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收稿日期：２０１４－０４－１５；修回日期：２０１４－０４－２８
古钩藤提取液对小鼠急性肝损伤的保护作用①
董妹灵，潘乔丹，阮艳娥，黄元河②，方晓燕，陆丹丹
（右江民族医学院，广西　百色　５３３０００　Ｅ－ｍａｉｌ：１３００６９６８０５５＠１６３．ｃｏｍ）
摘　要：目的　研究古钩藤提取液对四氯化碳（ＣＣｌ４）所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法　将昆明种小白鼠分成６
组：四氯化碳损伤模型组、联苯双酯组（０．１０ｇ·ｋｇ－１）、正常对照组及古钩藤提取液的高、中、低剂量组（３０、２２．５、１５ｇ·
ｋｇ－１）。古钩藤提取液高、中、低剂量组每日灌胃给药１次，共７ｄ，末次灌胃给药后除正常组外，其余所有小鼠予腹腔注
射０．１５％ＣＣｌ４２０ｍｌ·ｋｇ－１１次，２０ｈ后处死全部小鼠，收集肝组织及血清标本，测定小鼠血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）和
天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）活性；测定肝匀浆中丙二醛（ＭＤＡ）含量和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；计算肝指数并同时对肝
组织进行病理学检查。结果　古钩藤提取液高、中剂量组能降低ＣＣｌ４ 所致肝损伤小鼠的血清 ＡＬＴ、ＡＳＴ值升高（Ｐ＜
０．０１），降低肝匀浆中 ＭＤＡ的含量（Ｐ＜０．０１），增强ＳＯＤ的活性（Ｐ＜０．０１），具有明显的剂量依赖性。通过病理学切
片观察，古钩藤提取液高、中剂量组能显著改善肝组织的病理变化（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论　古钩藤提取液对
ＣＣｌ４ 造成的小鼠急性肝损伤具有显著的保护作用。
关键词：古钩藤；植物提取液；四氯化碳；药物性肝损伤；细胞保护
中图分类号：Ｒ２８５．５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１－５８１７（２０１４）０３－０３５８－０３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５８１７．２０１４．０３．０１６
　　古钩藤（Ｃｒｙｐｔｏｌｅｐｉｓ　ｂｕｃｈａｎａｎｉ　Ｒｏｅｍ．ｅｔ　Ｓｃｈｕｌｔ），又名海 上霸王、白叶藤、牛角藤、大暗消等等，为萝藦科植物。具有舒
—８５３—
２０１４年　　　　　　　　　　　　　右江民族医学院学报　　　　　　　　　　　　　　第３期
①
②
基金项目：自治区级大学生创新训练计划项目（ＱＪＣＸ２０１３２６）；中医药公共卫生专项（财社［２０１１］７６号）及中医药行业科
研专项（２０１２０７００２）
通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｘｈｙｕａｎｈｅ＠１６３．ｃｏｍ
筋活络、消肿止痛、解毒等功效，用于治疗腰痛、腹痛、跌打损
伤、骨折、痈疮、癣等疾病［１］。在泰国，常用古钩藤的茎来治疗
炎症，包括关节炎、肌肉疼痛和关节疼痛［２］。实验证明：古钩藤
醇提液具明显的镇痛作用，其水提液对小鼠实验性高血糖有一
定的降血糖作用［３－４］；国外研制含古钩藤根提取物的肝保护剂
对肝毒素（扑热息痛、Ｄ－半乳糖胺和四氯化碳）引起的动物和
人肝损伤具肝保护作用，无副作用［５］，但古钩藤枝叶对肝损伤
修复的研究并无报道。因此，本研究小组采用微波－超声协同
法提取古钩藤，通过小鼠试验研究古钩藤提取液对小鼠肝损伤
的修复试验，旨在对其进一步开发和临床应用提供一定的理论
依据。
１　材料与方法
１．１　古钩藤提取液和试剂　古钩藤采自广西百色，经本院生
物学教研室黄元河老师鉴定为古钩藤，实验用其枝叶，干燥粉
碎后备用。样品的制备：称取古钩藤粉末２．０ｋｇ，加７０％乙醇
采用微波－超声协同提取２次，每次５ｍｉｎ，浓缩提取液，得浸
膏，加水悬浮经石油醚脱脂后浓缩干燥，得古钩藤提取物５０．５８
