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广金钱草甲醇提取物的 HPLC指纹图谱研究
曾彩芳 1 ,黄月纯2 ,李咏梅 1
(1.广州医学院港湾医院 ,广东 广州 510700;2.广州中医药大学第一附属医院 ,广东 广州 510405)
　　摘要　目的:建立广金钱草甲醇提取物的 HPLC指纹图谱。方法:色谱柱为 NucleodurC18 Gravity(250mm×4.6
mm, 5 μm), 流动相为甲醇-2%乙酸溶液梯度洗脱 ,检测波长为 270 nm, 流速为 1.0mL/min, 柱温为 30℃。结果:建
立了广金钱草甲醇提取物的 HPLC指纹图谱 ,共标示出 13个共有峰。结论:该方法准确可靠 , 重复性好 , 可为广金
钱草的质量控制提供参考。
关键词　广金钱草;指纹图谱;HPLC
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)06-0874-02
收稿日期:2008-06-02基金项目:广东省科技计划项目(2005B33001038)作者简介:曾彩芳(1968-),女,副主任中药师 ,主要从事医院药剂工作;Tel:020-82287322。
　　广金钱草为豆科物广金钱草 Desmodiumstyraci-
folium(Osb.)Mer.的干燥地上部分 , 具有清热除
湿 、利尿通淋的功效。用于治疗热淋 、砂淋 、石淋 、小
便涩痛 、水肿尿少 、黄疸尿赤 、尿路结石等症 。已有
研究表明 , 广金钱草主要含有黄酮类 〔1〕、生物碱
类 〔2〕 、酸性物质 〔3〕及挥发油〔4〕等成分 ,其中黄酮类
成分是防治结石的有效成分〔5〕。本文采用高效液
相色谱法建立了广金钱草甲醇提取物的特征指纹图
谱 ,以期为广金钱草药材的质量控制提供参考 。
1 　仪器与试药
高效液相色谱仪(AgilentHP1100),光二极管
阵列检测器 。甲醇为色谱纯 ,乙酸为分析纯 ,水为纯
化水。 10批广金钱草购自广州致信药业中药饮片
厂 、广东康美中药饮片厂 、广东省药材公司中药饮片
厂 、广东省杏林药业公司 、广州市药材公司经营部
等 ,经笔者鉴定均系豆科植物广金钱草 Desmodium
styracifolium(Osb.)Merr.的干燥地上部分 。
2 　方法与结果
2.1 　色谱条件　色谱柱:色谱柱为 NucleodurC18
Gravity(250mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇-
2%乙酸溶液 ,梯度洗脱:0 ～ 15 min,甲醇由 5%升为
25%, 15 ～ 30 min,甲醇由 25%升为 30%, 30 ～ 40
min,甲醇由 30%升为 60%, 40 ～ 60 min, 甲醇由
60%升为 100%, 60 ～ 65 min, 甲醇为 100%降为
5%;检测波长为 270 nm;柱温为 30℃;流速为 1.0
mL/min;分析时间为 65 min;进样量为 10μL。
2.2　供试品溶液的制备　精密称取广金钱草粉末
2.0 g,加甲醇 50mL,超声处理 2次 ,每次 30min,滤
过 ,合并滤液 ,蒸干 ,残渣加甲醇溶解并定容至 10
mL。
2.3　方法学考察
2.3.1 　精密度试验:取供试品溶液 10 μL,连续进
样 5次。结果峰面积百分含量大于 5%以上的组分
相对保留时间的 RSD均小于 2%,峰面积百分含量
RSD均小于 3%,提示精密度良好 。
2.3.2 　稳定性试验:取供试品溶液 10 μL,分别在
0、4、8、12、24 h进样。结果峰面积百分含量大于
5%以上的组分相对保留时间的 RSD均小于 2%,峰
面积百分含量 RSD均小于 3%,提示 24 h内供试品
溶液稳定性较好。
2.3.3 　重复性试验:取同一批样品 5份 ,分别制备
供试品溶液 ,进样分析。结果峰面积百分含量大于
5%以上的组分相对保留时间的 RSD均小于 2%,峰
面积百分含量 RSD均小于 3%,提示重复性良好。
2.4　样品检测　取供试品溶液 10μL,依法进样分
析 ,结果 10批样品共标示出 13个共有峰。各峰的
相对保留时间(TR)及各共有峰的峰面积百分含量
见表 1,广金钱草甲醇提取物的 HPLC指纹图谱见
图 1。
2.5　指纹图谱的建立与分析
·874· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 6期 2009年 6月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2009.06.045
图 1　广金钱草甲醇提取物的 HPLC指纹图谱
　　表 1　 广金钱草 10批样品的 HPLC图谱中共有峰的峰面积百分含量(%)
