免费文献传递   相关文献

滇丹参干预后瘢痕成纤维细胞生物学行为的变化



全 文 :中国组织工程研究与临床康复 第 13卷 第 2期 2009–01–08出版
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research January 8, 2009 Vol.13, No.2
P.O. Box 1200, Shenyang 110004 cn.zglckf.com 320
1Department of Oral
and Maxillofacial
Surgery, First
Affiliated Hospital;
2Clinical Medical
Experiment Research
Center, Kunming
Medical College,
Kunming 650032,
Yunnan Province,
China

Sun Jia-ping,
Attending physician,
Department of Oral
and Maxillofacial
Surgery, First
Affiliated Hospital of
Kunming Medical
College , Kunming
650032, Yunnan
Province, China
jps770123@163.com

Correspondence to:
Liu Liu, Doctor,
Professor, Doctoral
supervisor,
Department of Oral
and Maxillofacial
Surgery, First
Affiliated Hospital of
Kunming Medical
College , Kunming
650032, Yunnan
Province, China
liuliu3939@126.com

Received: 2008-05-13
Accepted: 2008-09-27


昆明医学院,1 第
一附属医院口腔
颌面外科,2 临床
医学实验研究中
心,云南省昆明市
650032

孙家平,女,1977
年生,云南省昆明
市人,汉族,2004
年昆明医学院毕
业,主治医师,主
要从事颌面部整
形美容临床和基
础研究。
jps770123@163.
com

通 讯 作 者 : 刘
流,博士,教授,
博士生导师,昆明
医学院第一附属
医院口腔颌面外
科,云南省昆明市
650032
liuliu3939@126.
com

中图分类号:R619.6
文献标识码:B
文章编号:1673-8225
(2009)02-00320-04

收稿日期:2008-05-13
修回日期:2008-09-27
(54200805110010/
W·Z)

滇丹参干预后瘢痕成纤维细胞生物学行为的变化
孙家平1,刘 流1,赵德萍2,袁瑞红1,李志军1
Effect of Salvia yunnanensis C.H.Wright on biological behavior of scar-derived fibroblasts
Sun Jia-ping1, Liu Liu1, Zhao De-ping2, Yuan Rui-hong1, Li Zhi-jun1
Abstract
BACKGROUND: It has proved that Salvia miltiorrhiza exhibits an important role in the process of wound healing. Salvia
yunnanensis C.H.Wright has basically identical chemical composition, especially, superior in certain active component to Salvia
miltiorrhiza.
OBJECTIVE: To observe the effect of Salvia yunnanensis C.H.Wright on scar-derived fibroblasts, further more, to explore its
function and mechanism to scars.
DESIGE, TIME AND SETTING: The group control observation was performed in Kunming Medical College between March 2005
and March 2006.
PARTICIPANTS: The scars were harvested from 8 patients, including 5 male and 3 female, with aged 7-38 years. The
pathological course of scar was 1-12 years. Informed consent was obtained from each patient.
METHODS: The scar-derived fibroblasts were randomly divided into the experimental, negative control, and positive control
groups, following cultured in solution containing different concentration Salvia yunnanensis C.H.Wright (0.1 g/mL, 0.2 g/mL,
0.4 g/mL, 0.6 g/mL) for 24 hours in vitro, DMEM culture medium and DMEM culture medium with 1 000 U/mL rhIFN-α2a were
added, respectively.
MAIN OUTCOME MEASURES: DNA level, as well as cell cycle, was analyzed by light microscope, MTT assay, and flow
cytometry, respectively.
RESULTS: After adding with Salvia yunnanensis C.H.Wright, the density of cells depressed and the spindle-shape cell were
discovered becoming retractation and abnormity. Compared with the negative control group, cell growth was significantly inhibited in
the experimental group (P < 0.05). Salvia yunnanensis C.H.Wright with high concentration (0.4, 0.2 g/mL) had obvious inhibition on
cell growth than that of the low concentration (0.1,0.05 g/mL) and positive control groups (P < 0.05). The percentage of the cells in the
growth phases (S-G2-M) of cell cycle decreased and the level of apoptosis increased in the experimental groups.
CONCLUSION: Salvia yunnanensis C.H.Wright can inhibit scar-derived fibroblasts growth, proliferation and collagen synthesis
with a concentration-dependent manner.

