全 文 ：黑参中人参皂苷的大孔吸附树脂纯化工艺研究
袁 媛
（辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳１１００３４）
摘 要：目的：以人参新炮制品黑参为原料，研究大孔吸附树脂纯化人参皂苷的工艺条件。方法：以人参
皂苷含量为指标，比较不同型号树脂和不同工艺条件对人参皂苷的分离纯化能力。结果：确定黑参水提
液的最佳大孔树脂纯化工艺条件为：选用ＲＥ－Ａ树脂，流速为３ｍＬ／ｍｉｎ，溶媒为７０％的乙醇洗脱溶媒量
为１００ｍＬ，最佳吸附时间为３０ｍｉｎ。结论：实验为人参皂苷的中药制剂的制备提供依据。
关键词：黑参；大孔吸附树脂；人参皂苷；纯化
中图分类号：Ｒ２８２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）０５－００４１－０２
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６０５０１５
收稿日期：２０１５－０９－２２
基金项目：辽宁省博士启动基金（２０１２１１３５）
作者简介：袁媛（１９８０－），女，博士，辽宁省中医药研究院副研究员，研究方向为生药学。
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｓａｐｏｎｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｂｌａｃｋ Ｇｉｎｓｅｎｇ ｂｙ Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ Ｒｅｓｉｎｓ
Ｙｕａｎ Ｙｕａｎ
（Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１００３４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｆｉｎｉｎｇ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｂｌａｃｋ ｇｉｎｓｅｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ａ－
ｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｆｉｎｉｎｇ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ ｗａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｒｅｎｔ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｏｒｕｓ ｒｅｓｉｎ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
ｗｉｔｈ ｔｏｔａｌ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ ａｓ ｉｎｄｅｘ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｒｅｓｉｎ ｗａｓ ｂｅｓｔ ｆｏｒ ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｙｉｎｇ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ
ｔｈｅ ｆｏｌｏｗｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：ＲＥ－Ａ ｍａｃｒｏｒｅｔｉｃｕｌａｒ ｒｅｓｉｎ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ ２ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ ｅｌｕｔｉｎｇ ｒｅａｇｅｎｔ ｗａｓ ７０％ｅｔｈａｎｏｌ