ｇ。天冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）试剂盒、丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）试剂
盒、丙二醛（ＭＤＡ）试剂盒、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）试剂盒和考
马斯亮蓝试剂均购自于南京建成生物工程研究所；四氯化碳
（分析纯）购自于上海凌峰化学试剂有限公司，批号１２０２１５，使
用时用花生油配制成０．１％的溶液；联苯双酯滴丸：广州星群
（药业）股份有限公司，批号ＩＦ４００６７。
１．２　仪器　ＴＵ－１８００紫外可见分光光度计（北京普析通用仪
器有限责任公司），ＸＨ－３００Ａ微波超声波组合合成萃取仪（北
京祥鹄科技发展有限公司），ＦＡ１１０４型电子天平（上海良平仪
器仪表有限公司），ＲＥ－５２ＡＡ旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂），
ＬＤ４－８低速离心机（北京医用离心机厂），ＰＲＯ２００手持、台式
两用均质器（美国ＰＲＯ公司），ＢＡ３１０Ｄｉｇｉｔａｌ数码显微镜（麦克
奥迪实业集团有限公司）。
１．３　动物分组和造模　昆明种小鼠，雌雄不拘，无特定病原体
（ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｆｒｅｅ，ＳＰＦ）级，体重２０～３０ｇ，由本校实验动
物中心提供，动物生产许可证号：ＳＣＸＫ（桂）２０１２－０００３。将６０
只小鼠随机分成６组，每组１０只，分别为正常对照组，四氯化碳
损伤模型组，联苯双酯组（０．１０ｇ·ｋｇ－１）、古钩藤提取液的高、
中、低剂量组（３０、２２．５、１５ｇ·ｋｇ－１）。正常对照组及四氯化碳
损伤模型组给予同剂量的生理盐水，给药组连续灌胃７ｄ。于
末次给药后１ｈ，正常对照组腹腔注射０．９％生理盐水２０ｍｌ·
ｋｇ－１，其余各组均腹腔注射０．１５％ＣＣｌ４ 溶液２０ｍｌ·ｋｇ－１。注
射２０ｈ后处死小白鼠，进行生化指标分析，进行形态学和病理
学检测。
１．４　生化指标检测　实验摘取眼球取血，分离血清，检测血清
中ＡＬＴ和 ＡＳＴ的活性，检测肝匀浆中 ＭＤＡ含量和ＳＯＤ活
力，并按以下公式计算肝脏指数。
肝脏指数＝肝质量（ｇ）／体重（ｇ）×１００％
１．５　病理学检查　取一小块肝组织，使用１０％甲醛溶液固定，
石蜡包埋切片，ＨＥ染色，显微镜镜检。将肝组织损伤程度分为
４级［６］：０级（－），肝组织结构正常，无明显变性、坏死及炎症细
胞浸润；Ⅰ级（＋），肝小叶结构尚正常，可见明显的混浊肿胀、
气球样变或脂肪变性，散在点状坏死；Ⅱ级（＋＋），肝小叶结构
不清，可见明显的灶状坏死，伴有炎症细胞浸润；Ⅲ级（＋＋
＋），肝小叶结构不清、可见明显的片状坏死，伴有炎症细胞浸
润。
１．６　统计学方法　各组实验数据均以（珚ｘ±ｓ）表示，采用统计软
件ＳＰＳＳ　１３．０进行组间ｔ检验。对于肝脏组织病理学变化经
Ｒｉｄｉｔ分析统计处理，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
２　结果
２．１　对急性肝损伤小鼠血清生化指标的影响　古钩藤提取液
高、中剂量组与联苯双酯组、模型组相比，血清 ＡＬＴ，ＡＳＴ差异
具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。古钩藤提取液呈剂量依赖性显
著降低小鼠血清 ＡＬＴ，ＡＳＴ水平，其效果与联苯双酯相当；与
模型组比较，古钩藤提取液高、中剂量组及联苯双酯组的肝匀
浆 ＭＤＡ及ＳＯＤ活性差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；与模型组
相比较，古钩藤提取液高、中剂量组肝脏指数均有显著性降低
（Ｐ＜０．０１），且降低作用随着其浓度的增大而增加，见表１。
表１　古钩藤提取液对ＣＣＬ４ 肝损伤小鼠血清生化指标的影响　（珚ｘ±ｓ）
组别
剂量
（ｇ·ｋｇ－１）
ｎ
血清
ＡＬＴ
（ｕ·Ｌ－１）
ＡＳＴ
（ｕ·Ｌ－１）
肝匀浆
ＭＤＡ