Sun JP, Liu L, Zhao DP, Yuan RH, Li ZJ. Effect of Salvia yunnanensis C.H.Wright on biological behavior of scar-derived
fibroblasts.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008;13(2): 320-323(China)
[http://www.crter.cn http://en.zglckf.com]

摘要
背景:研究证实丹参在创伤修复和愈合过程中起重要作用。滇丹参所含化学成分与正品丹参基本一致,其中某些活性成分含
量高于正品丹参。
目的:观察滇丹参对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,揭示其对瘢痕的作用及机制。
设计、时间及地点:分组对照观察,于 2005-03/2006-03在昆明医学院完成。
对象:瘢痕标本取自 8例患者颌面颈部遗留瘢痕,男 5例,女 3例;年龄 7~38岁;瘢痕病程 1~12年,患者对实验均知情
同意。
方法:对瘢痕成纤维细胞进行体外培养,随机分组,分别加入 0.05,0.1,0.2,0.4 g/mL不同质量浓度的滇丹参液培养 24 h,
阴性对照组加入不含滇丹参的 DMEM培养液,阳性对照组加入含稀释成 1 000 U/mL rhIFN-α2a的 DMEM培养液。
主要观察指标:采用光镜观察、四甲基偶氮唑盐比色测定分析、流式细胞术对成纤维细胞 DNA水平、细胞周期分析。
结果:实验组加入滇丹参后,细胞生长密度降低,梭状突起回缩,细胞双极变得圆顿,细胞形态变得不规则。与阴性对照组
相比,加入滇丹参组成纤维细胞的生长受到明显的抑制(P < 0.05),较高质量浓度(0.4,0.2 g/mL)滇丹参对瘢痕成纤维细胞
生长和抑制比低质量浓度(0.1,0.05 g/mL)和 rhIFN-α2a 1 000 U/mL组明显(P < 0.05)。增殖期(S-G2-M)细胞百分数明显降
低,细胞凋亡水平明显提高。
结论:滇丹参对瘢痕成纤维细胞的生长、增殖及胶原合成有抑制作用,不同的质量浓度作用效果有差别。
关键词:瘢痕;滇丹参;成纤维细胞;创伤愈合

孙家平,刘流,赵德萍,袁瑞红,李志军. 滇丹参干预后瘢痕成纤维细胞生物学行为的变化[J].中国组织工程研究与临床康复,
2009,13(2):320-323 [http://www.crter.org http://cn.zglckf.com]


0 引言

对病理性瘢痕目前比较一致的看法是在皮
肤创伤愈合过程中,成纤维细胞的过度增殖形
成的[1-3],因此,可以通过控制成纤维细胞胶原
合成来抑制瘢痕的形成[4]。近年来,中药治疗
增生性瘢痕备受关注,其中活血化瘀的丹参,
基础医学


321
在创伤修复和愈合过程中也起着不可低估的作用。滇丹
参在云南地区具有悠久的使用历史,分布广,资源丰富。
中国药典规定丹参酮ⅡA的含量是评定丹参质量的重要
指标[5]。成分分析显示,滇丹参与正品丹参相比总丹参
酮含量略高,总酚酸含量高约1倍,滇丹参酮ⅡA含量略
高,原儿茶醛含量高2倍[6],是丹参替代品中质量较高品。
胡建林[7]等采用双波长薄层扫描法测定3种滇产丹参植
物丹参酮ⅡA的含量,并以正品丹参为对比,得出结论
为滇丹参中丹参酮ⅡA的含量不低于正品丹参,其中某
些活性成分含量高于正品丹参[8]。实验观察了滇丹参对
瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。