ａｎｄ ｅｌｕｔｉｎｇ ｖｅｌｏｃｉｔｙ ｗａｓ １００ｍＬ，ｔｉｍｅ ｗａｓ ３０ｍｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗｉｌ ｐｒｏｖｉｄｅ ｂａｓｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍａｃｒｏｒｅｔｉｃｕｌａｒ Ｒｅｓｉｎ；Ｂｌａｃｋ Ｇｉｎｓｅｎｇ；Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ；Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
黑参为五加科植物人参Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇＣ．Ａ．ｍｅｙｅｒ经
多次蒸制后的深加工品。其味甘、微苦，性温，归脾、肺、心
经，具有大补元气、复脉固脱、益气摄血的功效［１］。其主要
药效成分为人参皂苷。近年来，大孔吸附树脂在化工制药、
食品工业等方面已广泛应用。在中药的分离纯化中，既可
除去大量杂质，又可使有效成分富集，使得有机化合物尤其
是水溶性化合物的提纯得以大大简化［２－５］。黑参是利用传统
的九蒸九曝炮制方法将人参反复蒸制烘干而得到的一种人
参深加工品，是继红参后的又一新人参商品。本研究以黑
参中人参皂苷含量为指标，考察由国产Ｄ型系列多种树脂
组成的混合层析柱的分离纯化条件，为含黑参中人参皂苷
的制剂制备提供依据。
１ 材料
１．１ 仪器与设备
日本岛津Ｌ１１－１０ＡＴＶＰ高效液相色谱仪；ＡＴ－０．５中草
药多功能提取罐；ＰＶＣФ１５０ｍｍ×２ ０００ｍｍ层析柱；Ｍｉｌｉ－Ｑ
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ超纯水系统制备。
１．２ 药品
人参购于辽宁省中医药研究院药房，经辽宁中医药大
学康廷国教授鉴定为五加科植物人参Ｐ．ｇｉｎｓｅｎｇ的根茎；人
参皂苷 Ｒｇ３ 对照品（中国食品药品检定研究院，批号：
１１０８０４－２００６０３）。
１．３ 试剂
超纯水（电导率≤２．５μΩ／ＣＭ，自制）；组合大孔吸附树
脂（自行设计，委托加工）。
２ 方法
２．１ 标准品溶液制备
精密称取干燥至恒重的人参皂苷Ｒｇ３ 对照品５ｍｇ，置
２５ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀即得０．２ｇ／Ｌ
的对照品溶液。
２．２ 黑参水提物供试品溶液制备
黑参按课题组前期研究制得。将制好的黑参粉碎过４０
—１４—
目筛，取４００ｇ置５ ０００ｍＬ圆底烧瓶中，加入８倍量的超纯
水回流提取２次，每次２ｈ，过滤，合并滤液，浓缩至每１ｍＬ
相当于０．５ｇ黑参原药材，即得黑参水提取液。
２．３ 大孔吸附树脂的预处理
取大孔吸附树脂适量，加乙醇使完全浸没树脂，放置
２４ｈ，取树脂装于树脂柱，用乙醇洗脱，再用水洗乙醇至完全
流出液加水混合不呈白色浑浊为度，最后用超纯水冲至无
醇味；用５％ＨＣｌ洗脱，再用高纯水洗至中性；用５％ＮａＯＨ
洗脱，再用超纯水洗至中性。
２．４ 纯化工艺研究
２．４．１ 树脂的选择 采用静态吸附法，通过测定吸附残
液和解吸液的指标成分筛选合适树脂。量取大孔吸附树脂
１００ｍＬ，置锥形瓶中。加入上柱样品液３０ｍＬ，生药浓度为
０．５ｇ／ｍＬ，浸渍２４ｈ，滤过，１００ｍＬ超纯水洗涤树脂，洗涤液
与滤液合并，测定吸附液中的指标成分浓度评价吸附效果。
向树脂中加入７０％乙醇溶液，浸渍２４ｈ，滤过，测定解吸液
中的指标成分浓度评价解吸效果。结果见表１。
表１ 树脂筛选结果
树脂型号 吸附量（ｍｇ／ｍＬ） 洗脱量（ｍｇ／ｍＬ） 解吸率（％）
ＲＥ－Ａ ３１．３ ２９．４ ９４．１
ＲＥ－Ｂ ２９．０ ２５．５ ８７．８
ＲＥ－Ｃ ３０．８ ２６．２ ８５．０
ＲＥ－Ｄ ２５．１ ２０．１ ８０．１
吸附量Ｑａ（ｍｇ／ｇ干树脂）＝（Ｃｏ－Ｃｅ）×Ｖａ／Ｖ
吸附率Ｅａ％＝（Ｃｏ－Ｃｅ）／Ｃｏ×１００％
洗脱量Ｑｄ＝Ｃｄ×Ｖｄ／Ｖ
