
u L 践e st of R a d i x R e玩吸n iae on g朋州。 ac id 10
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(本文编辑 李焕荣 )
干地黄提取物 A 保护胃猫膜作用的形态学研究
及与热休克蛋白的关系
王竹立 崔 颖 叶美红
摘要 目的 观察干地黄提取物 A 对胃私膜的保护作用 ,并探讨其与 胃钻膜内热休克蛋白含蚤之间的
关系。 方法 用常规 HE 染色法观察胃私膜损伤深度 , 用免疫组化方法和 图像分析系统观察胃钻膜 H S种O
阳性细胞比值 。 结果 ( l) 干地黄提取物 A 液灌胃可引起 胃钻膜下血管充血扩张 ,但不引起 H S种 0 合成增
多 ; ( 2 )提前给予干地黄提取物 A 液可明显减少无水 乙醉所致的胃钻膜损伤指数和损伤深度 ; ( 3) 提前给予
干地黄提取物 A 液可使损伤所致的 H S种 0 合成减少 。 结论 干地黄提取物 A 有明显的 胃拈膜保护作用 ,
其机制可能与 H S种 0 无关 。
关扭词 干地黄 ;细胞保护 ;热休克蛋白 ; 胃私膜形态
M O印h ol 嗜因 Sot d y of E xt ar c t A of D ir ed P渔d改 eR 如nI 助川 a e in rP o etC 廿gn G as itr e M uc 哪 助d I st R e l a ·
基金项目 :广东省中医药管理局基金项 目 ( N O . 9 8 3 80)
作者单位 : 中山大学基础医学院生理学教研室 (广州 51 0 8 9)
通讯作者 : 王竹立 , eT l : 02 0 一 87 3 06 25 , F ax :似0 一 8 7 3 肠25 , E ~ m越1渊习w目@ omt
.
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