1 对象和方法

设计:分组对照观察。
时间及地点:实验于2005-03/2006-03在昆明医学
院完成。
对象:取自8例临床手术切除的瘢痕标本(其中5例
为外伤后瘢痕,2例烧伤后瘢痕,1例术后遗留瘢痕;男
5例,女3例;年龄7~38岁,平均18岁;瘢痕病程1~12
年,平均4年。术前未接受过放射、激素、激光等其他
治疗,瘢痕标本均取自颌面颈部。根据国务院《医疗机
构管理条例》规定[9],患者均对实验知情同意。











滇丹参主要活性成分的分子结构见图1。




























实验方法:
瘢痕成纤维细胞原代培养及传代:将组织置于无菌生理
盐水中漂洗10 min,去除组织所附血液,置于200 U/mL
青霉素、200 U/mL链霉素双抗液培养皿中漂洗10 min。
用眼科剪完全修去表皮及皮下组织,块剪成1.0~2.0 mm2
左右的小组织块。将小组织块用眼科镊送入50 mL培养瓶
中,在瓶壁上均匀摆置,间距5 mm,翻瓶放置于37 ℃、
体积分数为0.05的CO2孵箱中静置2 h,让组织块与瓶壁粘
贴。翻瓶,加入含体积分数为0.1的新生胎牛血清及
100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素双抗液的完全DMEM
培养液(pH为7.2~7.4),于37 ℃、体积分数为0.05的CO2
孵箱中静置培养。静置培养三四天后换液,待成纤维细胞
从组织大批长出并融合,铺满80%以上瓶壁时进行传代。
滇丹参对成纤维细胞生长的影响:取培养至3~6代成对
数生长期细胞,消化后用无血清DMEM培养液制成细胞
悬液,调整细胞数为5×106 L-1,接种于96孔培养板中,
每孔加入单细胞悬液200 μL、将96孔培养板移入
37 ℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中培养过夜。取出
96孔培养板,吸弃原培养液,实验组分别将含稀释成不
同浓度滇丹参(0.05,0.1,0.2,0.4 g/mL)的DMEM培养
液加入孔中,阴性对照组加入不含滇丹参的DMEM培养
液,阳性对照组加入含稀释成1 000 U/mL rhIFN-α2a
的DMEM培养液。每个样本设3个平行孔。将96孔培养
板移入37 ℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中培养24 h。
四甲基偶氮唑盐(MTT)比色试验:取出96孔培养板,
每孔加入四甲基偶氮唑盐溶液(5 g/L)20 μL,继续培养
4 h。4 h后终止培养,小心吸去孔内上清液,每孔加入
150 μL二甲基亚砜,振荡10 min,使结晶物充分溶解。
比色:选择570 nm波长,在酶联免疫检测仪上测定各孔
光吸收(A)值。各测定孔A值减空白对照孔A值,为测得
的实际A值。
Tanshinone Ⅰ
Figure 1 The molecular formula of main active component in
Salvia yunnanensis C.H.Wright
图 1 滇丹参主要活动成分分子结构
滇丹参注射液的制备:
①将滇丹参(产地:云南)除去杂质,称取 5 kg,洗净,再用蒸
馏水冲洗后。
②加蒸馏水煎煮 3次,第 1次加蒸馏水约 30 L,煮沸 2 h,第
2次加蒸馏水约 10 L,煮沸 1.5 h,第 3次加蒸馏水约 8 L,煮
沸 1.5 h。
③药液过滤合并,浓缩至每毫升合生药 1.5~2.0 g,冷却后,加
入乙醇至合醇量为 75%,达加边搅,静止 40 h,过滤,回收乙
醇,浓缩至每毫升合生药 3 g左右。
④加入乙醇至含酵量为 85%,边加边搅,静止 40 h,加入约
1%活性炭,冷脱色 1 h,过滤,回收乙醇,浓缩至每毫升合生
药 3~5 g。
⑤加入 13倍量的重蒸馏水,静止 16 h,过滤,滤波浓缩至每
毫升合生药 3 g左右,加入乙醇至含醇量为 80%,边加边投,
静止 40 h,过滤回收乙醇,浓缩至每毫升合生药约 3 g。
⑥以适量重蒸馏水稀释至每毫升合生药 2 g 左右,以 10 氢氧
化钠调节 pH至 7左右,加热煎煮 1 h,加入 1%活性碳,煮沸
15 min,过滤,以重蒸馏水稀释至每毫升合生药 2 g待用。
R
O
O
O
O
O
O
Tanshinone ⅡA R=CH3
Tanshinone ⅡB R=CH2OH
Tanshinone Ⅰ: molecular formula was C18H12O3, with relative molecu-
lar mass of 276.28; Tanshinone ⅡA: molecular formula was C19H18O3,
with relative molecular mass of 294.33; Tanshinone ⅡB: molecular
formula was C19H18O4, with relative molecular mass of 310.33
试剂及仪器 来源
DMEM培养基
新生胎牛血清
胰蛋白酶
四甲基偶氮唑盐(MTT)溶液
rhIFN-α2a
CO2培养箱
NH. WZI. CU600电热恒温水温箱
ELX-800酶标检测仪
血球计数仪,XMT-7000型烤箱
滇丹参注射液含生药 2 .0 g/ mL

