全 文 ：　　　　 天然产物研究与开发　 　　　　　
　　　　　　　 NATU RAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPMENT　 Vo1.14　No.1
　
　
　
　
　　收稿日期:2001-08-06　　　修回日期:2001-11-15
　　＊云南省科委自然科学基金资助项目(98C 067M)
滇丹参注射液对兔血小板功能的影响＊
李惠兰1 　闫彩珍1 　张荣平2 　胡建林2
(1.昆明医学院药理教研室　昆明　650031;2.昆明医学院药学系　昆明　650031)
摘　要　观察云南产滇丹参对血小板聚集功能的影响。方法:采用 Born 氏比浊法 , 测定滇丹参体内 、体
外对抗 ADP、PAF、AA诱导的兔血小板聚集的作用。体外每种药物浓度分别为 40 g/ L、20 g/ L、10 g/ L、
5 g/ L、2.5 g/ L , 体内实验分为 7组 , 即生理盐水组 、两种丹参低中高剂量组分别为5 g/kg、10 g/ kg、20 g/
kg , 每组 6只 。结果:与对照组相比 , 滇丹参体外显著抑制ADP、AA 诱导的血小板聚集 , 抑制效应呈浓度
-效应关系(P<0.05 , 0.01), IC50为 33.7 g/ L(ADP)、18.1 g/ L(AA)。滇丹参也显著抑制 PAF 诱导的血
小板聚集 ,其最大抑制率为 36.8%;体内实验结果显示 ,滇丹参在高剂量时可显著抑制 ADP、PAF 和 AA
诱导的血小板聚集(P<0.05 , 0.01),且均具有剂量依赖性。滇丹参在药后 20 min 开始显效 , 40 min 达
到最大抑制作用 ,抑制率分别为 95.6%(ADP)、91.5%(PAF)和 88.5%(AA)。结论:以上结果表明 , 滇
丹参体外 、体内显著抑制血小板聚集 , 且其抗血小板聚集作用优于丹参 , 为进一步开发和利用滇丹参提
供了依据。
关键词　滇丹参;血小板聚集;白兔
　　血小板聚集性增高在缺血性心脏病的发病过程
中起着重要作用 ,丹参是有效的抗心肌缺血新药 ,广
泛应用于国内外 。滇丹参(Salv ia yunnanensis C.
H.Wright)与丹参同属于唇形科鼠尾草植物 ,盛产
于云南 ,具有活血化瘀的作用 ,民间用于胸痹心痛等
痛症 ,已有数百年历史 ,滇丹参注射液主要有效成分
是从根中提取 ,含有迷选香酸 、紫草酸 B 、滇紫草酸 、
丹参素 、丹参酮 ⅡA 等成分。为开发云南的药用资
源 ,本实验研究滇丹参提取液对血小板聚集功能的
影响 。
1　材料
1.1　药品与试剂
滇丹参注射液(含生药 2 g/ml),由昆明医学院
植化室提供 ,丹参(含生药 2 g/ml)上海第九制药厂
生产 ,批号 000604 ,实验前用生理盐水稀释 ,ADP 系
瑞士进口分装 ,溶于磷酸盐缓冲液中 ,花生四稀酸
(arachidonic acid AA)和血小板活化因子(platelet
activating factor.PAF)均属 Sigma 公司的产品 。
PAF 溶于含 0.25% BSA 的 Tris-NaCl 液中 。pH
7.4。AA溶于 100 mmol/L Na2CO3溶液中 ,现配现
用 。
1.2　常用仪器
Centra MP4R 台式冷冻离心机(IN TERNA-
TIONAL EQUPMEN T COMPANY), TGL-16A 高
速台式离心机(上海安亭科学仪器厂),BS-631型自
动平衡血小板凝集仪(上海生化仪器厂)。
1.3　实验动物
日本大耳白兔 ,2 ～ 3 kg , ♀♂兼用 ,由昆明医学
院动物科提供。
2　方 法
2.1　富含血小板血浆(Platelet Rich Plasma , PRP)
和贫血小板血浆(Platelet Poor Plasma , PPP)
的制备
兔自颈动脉放血 ,以 3.8%的枸橼酸钠 9∶1抗
凝收集于塑料离心管中 , 室温 , 1000 rpm 离心 10
min ,取上层液即为 PRP ,剩余血液再以3000 rpm 离
心 15 min ,取上层液为 PPP ,作为测定时调零或用于
调整 PRP 中的血小板。实验过程中 ,PRP 中的血小
板数控制在约 50万/mm-3 。
2.2　血小板聚集性测定
2.2.1　体外实验
分组:日本大耳白兔 ,体重 2 ～ 3 kg ,随机分成
11组 ,滇丹参 、丹参终浓度分别为 40 mg/L 、20 mg/
70
L 、10 mg/L 、5 mg/L 、2.5 mg/L 及生理盐水 ,每组 6
只。按 Bom氏比浊法原理[ 1]采用 BS-631型多功能
血小板聚集仪进行测定。取 PPP 0.2 ml于比浊管
中 ,置于预热孔中;取 PRP 0.2 m l于另一比浊管中
