全 文 ：2006 年 2 月　　
第 22卷第 1期　
陕西教育学院学报
Journal of Shaanx i Institute of Education
　　Feb.2006
Vol.22　No.1
杜仲叶提取物制剂对动物体免疫功能影响的研究
翟文俊
(陕西教育学院生物工程研究所 , 陕西西安　710061)
摘　要:以小鼠为试验对象 , 采用分组交叉对照方式 , 分别进行小鼠脏体对比试验 , 溶血空斑试验 , 溶血素试
验 ,细胞免疫功能试验。试验结果表明:杜仲叶浸提物制剂具有提高小鼠的非特异性免疫 、体液免疫和细胞免疫的
功能。
关键词:小鼠;杜仲叶;免疫功能;细胞;制剂
中图分类号:Q946-33 , R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-598X(2006)01-0108-04
杜仲(Eucommla ulmoides oliv)是我国特有树种 ,杜仲皮是名贵中药材 ,具有补肝肾 、强筋骨 、降血压 、抗
癌 、抗疲劳的功效[ 1] [ 2] 。近年的研究结果表明:杜仲叶与杜仲皮有着同等的药理药效作用[ 3] [ 4] ,随着杜仲叶
药用价值和保健作用的研究 ,全国各地纷纷用杜仲叶制成各种保健饮品生产上市 。为了给产品提供有力的
科学依据 ,笔者对陕西省略阳县杜仲工业公司生产的杜仲叶浸膏粉 ,按照饮料制作工艺 ,配制成不同计量的
制剂 ,以小鼠为试验对象 ,采用分组交叉对照方式 ,分别进行了腹腔巨噬试验 ,脾重量及脾指数的影响试验 ,
溶血空斑试验 ,溶血素试验 ,皮肤迟发型超敏反应和淋巴细胞转化试验。试验结果显示 ,杜仲叶浸提物制剂
具有明显提高动物体免疫功能的作用。
1　试验材料及仪器
1.1　原料:杜仲叶浸膏粉 ,由陕西省略阳县杜仲工业公司生产提供 ,企标代号 QB/S LD001-94。用蒸馏水
制成混悬液 ,备用。
1.2　试剂:环磷酰胺注射粉剂 ,上海第十二制药厂出品;2 , 4—二硝基氯苯 ,西安试剂厂出品;左旋咪唑片剂 ,
广西桂林制药厂出品 。
1.3　动物:ICR小白鼠 ,雄性 ,体重 20g ～ 25g ,健康绵羊红细胞 ,鸡红细胞;健康豚鼠 ,均由西安交通大学医
学院实验动物饲养中心提供。设施合格证:陕医动 04号;动物合格证:陕西动 05号 ,均达到一级标准。
1.4　仪器:721型分光光度计 ,上海医疗设备厂;岛津 VU-210测光仪 ,日本岛津仪器厂出品 。
2　试验方法[ 5] [ 6]
2.1　试验分组及试剂分试方法[ 7] [ 8]
采用随机分组法 ,将小鼠分为 A 、B 、C 、D 、E 五个组 ,试验分组及试剂分试方法见表 1。
表 1　试验分组及试剂分试方法
编号 组别 试剂名称 剂量 试验方法 单位 时间
A 正常对照组 生理盐水 0.5ml 灌胃 1只 1 天
B 左旋咪唑对照组 左旋咪唑悬浮液 90mg 灌胃 1kg 1 天
C 环磷酰胺对照组 环磷酰胺液体 25mg 腹腔注射 1kg 1 天
D 大剂量受试组 杜仲叶浸提物制剂 6g 灌胃 1kg 1 天
E 小剂量受试组 杜仲叶浸提物制剂 2g 灌服 1kg 1 天
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收稿日期:2005-06-10
作者简介:翟文俊(1952-), 男 ,陕西略阳人 , 陕西教育学院生物工程研究所所长。
2.2　腹腔吞噬细胞吞噬试验
首先给小白鼠腹腔注射淀粉肉汤 ,第三天再注射鸡红细胞 ,小白鼠处死后 ,按滴片法进行腹腔吞噬细胞
吞噬功能的测定 。
2.3　皮肤迟发型超敏反应
2 ,4—二硝基氯苯致小鼠过敏后第十天攻击 ,受用分光光度计检测 ,2 , 4—二硝基氯苯所致的迟发型超敏
反应强度 。
2.4　脾脏 PEC的测定
采用分光光度计测定小鼠脾脏的 PEC 。用 PBC 调整脾细胞悬液浓度 ,制成 2×102/ml的脾细胞悬液 ,
每毫升悬液加入等量的绵羊红细胞补体 ,在岛津 VU —210光谱仪上测定光密度值 。
2.5　溶血素的测定
免疫处理后的小鼠 ,摘除眼珠放血 ,测定各组的溶血素水平 。
2.6　对脾重量及脾指数的影响
给小鼠使用杜仲叶浸提物制剂后 ,将各组小鼠分别称重 ,脱颈椎处死后取其脾脏称重 ,观察杜仲叶浸提