美国GIBCO公司
杭州四季青生物工程材料有限公司
美国SIGMA公司
中山公司
长春基因药业股份有限公司
德国Heraeus公司
上海医疗器械七厂
BIO-TEK公司
上海实验仪器总厂
由昆明医学院药学院植物化学
教研室提供
www.CRTER.org孙家平,等. 滇丹参干预后瘢痕成纤维细胞生物学行为的变化
ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH

孙家平,等. 滇丹参干预后瘢痕成纤维细胞生物学行为的变化
P.O. Box 1200, Shenyang 110004 cn.zglckf.com 322
www.CRTER.org
流式细胞术对成纤维细胞DNA含量、细胞周期分析:取
6~8代对数生长期细胞,消化后制成单细胞悬液,调整细
胞数为1×109 L-1,接种于50 mL培养瓶中。将培养瓶置
入37 ℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中分别培养24 h。
倒弃原培养液,实验组加入含实验浓度滇丹参的培养液,
对照组加入相同容积的不含滇丹参的DMEM,将培养瓶
移入37 ℃、体积分数为0.05的 CO2孵箱中培养24 h。
取出培养瓶,消化后制成单细胞悬液,1 000 r/min离心
3 min,弃上清。分别加入700 μL无水乙醇和300 μL
磷酸盐缓冲液固定。调整细胞数(1.0~2.0)×109 L-1,加入
1.5 mL的试管中,用磷酸盐缓冲液洗涤2次,500 g室温
离心2 min。用0.2% BSA+磷酸盐缓冲液洗涤2次,700 g
室温离心3 min。加入体积分数为0.7的乙醇200 μL
(140 μL冰乙醇+60 μL磷酸盐缓冲液),在-20 ℃放置
30 min,700 g室温离心3 min,去上清,用含0.2%BSA
的磷酸盐缓冲液1 mL洗涤2次。配制TDT液(27 μL TDT
Buffer+1.5 μL FITC-dUTP+1.5 μL TDT)和阴性对照液
(28.5 μL TDT Buffer+1.5 μL FITC-dUTP),每个样品均
为30 μL。上述试管去上清后,同一样品分为两管,分别
加入TDT反应液及阴性对照液各30 μL,放置在37 ℃
下孵育1 h。加入1 mL含0.2% BSA的磷酸盐缓冲液洗涤,
700 g室温离心3 min。去上清,加入1% RANase 20 μL,
1% TretenX-100 20 μL,放置在37 ℃下孵育15 min。加
入100 mL/L的PI染液1 mL,避光放置15~30 min,24 h内
上机检。采集后用WincycleDNA分析软件分析FL3单门中
的周期,得出G0/G1期、G2/M期、S期及PI等细胞生长特点。
主要观察指标:①瘢痕成纤维细胞形态学观察。②
四甲基偶氮唑盐比色法结果。③流式细胞仪测定成纤维
细胞DNA含量。
设计、实施、评估者:设计和评估者为第二作者,
实施者为第一作者。
统计学分析:实验结果用x
_
±s表示,由第一作者采
用SPSS 11.5软件包。采用LSD法和q检验。以P < 0.05
表示差异具有显著性意义。

