全 文 ：2014年第36卷第6期 China Poultry Vol.36，No.6.2014
垂花香薷抗鸡传染性支气管炎
病毒的效果分析
苏治国，王 涛，陈文芳，武彩红
（江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300）
鸡传染性气管炎是一种急性接触性上呼吸道
传染病，临床上以呼吸困难，咳嗽喘气，咳出血样
渗出物为特征。该病一旦发生，传播迅速，感染率
可达 100%，防治难度大，目前无有效治疗方法。
传统兽医学在数千年的临床实践中积累了丰富的
用药经验，对病毒感染性疫病的防治也早有记载，
较多中药具有免疫调节和抗病毒作用，可改善和
提高机体的免疫功能，提高机体的抗病力和抵抗
力，中药抗病毒作用越来越受到重视［1］。笔者采用
体外细胞培养的方法，探讨中药垂花香薷粗提物
对鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的作用效果。
1 材料与方法
1.1 材料
垂花香薷、青霉素、链霉素购自泰州市中医
院。IBV株由江苏农牧科技职业学院流行病研究
中心惠赠，临用前于37℃解冻，用细胞维持液稀释
成100 TCID50备用。3-（4，5-二甲基噻唑-2-）-2，
5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）、二甲基亚砜购自扬
州精诚化学试剂有限公司。犊牛血清、Hanks′液
购于大连宝生物工程有限公司。
1.2 方法
1.2.1 中药制备
将垂花香薷用注射用水浸泡 24 h，煎煮 2次，
将2次滤液合并，浓缩至稠状，加95%乙醇，调乙醇
浓度至60%~70%，沉淀48 h。回收乙醇，药液再加
95%乙醇，调乙醇浓度至75%~80%，沉淀48 h。回
收乙醇，浓缩至无醇味，用注射用水配成每毫升
含 1 g生药的浓度，过滤，调节 pH值至 6.8~7.2，分
装于10 mL安瓶中封口灭菌，备用。
1.2.2 鸡胚成纤维细胞的制备
参照文献［2］，在无菌条件下，取9~10日龄健康
鸡胚，置灭菌培养皿中除去头、爪、内脏，并剪成块，
用Hanks′液充分冲洗后移入广口瓶中，加入约4倍
量的 0.25%胰酶，调节 pH值至 7.6~7.8，振荡混匀
后置37 ℃水浴40 min，每10分钟轻摇一次。消化
液过滤后加入营养液，用7.5% NaHCO3调 pH值至
7.2~7.4。分装于细胞培养瓶中，置 36~37 ℃培养
24~48 h至细胞长成单层。
1.2.3 垂花香薷粗提物对细胞的毒性试验
用细胞维持液将试验中药粗提物作连续的
1∶2~1∶1 024倍比稀释后，加到已长成Marc-145细
胞单层的细胞培养板上，每个稀释度重复4孔，另
设细胞对照，置37 ℃ 5% CO2培养箱中培养120 h，
每天观察细胞病变情况。
1.2.4 垂花香薷粗提物抗 IBV试验
参照文献［3］，根据 Reed-Muench公式，计算
50%组织培养感染剂量（TCID50）为10-3.75。
采取以下2种处理进行抗 IBV试验［4］：
处理一：先加中药粗提物，后接病毒液。在细
胞已基本长满的 96孔细胞培养板上，加入从低浓
度到高浓度稀释好的同一种中药粗提物，每孔
收稿日期：2013-10-15
修回日期：2013-10-29
摘 要：为研究中药垂花香薷抗鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的作用，采用体外细胞培养
的方法，对中药垂花香薷提取物进行抗 IBV活性试验。结果表明，在TCID50为10-3.75时，阻断、抑
制 IBV的最佳浓度分别为3.91 mg/mL、1.96 mg/mL。
关键词：中药；垂花香薷；鸡传染性支气管炎病毒
技术交流
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DOI:10.16372/j.issn.1004-6364.2014.06.005
2014年第36卷第6期 China Poultry Vol.36，No.6.2014
2.3 垂花香薷对抗 IBV株的作用结果
由表2可知，3.91 mg/mL垂花香薷抗 IBV株阻
断作用最好，与病毒对照差异显著（P<0.05），对细胞
保护效果好；1.96 mg/mL垂花香薷抗 IBV株抑制作
用最好，与病毒对照差异显著（P<0.05），对细胞具
有一定的保护作用。
3 讨 论
本试验用垂花香薷中药是唇形科香薷属植物
的全草，分布于云南东南部、南部或西部等地。现
代药学研究表明，垂花香薷有抗炎、抗菌、抗病毒
等作用［5］。本试验通过观察细胞病变的方法，用垂
花香薷进行抗 IBV株试验，测得垂花香薷对鸡胚成
纤维细胞的最大安全浓度为3.91 mg/mL，病毒TCID50
为10-3.75，1.96 mg/mL垂花香薷抗 IBV效果最好，但
其作用机理有待进一步深入研究。
参考文献：
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安徽农业科学，2010，20：10697-10699.
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社，1999，7：41-42.
100 μL，并设重复，置37 ℃ 5% CO2培养箱中培养
4 h后，加入 100 TCID50 IBV株病毒液作用 2 h，再
加入细胞生长液，每孔 100 μL，置 5% CO2培养箱
中37 ℃培养72 h。
处理二：先接病毒液，再加中药粗提物。用病
毒液作用 2 h，再加药液作用 4 h，其他操作与方式
一相同。
2 结果与分析
2.1 结果判定
每日观察细胞病变，细胞病变判定标准为：细
胞病变 75%~100%记为“++++”，50%~75%记为
“+++”，25%~50%记为“++”，0~25%记为“+”，基本
无病变记为“-”。
2.2 垂花香薷对细胞的毒性作用
由表1可知，试验药物浓度高于7.82 mg/mL时
会对细胞产生毒性作用，使细胞产生病变，且随着
浓度的增加，所产生的毒性作用愈强，细胞病变愈
严重。当垂花香薷浓度为3.91 mg/mL和1.96 mg/mL
时，细胞基本不产生病变，即没有表现出毒性，可取
这2种稀释度的药液用于抗病毒试验。
技术交流
表1 垂花香薷对Marc-145细胞作用的安全浓度 mg/mL
药物浓度
细胞病变
500.00
++++
250.00
++++
125.00
++++
62.50
++++
31.25
+++
15.63
++
7.82
+
3.91
-
1.96
-
0.98
-
表2 不同处理的各组细胞病变效应 mg/mL
药液浓度
3.91
1.96
病毒对照
细胞对照
阻断作用
-
++
++++
-
抑制作用
+
-
++++
-
（上接第52页）最适宜密度；人工草地生态鸡养殖
年限及周期、自然净化时间；大规模生态鸡养殖对
生态系统食物链的影响；结合牧草（苜蓿）生长收
获期、饲养周期及虫、草害等，养殖高效技术在自
然环境中的合理有效利用；鸡粪的直接排放、直接
喷洒消毒和防疫药物对下一批鸡的影响；人工草
地鸡群之间的竞争、求偶、节律、自然繁殖、社群等
行为的人为调节；与生态环境达到高度的适应和
可持续发展的维持方法。
参考文献：
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北畜牧兽医，2012，1：5.
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