（ｎｍｏｌ·ｍｇ－１）
ＳＯＤ
（ｕ·ｍｇ－１）
肝脏指数
（％）
正常对照组 － １０　 ８１．４８±６．３４ｂ　 １６２．０３±２４．２０ｂ　 １１．６１±２．７９ｂ　 ４０．１８±５．６８ｂ　 ４．９７±０．２６ｂ
模型组 － １０　 ２５５．２１±１３．３０　 ２８５．７３±１６．９８　 ３３．３１±６．２６　 １８．２４±３．９７　 ６．２１±０．４４
联苯双酯组 ０．１０　 １０　 １１０．９６±１０．２１ｂ　 １７６．２０±１７．０３ｂ　 １７．７５±２．１１ｂ　 ３３．３９±３．３６ｂ　 ４．８９±０．４７ｂ
古钩藤 ３０　 １０　 ８８．１８±１０．６３ｂ　 １６８．０６±１０．８５ｂ　 ２１．３５±４．２８ｂ　 ３２．１９±４．４４ｂ　 ５．０２±０．５１ｂ
　 ２２．５　 １０　 １１５．３５±１２．８２ｂ　 １９５．８１±２１．９６ｂ　 ２４．４±３．７９ａ ３０．０２±３．４９ｂ　 ５．１３±０．４５ｂ
　 １５　 １０　 １７４．３６±２２．１４ｂ　 ２５３．９９±３７．８８ｂ　 ２７．３０±３．９１　 ２０．７８±４．２１　 ５．３０±０．６２
　　注：与模型对照组比较，ａ：Ｐ＜０．０５，ｂ：Ｐ＜０．０１
２．２　对肝组织病理学的影响　与ＣＣｌ４ 模型组比较，古钩藤各
剂量组能显著恢复ＣＣｌ４ 所致的肝细胞坏死、变性及炎性细胞
浸润等症状，且呈一定的剂量关系。其中古钩藤高剂量组肝小
叶组织基本完整，核破裂的肝细胞较少，和正常对照组相当；中
剂量组肝小叶组织大部分完整，肝细胞坏死数量要多于高剂量
组；低剂量组肝细胞坏死较多，呈现出各种大小的灶状坏死，其
结果差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。见表２。
３　讨论
ＣＣｌ４ 对肝脏具有较强的损伤作用，可导致肝细胞的变性、
坏死、脂肪变性、纤维化和癌变［７］。ＣＣｌ４ 肝损伤模型是目前研
究保肝药物作用及机制最常用的病理模型［８］。其作用机制是，
ＣＣｌ４ 进入体内经过肝微粒体细胞色数Ｐ４５０氧化酶氧化后，生
成三氯甲基自由基和氯自由基，使肝微粒体的脂质过氧化，导
表２　古钩藤对ＣＣＬ４ 肝损伤小鼠肝组织病理学损伤的影响
组别
剂量
（ｇ·ｋｇ－１）
ｎ
肝组织损伤程度（例数）
－ ＋ ＋＋ ＋＋＋
正常对照组 － １０　 １０　 ０　 ０　 ０ａ
模型组 － １０　 ０　 ０　 ３　 ７
联苯双酯组 ０．１０　 １０　 ３　 ７　 ０　 ０ａ
古钩藤 ３０　 １０　 ２　 ８　 ０　 ０ａ
　 ２２．５　 １０　 ０　 ７　 ２　 １ａ
　 １５　 １０　 ０　 ２　 ４　 ４ａ
　注：与模型对照组比较ａ：Ｐ＜０．０１
致自由基增加，引起ＳＯＤ活性降低和 ＭＤＡ升高，严重破坏细
—９５３—
２０１４年　　　　　　　　　　　　　右江民族医学院学报　　　　　　　　　　　　　　第３期
胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死，使肝细胞内 ＡＬＴ和 ＡＳＴ逸出
进入血液，含量升高。本研究结果表明，古钩藤提取液高、中剂
量组均可降低ＣＣｌ４ 急性肝损伤小鼠血清的ＡＬＴ和ＡＳＴ活性（
Ｐ＜０．０１），减小肝脏指数（Ｐ＜０．０１）；降低肝脏 ＭＤＡ水平（Ｐ
＜０．０１）和升高肝脏ＳＯＤ活性（Ｐ＜０．０１）；病理切片显示肝组
织炎症病变程度明显减轻，且呈一定的剂量依赖性；这些结果
揭示了古钩藤提取液的保肝作用，是通过抗自由基，抑制脂质
过氧化，从而发挥作用。
综上所述，古钩藤提取液对ＣＣｌ４ 所致的小鼠急性肝损伤
具有较好的保护作用。这一研究为古钩藤的研发提供了理论
依据，但其有效成分尚需进一步研究。
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Ｃｒｙｐｔｏｌｅｐｉｓ　ｂｕｃｈａｎａｎｉ　ａｎｄ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｈｅｒｅｏｆ：Ｕ．Ｓ．Ｐａ－
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收稿日期：２０１３－１２－０９；修回日期：２０１４－０３－１８