加溶媒或药液 10 μl ,在预热孔中 37 ℃温育 10 min。
测定时将预热后的 PPP 管转插到测试孔中 ,按“调
零”键 ,计算机自动调零 。取出 PPP 管插入 PRP
管 ,按“调幅”键 ,则自动调幅。然后在磁棒搅拌下分
别加入诱导剂 ADP(终浓度 1.5 nmol/L)、PAF(终
浓度 5.2 nmol/L)、AA(终浓度 0.14 nmol/ L),并按
“测试键” ,记录血小板最大聚集率 。
2.2.2　体内实验
分组:日本大耳白兔 ,体重 2 ～ 3 kg ,随机分为 7
组 ,即滇丹参和丹参 5 g/kg 、10 g/kg 、20 g/kg 组 ,另
一组给等体积的生理盐水 ,每组 5只。给药前取血
一次作为对照 ,耳缘静脉注射给药 ,给药后分别在
20 min 、40 min 、60 min 、120 min 、180 min 、240 min
自颈动脉取血制备 PRP 和 PPP ,观察体内给药 ,药
物对不同诱导剂诱导的兔血小板聚集性的影响 。
2.2.3　统计处理
数据用 X±SD表示 , IC50由 Gwbasic软件计算 。
组间比较采用 t检验 。
3　结 果
3.1　体外实验结果
体外研究表明:滇丹参和丹参在体外均能明显
抑制 ADP和 AA诱导的血小板聚集 ,抑制作用呈明
显的浓度-效应关系 ,其半数抑制浓度 IC50分别为滇
丹参 27.3 g/ L(ADP)、19.6 g/L(AA)、丹参 27.2 g/L
(ADP)、11.6 g/L(AA),在高浓度40 mg/ml时对 PAF
诱导的聚集亦有一定的抑制作用 ,抑制率为滇丹参
36.8±7.2%、丹参 22.4±6.1%。结果见表 1。
表 1　滇丹参体外对 ADP 、PAF 、AA 诱导的兔血小板聚集率(%)的影响(X±SD , n=5)
Table 1　Effects of S.yunnanensis C.H Wright on platelet aggregarion of rabbits induced by adp.aa.or paf in vitro
剂量
Drug
g/ L
聚集率(%)Platelet aggregation(%) 抑制率(%)Platelet
聚集抑制 Aggregat ion inhibition(%)
ADP PAF AA ADP PAF AA
生理盐水 NS 56±1.2 63.8±3.5 77.8±4.1＊＊ 0 0 0
丹参MHB 40 29.4±2.5＊＊ 47.8±3.5＊＊ 18.2±4.8＊＊ 47.4±4.6 22.4±6.1 76.6±6.1
20 40.4±2.5＊＊ 50.4±6.2＊ 23.6±5.1＊＊ 28.2±4.5 20±8.8 59.6±13.3
10 46.8±2.5＊＊ 52.6±7.1＊＊ 44.4±3.6＊＊ 16.8±5.7 18.6±7.4 42.8±4.6
5 52.6±3.8 55.6±3.6 51.4±6.8 7±5.5 12±7.1 35.2±7.2
2.5 52.2±3.9 61±4 73.8±8.7 6.2±5.8 3.6±1.2 5±2.1
滇丹参 CHW 40 23±7.6＊＊ 40±4.1＊＊ 25.8±8.8＊＊ 58.4±4.3 36.8±7.2 79.4±12.1
20 35.6±3.6＊＊ 44.8±4.1＊＊ 40.8±3.3＊＊ 36.2±7.1 28.8±11.5 49.2±6.5
10 51±3.7 56.6±6.8 42.4±8.1＊＊ 8.8±1.2 10.2±2.7 45.5±7
5 52.4±3.2 62±2.3 66.8±9.5 6.8±7 2.6±1.9 5±2.8
2.5 54.4±2.1 59.2±4.1 7.09±5.9 2.4±2.4 6±2.1 1.43±1.3
　　注:＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 ,与生理盐水比较(Comparison w ith NS)
3.2　体内实验结果
体内实验结果显示 ,滇丹参和丹参在高剂量时
可显著抑制 ADP 、PAF 和 AA诱导的血小板聚集 。
在低剂量时对 ADP 、PAF 诱导的血小板聚集即有明
显的抑制作用(P <0.05 , 0.01),两种丹参均具有良
好的剂量依赖性 ,高剂量组给药后 40 min 达最大效
应 ,抑制率分别为滇丹参 95.6±5.2%(ADP)、91.5
±5.2%(PAF)、丹参 62.3±13.2%(ADP)、43.5±
9.4%(PAF), 240 min 药效依然存在(P <0.05 ,
0.01)。由表 4 可见 , 滇丹参和丹参在低剂量时对
AA诱导的血小板聚集无明显的抑制作用 ,在高剂
量时最大抑制率分别为滇丹参 88.54 ±14.1%