2 结果

2.1 瘢痕成纤维细胞形态学观察 见图2,3。



















实验组加入滇丹参后6 h细胞形态开始发生变化,
可见细胞轮廓清晰,细胞核明显,高倍镜下见细胞质内
颗粒明显。加药24 h后,细胞形态不规则,排列散乱,
可见部分细胞脱离。
2.2 四甲基偶氮唑盐比色法结果 见表1。





















2.3 流式细胞仪测定成纤维细胞DNA结果 见图4,5。










Figure 2 Cell outline with clear cellular nucleus could be seen
after 6 hours of adding Salvia yunnanensis C.H.Wright
(×200)
图 2 实验组加药 6 h细胞轮廓,细胞核明显(×200)
Figure 3 Cells arrayed disorderly and loosen with irregular
morphology could be seen after 24 hours of adding
Salvia yunnanensis C.H.Wright (×200)
图 3 实验组加药 24 h后,细胞形态不规则,排列散乱、
疏松(×200)
表 1 各组药物对瘢痕成纤维细胞生长影响
Table 1 The effect of Salvia yunnanensis C.H.Wright with
different concentration on scar-derived fibroblasts
growth (x
_
±s, n=8)
P < 0.05, vs. blank control group
Group A570 nm P
Blank
rhIFN-α 2a 1 000 U/mL
0.4 g/mL Salvia yunnanensis C.H.Wright
0.2 g/mL Salvia yunnanensis C.H.Wright
0.1 g/mL Salvia yunnanensis C.H.Wright
0.05 g/mL Salvia yunnanensis C.H.Wright
0.48±0.06
0.28±0.08
0.21±0.04
0.20±0.06
0.26±0.05
0.29±0.07

0.036
0.026
0.027
0.031
0.037
表 1显示:
与空白对照组相比,阳性对照组和各浓度滇丹参组间差异有显
著性意义 (P < 0.05)。
阳性对照组与较高质量浓度滇丹参组(0.4 g/mL;0.2 g/mL)间差
异有显著性意义 (P < 0.05),而与较低质量浓度滇丹参组
(0.1 g/mL;0.05 g/mL)间差异无显著性意义(P > 0.05)。
较高质量浓度滇丹参组(0.4 g/mL;0.2 g/mL)与较低质量浓度滇
丹参组(0.1 g/mL;0.05g/mL)间差异有显著性意义(P < 0.05)。
较高质量浓度滇丹参组(0.4 g/mL;0.2 g/mL)间差异没有显著性
意义(P > 0.05),而较低质量浓度 (0.1 g/mL;0.05 g/mL) 滇丹
参组组间差异有显著性意义(P < 0.05)。
Figure 4 Results of fibroblast DNA content in the experimental
group by flow cytometry
图 4 实验组流式细胞仪测定成纤维细胞 DNA结果