解吸率Ｅｄ％＝Ｃｄ×Ｖｄ［（Ｃｏ－Ｃｅ）×Ｖａ］×１００％
Ｃｏ为吸附液起始浓度；Ｃｅ为吸附平衡浓度；Ｖａ为吸附
液体积；Ｖ为树脂体积；Ｃｄ为洗脱液浓度；Ｖｄ为洗脱液体积。
由此次实验结果可知，在这４种树脂中，ＲＥ－Ａ树脂对
黑参中的人参皂苷有效成分的作用为最好，因此选用ＲＥ－Ａ
树脂。
２．４．２ 吸附容量的测定 将浓度为０．５ｇ／ｍＬ的黑参水
提液通入装有１００ｍＬ湿树脂的玻璃柱中，流速为３ｍＬ／
ｍｉｎ，测定流出液的浓度，直到树脂吸附饱和为止，测定
１００ｍＬ湿树脂可处理８倍树脂床体积的水提液，吸附容量
达４ｇ／ｍＬ生药。
２．４．３ 吸附流速的确定 将预处理的湿树脂装柱，吸附原
液上柱吸附，控制一定的流速，收集流出液，测其人参皂苷含
量，计算其泄漏率，分别取流速为２、３、４、５ｍＬ／ｍｉｎ，作比较。
表２ 不同吸附流速比较
流速
（ｍＬ／ｍｉｎ）
过柱液中人参皂苷
的量（ｍｇ）
树脂中吸附的人参
皂苷的量（ｍｇ）
泄漏率（％）
２ ５．５７ ２８．９３ １６．１５
３ ６．１７ ２８．０９ １７．８７
４ ９．７６ ３１．０４ ２３．９２
５ １４．３３ ２８．４０ ３３．５４
由表２可知随着吸附流速的加快，人参皂苷Ｒｇ３ 的泄
露越来越严重，但流速过慢会延长生产周期，提高成本，流
速太大，树脂吸附量下降；流速为２、３ｍＬ／ｍｉｎ时泄漏率差
异不是很大，因此以流速３ｍＬ／ｍｉｎ为最好。
２．４．４ 洗脱溶媒的确定 吸取３０ｍＬ黑参水提液上大孔
树脂柱，先用高纯水洗至流出液不再浑浊，再依次用１０％乙
醇、２０％乙醇、３０％乙醇、４０％乙醇、５０％乙醇、６０％乙醇、
７０％乙醇、８０％乙醇、９０％乙醇、９５％乙醇各１００ｍＬ梯度洗
脱，分段收集。计算各洗脱份中人参皂苷的量和固体总量，
结果见表３。
表３ 各洗脱液中固体量和人参皂苷含量
乙醇（％） 人参皂苷量（ｍｇ） 固体量（ｍｇ） 人参皂苷质量分数（％）
１０ ２．０５ ３３．１１ １６．１５
２０ ５．０９ ２８．４８ １７．８７
３０ ９．７８ ４０．８９ ２３．９２
４０ １６．４８ ４９．１４ ３３．５４
５０ ２３．８５ ３９．６９ ６０．０９
６０ ２５．８６ ３４．６２ ７４．６９
７０ ３０．２４ ３６．６７ ８２．４７
８０ ３０．３５ ３７．３７ ８１．２１
９０ ２７．５７ ３３．９１ ８１．０９
９５ ２１．２１ ２６．４３ ８０．２５
结果显示，７０％乙醇洗脱液中人参皂苷含量最高，故解
吸人参皂苷的溶媒确定为７０％的乙醇。
２．４．５ 洗脱量的确定 精密吸取黑参水提液２５ｍＬ（０．５
生药／ｍＬ）上柱，静置３０ｍｉｎ后，先用高纯水冲洗至流出液
不再浑浊，然后用７０％乙醇共２００ｍＬ依次洗脱，洗脱液流
速为３ｍＬ／ｍｉｎ对７０％乙醇洗脱液每５０ｍＬ收集１份 ，共４
份，分别测定人参皂苷的含量，结果见表４。
表４ 不同用量７０％乙醇洗脱后人参皂苷含量
７０％乙醇用量（ｍＬ） 人参皂苷含量（ｍｇ） 累积百分含量（％）
０～５０ １４．６ ５８．３
５０～１００ ２４．２ ９６．９
１００～１５０ ２５ １００
１５０～２００ — —
由上表显示，１００ｍＬ洗脱溶媒人参皂苷的累积百分含
量达９６．９％，基本洗尽，故确定洗脱溶媒量为１００ｍＬ。
２．４．６ 洗脱流速的确定 按照上述所确定的吸附条件进
行动态吸附后，以７０％乙醇为洗脱剂，分别以２、３、４、
５ｍＬ／ｍｉｎ的速度进行洗脱，分别测定乙醇洗脱液中人参皂
苷的洗脱率，结果见表５。
表５ 洗脱流速的影响
洗脱流速（ｍＬ／ｍｉｎ） 洗脱率（％）
２ ９３．１
３ ９４．３
４ ９２．７
５ ９０．５
２．４．７ 上柱药液温度对树脂吸附的影响 上柱药液的
温度升高，树脂的吸附量下降，说明中药成分在树脂上的吸
附过程为放热反应。低温有利于树脂吸附容量的提高，温
度太高会影响吸附效果，经研究结果表明，室温对实验几乎
无影响，超过６０℃时，吸附量明显下降，而在一定的温度范
围内，上柱药液的温度越高，洗脱效果却较好。
２．４．８ 最佳吸附时间考察 分别吸取黑参水提液２５ｍＬ，
—２４—
绿色药用植物标本塑化技术探究
陆海峰，姜明雨，张 杰，卢 群