(AA)、丹参 50.2±8.2%(AA)。与丹参相比 ,滇丹
参效果突出 ,给药 20 min即可显示其抑制作用 , 40
min达到最大抑制效应 ,优于丹参(P<0.05 ,0.01),
结果见表 2 、3 、4。
71Vo1.14　No.1 李惠兰等:滇丹参注射液对兔血小板功能的影响＊ 　　
表 2　滇丹参和丹参体内对 ADP诱导的兔血小板聚集率的影响(聚集百分率)(X±SD, n=5)
Table 2　Effects of S .yunnanensis C.H.Wright on platele t agg regarion of rabbit induced by adp.in vivo(aggregation %)
组别
Group)
剂量
Drug
(g/ kg)
给药前
Before drug
0分钟(min)
给药后(分)聚集率 After drug(min)platelet aggregation(%)
20 40 60 120 180 240
生理盐水 NS 50.8±1.64 51.8±0.84 50.4±2.07 48.4±4.04 45.2±1.64 45.8±3.27 46.8±4.60
丹参MHB 5 51.4±1.67 47.2±2.59＊＊ 35.2±6.14＊＊ 36.2±5.40＊＊ 42.2±5.63 43±2.97
10 52.8±2.28 38.4±3.65＊＊ 30±7.18＊＊ 32.4±5.59＊＊ 44.4±6.27 40.6±8.78＊
20 50.8±0.84 25.6±7.63＊＊ 21.4±9.26＊＊ 18.6±6.66＊＊ 27.6±7.39＊＊ 35±5.43＊＊ 38.6±2.19＊
滇丹参 CHW 5 52.4±3.05 37.8±5.76＊＊Δ 37.6±6.58＊＊ 37.8±6.53＊ 43.2±5.50 43±3.08
10 56.8±7.33 24.4±4.98＊＊ 31.4±9.99＊＊ 35.4±7.89＊ 42.6±11.7 44.6±7.23
20 52±3.08 5.8±1.99＊＊Δ 4.6±2.79＊＊Δ 18.4±7.68＊＊ 23.4±6.31＊＊Δ 34±7.38＊ΔΔ 36±8.60＊
注:＊P<0.05 , ＊＊P<0.01与相同时间的 NS比较(Comparison with NS)ΔP<0.05 , ΔΔP<0.01与相同浓度的丹参比较(Comparison wit h drug)
表 3　滇丹参和丹参体内对 PAF诱导的兔血小板聚集率的影响(X±SD , n=5)
Table 2　Effects of S .yunnanensis C.H.Wright on platelet agg regarion of rabbit induced by paf.in vivo(agg regation %)
组别
Group)
剂量
Drug
(g/ kg)
给药前
Before drug
0分钟(min)
给药后(分)聚集率 After drug(min)platelet aggregation(%)
20 40 60 120 180 240
生理盐水 NS 60.6±1.82 61.4±2.07 57.8±2.86 59.8±4.14 55±3.39 57.8±3.03 53.4±4.93
丹参MHB 5 60.6±1.82 54.6±4.04＊ 50.6±6.39 50.8±3.83＊＊ 44.6±3.51 57.4±7.57
10 59.6±3.65 45.6±6.35＊＊ 47.4±8.29＊ 47.6±9.39＊＊ 45.4±7.8＊ 47±7.07＊
20 60.4±1.67 43.4±5.68＊＊ 35.2±6.02＊＊ 34.2±6.14＊＊ 37.2±4.97＊＊ 50.4±7.3＊ 54.4±6.5
滇丹参 CHW 5 64.4±2.88 52.4±7.02＊ 55.8±1.92 52.2±3.42＊ 57.8±4.49ΔΔ 63.4±5.41
10 60.4±1.82 37.2±12.07＊＊36.8±10.66＊＊ 46±7.31＊＊ 51.6±11.1 58±6.36Δ
20 59.4±2.79 12.4±16.57＊＊ 5.2±9.27＊＊ΔΔ 26.8±12.91＊＊ 32.8±5.81＊＊ 47.2±8.17＊ 49.6±5.41
注:＊P<0.05 , ＊＊P<0.01与相同时间的 NS比较(Comparison with NS)ΔP<0.05 , ΔΔP<0.01与相同浓度的丹参比较(Comparison wit h drug)
表 4　滇丹参和丹参体内对 AA诱导的兔血小板聚集率的影响(X±SD , n=5)