323


















3 讨论

有较多的研究证实丹参酮ⅡA对瘢痕成纤维细胞
的增殖具有显著的抑制作用,并且能够诱导其发生凋
亡[10]。课题组用丹参作用于体外培养的成纤维细胞[11],
采用四甲基偶氮唑盐测定、流式细胞仪等方法观察和测
定结果显示:丹参对瘢痕成纤维细胞的生长、增殖有抑
制作用。并且对兔耳瘢痕模型进行研究,也证实丹参对
其有抑制作用[12]。
实验结果显示:实验组加入滇丹参后,可使成纤维
细胞的形态改变,梭状突起回缩,细胞核明显,部分细
胞脱离,提示成纤维细胞活性降低,从而抑制了成纤维
细胞的增殖和胶原的合成。四甲基偶氮唑盐结果显示,
与相应的对照组相比,加入滇丹参24 h的A570值存在显
著性差异(P < 0.05),也提示了成纤维细胞的生长受到明
显的抑制。流式细胞术测定结果显示,加入滇丹参后,
增殖期(S-G2-M)细胞百分数低于对照组,提示滇丹参能
使分裂期的成纤维细胞减少,从而抑制成纤维细胞的增
殖和胶原的合成。
丹参可能通过改善微循环、清除氧自由基、调节钙
水平等作用来抑制成纤维细胞的增殖。Lepault等[13]证实
与成熟瘢痕比较,过度增生的瘢痕中微血管闭塞较多。
Asai等[14]证明改善微循环可以促进创伤的愈合,而动物
实验发现丹参具有减轻中性粒细胞和内皮细胞黏附的
作用[15],下调血管内皮生长因子的表达[16]。提示丹参通
过以上作用改善微循环从而抑制瘢痕的增生。并且在瘢
痕的形成中,氧自由基的作用已被较多实验证实,氧自由
基可造成局部缺血影响创伤的愈合[17]。丹参可以减少内源
性肾上腺素的释放,而肾上腺素在有O2存在时发生氧化产
生O2-,此作用可以间接的清除氧自由基,有研究还表明
丹参通过保护内皮细胞[18],从而起到抗氧化作用[19]。还有
较多报道证实钙离子拮抗剂可以抑制瘢痕疙瘩和增生性
瘢痕[20],丹参可以显著抑制钙通道的开放[21]。