（苏州卫生职业技术学院，江苏 苏州２１５００９）
摘 要：走出传统药用植物标本制作和保存的误区，利用新型高分子塑化材料对绿色药用植物标本进行
处理，制成一种能够满足教学、绿色环保无污染的新型标本，提高药用植物标本在教学过程中的实用性。
关键词：药用植物；塑化标本；聚乙二醇
中图分类号：Ｒ２８２．７１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１６）０５－００４３－０２
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１６０５０１６
收稿日期：２０１５－１０－０９
作者简介：陆海峰（１９８５－），男，苏州卫生职业技术学院助教，研究方向为药用植物栽培与药用植物分类。
药用植物传统标本技术包括：腊叶标本制作技术、浸液
标本制作技术。腊叶标本由于制作工艺的问题不能保持原
植物的色泽、形态，使用时间长后标本容易发霉、虫蛀导致
失去实用价值；浸液标本制作技术虽然摆脱了传统腊叶标
本的一些弊端，但是在制作过程中，保存液中添加的甲醛、
乙醇容易对人身体造成伤害，不利于学生的日常学习使用。
鉴于以上传统绿色药用植物标本制作技术的弊端，我
们在改变传统植物标本制作技术的基础上引入了动物塑化
标本制作技术的理念，探究出了一种新型的绿色药用植物
标本的制作技术
。
过柱流出液重吸附１次，分别静置５、１５、３０、６０ｍｉｎ，依次用
高纯水冲洗至流出液不再浑浊，７０％乙醇１００ｍＬ洗脱，收集
洗脱液，测定人参皂苷含量，结果见表６。
表６ 不同吸附时间总苷含量
吸附时间（ｍｉｎ） 人参皂苷含量（ｍｇ）
５ ２０．７
１５ ２１．２
３０ ２４．７
６０ ２２．３
从７０％乙醇洗脱液人参皂苷含量分析，静置时间
３０ｍｉｎ含量最高。时间过短，吸附不完全，时间过长，解吸
难。
２．４．９ 上柱药液浓度对树脂吸附容量的影响 用浓度
不同的黑参水提液进行吸附试验。黑参中人参皂苷是影响
树脂吸附性能的重要因素之一。吸附树脂一般在低浓度下
对吸附容量比较有利。如果药液浓度偏高，则泄露早，处理
量小，树脂使用周期短，从而树脂再生次数增多。
分别配制生药药液浓度为 ０．１２５、０．２５０、０．５００、
１．０００ｇ／ｍＬ的黑参水提液适量，以３ｍＬ／ｍｉｎ的流速分别经
过４根已处理好的树脂各１００ｍＬ。跟踪检识流出液，分别
计算上样体积，计算树脂对不同浓度的黑参水提液的吸附
量。结果见表７。
３ 讨论
影响大孔吸附树脂精制纯化效果的因素有很多，如树
脂型号、上柱药液浓度、药液ｐＨ值、药液盐浓度、上柱流速、
最佳吸附时间、树脂柱的径高比、吸附温度、洗脱液的种类、
用量、流速等。本实验对其中的一些主要因素进行了考察，
明确了具体的工艺条件，保证树脂纯化工艺的稳定，有利于
提高产品稳定性和质量控制，可进行规模化生产。
表７ 不同浓度黑参水提液对树脂吸附性能的影响
药液浓度（ｇ／ｍＬ） 泄露前吸附量（ｍｇ／ｍＬ生药）
０．１２５ ６２．０
０．２５０ ５９．０
０．５００ ５６．０
１．０００ ５４．０
参考文献：
［１］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典［Ｓ］．２００５：１４３．
［２］ 袁媛．水提何首乌总苷化学成分的研究［Ｄ］．昆明：云南中医
学院，２００５．
［３］ 程新梅．大孔吸附树脂在中药新药研究和生产中的应用［Ｊ］．
中国药房，２００８，１９（１８）：１４３１．
［４］ 刘春憬．大孔吸附树脂在中药分离纯化中的研究进展［Ｊ］．
农产品加工（下），２０１５，１６（２）：５４－５７．
［５］ 彭春，李晓刚，刘亚明．大孔吸附树脂研究进展［Ｊ］．实用中
医药杂志，２０１３，３１（５）：７６－７８．
［６］ 袁媛，于艳，徐荣培．ＨＰＬＣ法测定１９个人参新炮制品—黑
参样品中的人参皂苷含量［Ｊ］．辽宁中医杂志，２０１３，４０（１０）：
１９９３－１９９５．
（责任编辑：余 婷）
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