Table 4　Effects of S .yunnanensis C.H.Wright on platelet ag gregarion of rabbit induced by AA.in vivo(aggregation %)
组别
Group)
剂量
Drug
(g/ kg)
给药前
Before drug
0分钟(min)
给药后(分)聚集率 After drug(min)platelet aggregation(%)
20 40 60 120 180 240
生理盐水 NS 69.2±4.97 70.2±6.02 63.6±4.77 63.8±7.45 64±1.22 62.4±4.77 60.2±6.02
丹参MHB 5 68.6±4.51 63.4±7.4 56.2±8.96 57.8±7.23 62.8±10.33 70.8±1.79
10 71±3.94 65.4±8.38 57±8.8 47±10.77＊ 55.6±5.9＊ 52.8±6.38＊
20 74±7.75 57.8±11.56 35.8±10.9＊＊ 40.8±10.73＊＊ 48.8±6.1 65±3.61 72.8±8.93
滇丹参 CHW 5 72.6±2.88 63.2±5.36 57.2±7.95 58.8±6.72 55.4±9.61 67.2±2.95
10 71.4±4.77 31.6±12.78＊＊ΔΔ 45.2±2.21＊＊ 55.8±17.24 67.8±5.67 71.2±6.83
20 73.4±3.65 12.2±15.63＊＊ΔΔ8.4±10.36＊＊ΔΔ 39.4±2.35 58.2±8.87 68.4±9.15 67.6±6.27
注:＊P<0.05 , ＊＊P<0.01与相同时间的 NS比较(Comparison with NS)ΔP<0.05 , ΔΔP<0.01与相同浓度的丹参比较(Comparison wit h drug)
4　讨论
现代医学研究表明 ,缺血性心脏病与动脉粥样
硬化 、斑块沉着 、血管内血栓形成 、血小板功能异常 、
动脉痉挛等因素有关 ,它们之间可相互作用 ,引起心
肌供血不足 ,进而导致心功能及血流动力学异常 ,而
后出现各种不同的临床表现[ 2] 。抗血小板聚集作
用是其中有效防治缺血性心脏病的环节之一 。滇丹
参和丹参在体内 、体外均能显著抑制 ADP 、PAF 、AA
诱导的兔血小板聚集;滇丹参和丹参可通过抗血小
板聚集发挥其抗心肌缺血作用 。
血小板的聚集受多种因素的影响 ,目前认为 ,血
小板活化聚集主要通过三条途径 ,即 ADP 途径 、AA
代谢途径和 PAF 途径[ 3] ,因此 ,选择不同的诱导剂
有助于了解药物的作用谱及作用环节 。本实验选用
ADP 、PAF 、AA作为诱导剂分别代表血小板活化的
三条途径 ,观察滇丹参和丹参对血小板聚集性的影
响 。体外实验显示 ,两种丹参对 ADP 、PAF 、AA 诱
导的血小板聚集有抑制作用 ,体内实验结果表明 ,小
剂量药物即对ADP 和 PAF 诱导的血小板聚集有抑
制作用 ,大剂量对三条途径均有效 ,说明滇丹参对三
条代谢途径有一定的选择抑制作用 。与丹参相比 ,
滇丹参效果突出 ,其对三条途径的抑制率均达 90%
左右 ,并且其高峰抑制作用持续时间长 ,滇丹参抗血
小板作用强于丹参 。
据文献报道 ,丹参注射液可抑制 ADP诱导的血
小板聚集 ,认为丹参注射液中的活性成分与血小板
a受体不发生交互作用 ,主要通过抑制磷酸二脂酶
72　　 天然产物研究与开发 Vo1.14　No.1
的活力 ,增加血小板中 CAMP , 从而抑制血小板的
聚集和 5-羟色胺的释放[ 4～ 6] 。丹参素可抑制血小
板 TXA2 的合成与释放[ 7] 。陆志勇等研究表明 ,
764-3 能抑制血小板膜颗粒膜蛋白-140 和糖蛋白
GP Ⅱb/ Ⅲa复合物的分子表达 ,再次提示该药为一
种较强的血小板功能抑制剂。其抑制 GP Ⅱb/ Ⅲa
复合物的分子数 ,可能是其抑制血小板聚集的机
理[ 8] 。
本实验显示丹参与文献报道一致 , 能够对抗
ADP 、PAF 和 AA 三种诱导剂诱导的血小板聚集 。
滇丹参与丹参作用相同 ,其机理也可能相似。根据
参考文献[ 4～ 8]及本实验结果 ,提示滇丹参在低剂量
情况下可能通过:①抑制磷酸二脂酶的活力 ,增加血
小板中环核苷酸浓度 ,从而抑制血小板的聚集 。 ②
抑制血小板表达黏附分子[ 9] ,使膜上的 ADP 、PAF
等受体不能与诱导剂 ADP 、PAF 有效结合 ,因而抑
制血小板的聚集。在高剂量情况下 ,除上述可能机
制外 ,还可能通过抑制血小板环氧酶 、TXA2 合成酶
而抑制血小板 TXA2 的生成 ,或直接拮抗血小板膜
TXA2 受体 。除特异性抑制血小板聚集外 ,滇丹参
还可能通过非特异途径对血小板聚集产生影响。即