重楼醇提液对小鼠胃排空、小肠推进的影响
黄艳霞１，覃海丽１，黄彦峰２①，黄俊杰２，黄丽娟２，罗莹２，王映２
（１．右江民族医学院２０１１级护理专科，广西　百色　５３３０００；
２．右江民族医学院应用生理学研究室，广西　百色　５３３０００）
摘　要：目的　观察重楼醇提液对小鼠胃排空和小肠推进的影响。方法　采用碳末推进试验法，以正常、新斯的明、阿
托品、肾上腺素负荷为实验模型，观察重楼醇提液（２．５、５．０ｇ／ｋｇ）对小鼠胃排空和小肠推进的影响。结果　重楼醇提
高、低两个剂量组对正常小鼠胃排空有显著抑制作用（Ｐ＜０．０１），对阿托品所致小鼠胃排空抑制模型有协同作用（Ｐ＜
０．０５），均表现为胃内残留率增大；重楼醇提液低剂量组对正常小鼠小肠推进有促进作用（Ｐ＜０．０５），对阿托品、肾上腺
素所致小鼠小肠推进抑制模型有显著拮抗作用（Ｐ＜０．０１），均表现为小肠推进率增大；而重楼醇提液高剂量组对正常小
鼠小肠推进有显著抑制作用（Ｐ＜０．０１），表现为小肠推进率减小。重楼醇提液高剂量组对肾上腺素所致小鼠胃肠推进
抑制模型有协同作用（Ｐ＜０．０５），对新斯的明所致小鼠胃肠推进亢进模型有显著拮抗作用（Ｐ＜０．０１），均表现为胃内
残留率增大，小肠推进率减小。结论　重楼醇提液对小鼠胃排空和小肠推进有双向调节作用，也可能是因为重楼醇提液
中所含的物质影响一些胃肠激素，如胰多肽、胃动素、胃泌素、生长抑素、降钙素等的分泌，从而影响胃排空。
关键词：重楼；醇提液；小鼠；胃排空；小肠推进
中图分类号：Ｒ２８５．５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１－５８１７（２０１４）０３－０３６０－０３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５８１７．２０１４．０３．０１７
　　随着中药对胃肠运动影响的深入，不少方剂被广泛而有效
地用于治疗胃肠动力障碍的各种症状［１］，且中药材药源丰富，
副作用小，故运用中药治疗胃肠运动障碍疾病已逐渐得到人们
重视。
重楼为百合科植物云南重楼（Ｐａｒｉｓ　ｐｏｌｙｐｈｙｌａ　ｖａｒ．ｙｕｎ－
ｎａｎｅｎｓｉｓ）的干燥根茎，又名七叶一枝花（Ｐａｒｉｓ　ｐｏｌｙｐｈｙｌａ　ｖａｒ．
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）以蚤休之名始载于《神农本草经》［２］。其主要有效成
分为甾体皂苷，并含有氨基酸、甾酮、蜕皮激素、黄酮苷等化合
物［３］。近年来药理研究表明，该属植物具有多种药理作用，如
止血、抗肿瘤、抗菌、抗炎等多方面药理作用［４］。但对胃肠运
动的影响，未见报道，为此我们进行了实验。
１　材料与方法
１．１　动物　昆明种小鼠１５０只，体重２２～２８ｇ，雌雄各半，由本
院实验动物中心提供，合格证号：Ｓｃｘｋ桂２００３－０００３。
１．２　仪器　ＡＲＩＩ４０／Ｃ电子天平（奥毫斯（上海公司生产）。
１．３　药品与试剂　重楼（广西百色市市售，经广西右江民族医
学院民族医学教研室覃道光教授鉴定为重楼根茎）。活性碳末
（广东台山化工厂，批号９４０４０２），羧甲基纤维素钠（天津市光复
精细化工研究所，批号２００７０７０８）。硫酸阿托品注射液（河南润
弘制药股份有限公司，批号１１０４１６１），盐酸肾上腺素注射液（天
津药业集团新郑股份有限公司，批号１００９１２），新斯的明注射液
（郑州羚锐制药股份有限公司，批号１００５１６１）。
１．３．１　重楼醇提液的制备［５］　取重楼饮片５０ｇ，加入１０倍量
７０％乙醇（５００ｍｌ）在加热回流的条件下提取２ｈ，第二次用８倍
量７０％乙醇（４００ｍｌ）提取１．５ｈ，两次滤液合并用１６层纱布过
滤，最后隔水蒸发浓缩、定容为１ｇ／ｍｌ，冰箱冷藏用时恢复至室
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２０１４年　　　　　　　　　　　　　右江民族医学院学报　　　　　　　　　　　　　　第３期
① 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｙｆ２３８＠１２６．ｃｏｍ