4 参考文献

[1] Atiyeh BS.Nonsurgical management of hypertrophic scars:
evidence-based therapies, stan dard practices, and emerging
methods. Aesthetic Plast Surg. 2007;31(5):468-492; discussion
493-494.
[2] Lazareth I. Skin scarring, a complex mechanism. Rev Infirm.
2007;3(130):12-13.
[3] Rajkumar VS,Shiwen X,Bostrom M,et al.Platelet-derived growth
factor-beta receptor activation is essential for fibroblast and
pericyte recruitment during cutaneous wound healing. Am J
Pathol. 2006 ;169(6):2254-2265.
[4] Tandara AA, Kloeters O, Mogford JE, et al.Hydrated keratinocytes
reduce collagen synthesis by fibroblasts via paracrine
mechanisms. Wound Repair Regen. 2007;15(4):497-504.
[5] States Pharmacopoeia Commission. Beijing Chemical lndustry
Press 2005.
国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]. 2版.北京:化学工业出版
社,2005
[6] Qian ZG,Liang XY,Hou AG,et al.Zhongyaocai 2002;25(9):628
钱子刚,梁晓原,侯安国,等.滇丹参药用植物资源[J].中药材,2002,
25(9):628.
[7] Hu JL,Zhang RP,Li HL,et al.Zhongguo Zhongyiyao Keji. 2000;7(6):
381-382.
胡建林,张荣平,李惠兰,等. 三种滇产鼠尾草属植物丹参酮IIA的薄层
扫描定量[J].中国中医药科技,2000,7(6):381-382.
[8] Liang XY,Hou AG,Qian ZG,et al.Yunnan Zhongyi Zhongyao Zazhi,
1999,20(6):27-28.
梁晓原,候安国,钱子刚,等.云南5种丹参植物资源总丹参酮的含量测
定[J].云南中医中药杂志,1999,20(6):27-28.
[9] State Council of the Peoples Republic of China. Administrative
Regulations on Medical Institution. 1994-09-01.
中华人民共和国国务院.医疗机构管理条例.1994-09-01.
[10] Xiao XN,Zhang PH,Luo SJ,et al.Guangdong Yixueyuan Xuebao
2005;23(4):359-360.
肖小娜,张培华,罗少军, 等. 丹参酮ⅡA对增生性瘢痕成纤维细胞凋
亡的作用[J].广东医学院学报,2005, 23 (4):359-360.
[11] Liu L,Zhao DP,Yu M,et al.Kunming Yixueyuan Xuebao 2006; 27(3):
41- 45.
刘流,赵德萍,余梅,等. 丹参对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响[J].
昆明医学院学报,2006, 27(3):41- 45.
[12] Liu L,Zhao DP,Yu M,et al.Huaxi Kouqing Yixue Zazhi 2006,
24(5):476-477.
刘流,赵德萍,余梅,等. 丹参对免耳瘢痕模型作用的实验研究[J].华西
口腔医学杂志,2006,24(5):476-477.
[13] Lepault E, Celeste C, Dore M,et al. Comparative study on
microvascular occlusion and apoptosis in body and limb wounds
in the horse. Wound Repair Regen. 2005;13(5):520-529.
[14] Asai J,Takenaka H,Kusano KF, et al.Topical sonic hedgehog gene
therapy accelerates wound healing in diabetes by enhancing
endothelial progenitor cell-mediated microvascular remodeling.
Circulation. 2006 ,113(20):2413-2424.
[15] Chen X,Sha JP,Yin Y,et al.Chengdu Zhongyiyao Daxue Xuebao.
2002,25(2):16-173.
陈炫,沙建平,尹毅,等. 丹参抗严重烧伤早期中性粒细胞一内皮细胞
粘附机理的研究[J]. 成都中医药大学学报,2002,25(2):16-17.
[16] Ding M, Ye TX, Zhao GR, et al. Aqueous extract of Salvia
miltiorrhiza attenuates increased endothelial permeability induced
by tumor necrosis factor-alpha. Int Immunopharmacol. 2005;
5(11):1641-1651.
[17] Kopal C, Deveci M, Oztürk S, et al.Effects of topical glutathione
treatment in rat ischemic wound model. Ann Plast Surg. 2007;
58(4): 449-455.
[18] Wang XR, Lin H, Wang ZH.Protective effects of
electroacupuncture and Salviae Miltiorrhizae on myocardial
ischemia/reperfusion in rabbits. Acupunct Electrother Res. 2003;
28(3-4):175-182.
[19] Ding M, Zhao GR, Ye TX, et al. Salvia miltiorrhiza Protects
Endothelial Cells Against Oxidative Stress. J Altern Complement
Med. 2006;12(1):5-6.
[20] Shimizu T, Kanai K, Kyo Y, et al. Effect of tranilast on matrix
metalloproteinase production from neutrophils in-vitro. J Pharm
Pharmacol. 2006; 58(1):91-99.
[21] Lam FF, Yeung JH, Cheung JH, et al.Pharmacological evidence
for calcium channel inhibition by danshen (Salvia miltiorrhiza) on
rat isolated femoral artery. J Cardiovasc Pharmacol. 2006;47(1):
139-145.

Figure 5 Results of fibroblast DNA content in the control group
by flow cytometry
图 5 对照组流式细胞仪测定成纤维细胞 DNA 结果
图 4,图 5显示:
与对照组比较,实验组加入滇丹参后增殖期(S-G2-M)细胞百分
数明显降低。
两组增殖期(S-G2-M)细胞百分数分别是:
实验组:G1期 58.5%,G2期 1.8%,S期 39.7%,G2/G1=0.031。
对照组:G1期 53.8%,G2期 17.4%,S期 28.9%,G2/ G1=0.323。
www.CRTER.org孙家平,等. 滇丹参干预后瘢痕成纤维细胞生物学行为的变化
ISSN 1673-8225 CN 21-1539/R CODEN: ZLKHAH