通过抑制脂类过氧化物的生成及其钙拮抗作用[ 10]
等对血小板产生影响 。因此 ,滇丹参是一种多功能
抑制剂 ,可以通过多条途径 、多个层次对血小板聚集
起抑制作用 。滇丹参强大的血小板抑制作用与其有
效化学成分的种类和含量有关 。综上所述 ,滇丹参
和丹参具有明显的抗血小板聚集作用 。我们的研究
表明:滇丹参的抗血小板聚集作用优于丹参 ,以上实
验为进一步开发和利用滇丹参提供了依据 。
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STUDY OF THE EFFECTOF S.YUNNANENSIS C.H.WRIGHTON
PLATELET FUNCTIONOF RABBIS
LI Hui-lan1 , YAN Cai-zheng1 ,ZHANG Rong-ping2 ,HU Jie-lin2
(1.Deparunent of Phannacology Kunning Medical College , Kunming　650031 , China;
2.Faculty of Phannacy Kunming Medical College , Kunming　650031 , China)
Abstract　Objective:to study the ef fect of S .Y unnanensis C.H.Wright on platelet ag gregation.Methods:the
rabbits w ere devided in to seven groups , every g roup have f ive.The rabbit platelet aggregation w as determined
using by Adenosin Diphosphate(ADP),Platelet Activating Factor(PAF), Arachidonic Acid(AA)as inducing a-
gents in vi tro or in vivo.The central venous blood samples w as collected from artery at 20 min ,40 min , 60 min ,
120 min ,180 min , 240 min.Results:the t reated g roups markedly inhibited rabbit platelet agg regation induced by
ADP ,PAF , AA in vi tro in concentration-effect relationship(P <0.01).IC50 is 33.7 g/L(ADP), 18.1 g/L(AA).In vivo two drug s had a signif icant inhibition effect by ADP ,PAF ,AA-induced rabbit patelet agg regat ion
in a dose-dependent manner.The most inhibi tory of S .yunnanensis C.H.Wright w as 95.6%(ADP), 91.5%
(PAF),88.5%(AA),Slavia mit ionhiza Bunge w as 62.3%(ADP),43.5%(PAF), 50.2%(AA).In comparison
S .yunnanensis C.H.Wright w as mo re eff iciency than Slavia mitionhiza Bunge(P <0.05).Conclusions:f rom
the results , it is indicated that the S .yunnanensis C.H.Wright significantly inhibit the platelet agg regation.Our
experiment show s that the inhibito ry of platelet aggregation of S .yunnanensis C.H .Wright is higher than that
of Salvia milt ionhiza Bunge , These experiment data support the exploition and utilizat ion of S .yunnanensis C.
H.Wright.
Key words　S .yunnanensis C.H.Wright;Platclct agg regation;rabbit
73Vo1.14　No.1 李惠兰等:滇丹参注射液对兔血小板功能的影响＊