物制剂对脾重量及脾指数的影响。
2.7　对 PHA刺激淋巴细胞转化的影响
采集小鼠血液 ,在显微镜下观察计数淋巴母细胞 ,及过渡态淋巴细胞的百分率。
3　试验分析
3.1　对小鼠腹腔吞噬细胞吞噬功能的影响结果见表 2。
表 2　杜仲叶浸提物制剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
组别 动物数/只 吞噬百分比% 吞噬指数
正常对照组 10 30.67±9.48 0.83±0.11
环磷酰胺组 10 19.77±2.34 0.60±0.05
左旋咪唑组 10 0.29±10.06 2.22±0.20
小剂量组 10 47.22±8.22 1.70±0.27
大剂量组 10 55.41±9.09 1.90±0.33
表 2中的试验数据表明:杜仲叶浸提物制剂给剂组与对照组相比 ,均有显著性差异 ,杜仲浸提物制剂灌
胃或腹腔注射后 ,都能加快小鼠血液中胶体碳粒廊清速度 ,增强腹腔巨噬细胞吞噬能力[ 9] 。随着杜仲叶浸
提物制剂浓度增大 ,吞噬指数提高 。
3.2　杜仲叶浸提物制剂对小鼠脾重量及脾指数的影响 。试验结果见表 3。
表 3　杜仲叶浸提物制剂对小鼠脾重量及脾指数的影响
组别 动物数/只 脾重/mg·10g-1 脾指数
正常对照组 10 52.13±4.84 ……
环磷酰胺组 10 35.36±8.45 0.68
左旋咪唑组 10 71.80±10.51 1.38
小剂量组 10 63.59±5.06 1.22
大剂量 10 71.05±11.49 1.39
表 3试验结果表明:杜仲叶浸提物制剂大剂量用量和小剂量均可显著提高小鼠的脾重量和脾指数 。表
明杜仲叶浸提物制剂可使小鼠脾重 ,脾 RNA 蛋白合成增加 ,使脾淋巴细胞增殖加快 ,对抗环磷酰胺的松龙
引起的脾重减轻得到抑制 。从而使小鼠的脾重增加。给小鼠皮下注射杜仲叶醇提物 10g·kg-1 ,连续 6 天小
鼠脾重明显增加 ,肝重不变 ,胸腺重有减少趋势[ 8] [ 10] [ 11] ,该项试验正在进行。
3.3　杜仲叶浸提物制剂对小鼠皮肤迟发型超敏反应的影响 。试验结果见表 4。
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表 4　杜仲叶浸提物制剂对小鼠皮肤迟发型超敏反应的影响
组别 动物数/只 皮肤反应 DD值
正常对照组 10 0.123±0.022
环磷酰胺组 10 0.098±0.016
左旋咪唑组 10 0.161±0.024
小剂量组 10 0.148±0.018
大剂量组 10 0.152±0.019
表 4试验结果表明:杜仲叶浸提物制剂的大剂量使用组和小剂量使用组与对照组相比 ,均有明显差异 ,
且差异随剂量增加而增加 。说明杜仲叶浸提物制剂可提高小鼠血液中自然杀伤细胞活性 ,部分损坏抗环磷
酰胺对此细胞的抑制作用 ,从而促进小鼠皮肤迟发型过敏反应 ,增强细胞免疫功能。
3.4　杜仲叶浸提物制剂对小鼠 PHA 刺激淋巴细胞转化影响 ,试验结果见表 5。
表 5　杜仲叶浸提物制剂对小鼠 PHA刺激淋巴细胞转化的影响
组别 动物数/只 淋巴母细胞转化率% 过渡态细胞百分率%
正常对照组 10 9.74±1.40 17.53±1.91
环磷酰胺组 10 5.34±1.09 11.37±1.77
左旋咪唑组 10 20.45±2.04 35.41×4.10
小剂量组 10 13.44±1.55 24.48±3.22
大剂量组 10 15.72±1.69 28.05±2.63
表 5试验结果表明:给小鼠灌胃或腹腔注射杜仲叶浸提物制剂与对照组相比 ,均存在明显差异 。说明杜
仲叶浸提物制剂能促进小鼠网状内皮系统及腹腔巨噬细胞吞噬功能 ,使淋巴细胞增殖加速 ,对抗环磷酰胺及
可的松引起的脾脏 、胸腺重量下降 ,并使小鼠血清 Ikg 增加 ,从而促进 PHA 刺激的淋巴细胞转化功能的提
高[ 8] [ 11] 。
3.5　杜仲叶浸提物制剂对小鼠脾脏空斑形成细胞(PEC)的影响 ,试验结果见表 6。
表 6　杜仲叶浸提物制剂对小鼠脾脏空斑形成细胞(PEC)的影响
组别 动物数/只 脾抗体生成水平/ CD
正常对照组 10 0.451±0.053
环磷酰胺组 10 0.310±0.077