峰号 TR/min 样 1 样 2 样 3 样 4 样 5 样 6 样 7 样 8 样 9 样 10 均值 RSD/%
1 2.476 2.777 1.656 1.257 1.608 2.090 1.932 2.458 1.670 1.662 0.964 1.807 0.535
2 23.689 7.641 6.709 9.453 8.759 8.468 9.104 9.251 9.091 9.134 9.155 8.676 0.864
3 25.571 3.486 3.177 4.347 3.808 3.396 3.570 2.955 3.474 4.185 4.215 3.665 0.470
4 27.765 8.265 6.505 9.193 8.746 8.674 7.688 7.969 8.816 9.283 9.063 8.420 0.851
5 29.198 3.157 2.167 4.372 4.297 4.078 3.454 3.646 3.926 3.868 3.559 3.652 0.644
6 30.609 26.683 26.055 29.789 28.835 28.229 29.440 27.461 27.679 26.807 26.651 27.763 1.274
7 34.497 2.909 3.404 2.715 2.717 2.825 3.036 2.837 2.904 2.839 2.657 2.884 0.214
8 35.357 6.137 6.935 5.874 5.935 5.801 6.293 6.087 5.987 5.675 5.516 6.024 0.392
9 35.744 13.846 13.041 15.905 16.126 15.691 16.242 15.192 15.613 15.460 14.887 15.200 1.028
10 36.618 6.387 6.021 6.988 7.382 7.197 7.714 7.134 7.315 7.142 5.225 6.850 0.752
11 43.682 1.515 1.766 0.995 1.093 1.156 1.209 1.242 1.126 1.081 1.177 1.236 0.232
12 44.067 0.987 2.033 0.759 0.776 1.034 0.839 1.088 1.030 0.936 1.067 1.055 0.363
13 55.812 1.196 1.919 1.076 1.795 1.375 1.563 1.625 1.678 1.311 5.748 1.856 1.388
总共有峰 84.986 80.659 92.721 91.877 90.013 92.084 88.945 90.308 89.386 89.921 89.090 3.666
2.5.1　共有峰的确定:表 1结果表明 ,广金钱草甲
醇提取物的 HPLC谱图中主要有 13个共有峰 ,总共
有峰峰面积百分含量为(89.09±3.67)%。
2.5.2　指纹峰直观观察:13个共有峰中主要集中
在 23 ～ 37 min范围内的 9个峰较强 ,其余共有峰均
较弱。峰 6最为突出 , 为第一大峰 , 占 (27.76 ±
1.27)%,峰 9为第二大峰 ,占(15.20±1.03)%。 9
个主要共有峰的峰面积百分含量比较大约为峰 6>
峰 9>峰 2≈峰 4>峰 10>峰 8>峰 3≈峰 5≈峰 7,
可初步拟订为广金钱草甲醇提取物的指标成分群。
3 　讨论
实验中流动相考察了甲醇-水 、甲醇-2%乙酸溶
液的梯度洗脱 ,结果甲醇 -2%乙酸溶液梯度洗脱可
达到较好的分离效果 。用不同的检测波长检测及用
光二极管阵列检测器分析 , 270 nm波长处指纹峰较
多 ,响应值均较大 ,而且基线较平稳 ,故选择 270 nm
作为指纹图谱检测波长。供试品溶液的制备采用较
常用的甲醇超声提取方法 , 2次可基本提取完全。
本文测定了 10批广金钱草样品的甲醇提取物 ,
共标出 13个共有峰 ,总共有峰峰面积含量为(89.09
±3.67)%,各批样品间差异性较小 ,具有指纹图谱
的特征意义 ,可为广金钱草药材的质量控制提供参
考。由于暂时未获得对照品 ,本实验只以各共有峰
的峰面积百分含量进行比较研究 ,其主要组分的鉴
定尚待采用对照品对照或液相色谱 -质谱联用技术
进行研究 。对不同产地 、不同采收期的样品指纹图
谱的比较 ,尚待进一步研究。
参 考 文 献
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·875·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 6期 2009年 6月