左旋咪唑组 10 0.605±0.036
小剂量组 10 0.727±0.081
大剂量组 10 0.152±0.019
表 6试验结果表明:杜仲叶浸提物制剂受试组与对照组相比 ,均存在明显差异。说明杜仲叶浸提物制剂
可促进小鼠脾脏空斑形成细胞的含量。
3.6　杜仲叶浸提物制剂对小鼠溶血素形成水平的影响 ,试验结果见表 7。
表 7　杜仲叶浸提物制剂对小鼠溶血素形成水平的影响
组别 动物数/只 Log Lac溶血素形成水平
正常对照组 10 1.885±0.437
环磷酰胺组 10 1.030±0.008
左旋咪唑组 10 3.502±1.360
小剂量组 10 3.313±1.421
大剂量组 10 5.032±1.460
表 7试验结果表明:杜仲叶浸提物制剂受试组与对照组相比 ,均存在着明显的差异。说明杜仲叶提取物
制剂可促进小鼠体内溶血素的生成 。
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4　试验结果
4.1　杜仲叶浸提物制剂给小鼠灌胃 15天 ,通过腹腔巨噬细胞吞噬试验和对小鼠脾重量及脾指数的影响试
验 ,提示该制剂可明显提高小鼠的非特异性免疫功能。
4.2　通过对小鼠脾腔空斑形成细胞(PEC)和溶血素试验 ,提示杜仲叶浸提物制剂大 、小两剂量(分别为每公
斤体重含纯提物 6g·Kg-1·d-1和 2g·Kg-1·d-1),皆可显著提高小鼠的体液免疫功能 。
4.3　通过对小鼠皮肤迟发型超敏反应和淋巴细胞转化试验 ,提示该制剂还可以明显提高小鼠的细胞免疫功
能。
4.4　通过文献资料研究分析[ 10] ,发现杜仲叶浸提物制剂与公认的提高人体和动物免疫功能的冬虫夏草浸
提物相比较 ,杜仲叶浸提物制剂对小鼠免疫功能的促进效果优于冬虫夏草 。用相同的试验方法 ,杜仲叶浸提
物制剂对小鼠的非特异性免疫功能 、体液免疫和细胞免疫均有明显的促进作用 。而冬虫夏草浸提物制剂对
上述小鼠免疫功能的试验报告表明:虫草的子座提取物能使脾重增加 ,而虫体无效。虫草水提取物在浓度为
5 ～ 10mg·ml-1浓度时 ,对胸腺及脾细胞增殖有轻度刺激作用 ,可直接刺激 T 辅助细胞增殖 ,但对脾细胞产生
白介素-2(IL -2)无促进作用。虫草浸提物制剂可促进小鼠迟发型超敏反应 ,但抑制小鼠血清溶血素生
成[ 7] 。对比结果可以初步判断 ,[ 12]杜仲叶浸提物制剂提高动物免疫功能的作用优于虫草。由此 ,利用杜仲
叶浸提物开发研制功能性保健饮品 、生物制品是大有作为的[ 13] 。
[ 参 考 文 献]
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[ 责任编辑　朱毅然]
Rearch on the Effect of Eucommia Ulmoides Oliv Leave Extraction on Animal Immune Function
ZHAI Wen-jun
(Biology Engineering Institute of Education College of Shaanx i , Xi an 710061 , China)
Abstract:Hear-body-rate test ,hemoly tic plaque test , hemoly sin test and cellular immune function test w ere
studied respectively wi th mouse by cros-over design in g roup.The results show that Eucommia ulmodes Oliv
leave ex traction preparation could improve the non-specif ic immune function , humoral and cellular immuologic
function of mouse.
Key words:mice;Eucommia ulmodes Oliv leave;immune function;cellular preparation
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