全 文 ：中国药物应用与监测 2007年第 1期
猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究
万鲲 1,王世岭 2(1解放军总医院药材处,北京,100853;2解放军第307医院药剂科,北京,100039)
摘要 目的:观察猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:体外
培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同浓度的猫眼草提取物,24h后观察细胞形态学,以 LDH为指标,观察细胞毒
性,用 MTT法检测其增殖活性。结果:不同浓度的猫眼草提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在 500μg/mL以
下无明显的细胞毒作用。结论:猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治增生性
瘢痕的应用前景。
关键词 烧伤;增生性瘢痕;成纤维细胞;猫眼草
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1672-8157(2007)01-0037-03
AnexperimentalstudyoftheinhibitoryefectsofextractionofEuphorbiaEsulaonhypertrophicscar-derived
fibroblasts.
WANKun1,Wangshi-ling2(1PLAGeneralHospital,Beijing,100853;2DepartmentofPharmacy,the307HospitalofPLA,Beijing,100039)
[作者简介] 万鲲,男,主管药师,主要从事药事管理和瘢痕治疗药物研究 Tel:(010)66939246
ABSTRACT Objective:ToexploretheefectsofEuphorbiaEsulaonpostburnhypertrophicscar-derivedfibroblasts.Methods:
Hypertrophicscar-derivedfibroblastswereharvestetandculturedinvitro.Theproliferationactivityofthefibroblastswereexamined
byMTTmethod.Thecelularmorphology,proliferationactivityandthecytotoxicityofthedrugwereobservedafter24hoursofculture.
Results:ThefibroblastmorphologycouldbealteredbyanyconcentrationofEuphorbiaEsulasolution.Furthermore,thecelcountsand
thecelularproliferationactivityweredecreasedobviouslybythetreatmentofEuphorbiaEsula.Conclusion:Thecelularmorphology
andproliferationactivityofpostburnhypertrophicscar-derivedfibroblastswereinhibitedbyEuphorbiaEsulaindose-dependentpat-
tern,anditmightbeapotentialagentforthepreventionandtreatmentofhypertrophicscars.
KEY WORDS:Burn;Hypertrophicscar;Fibroblast;EuphorbiaEsula
少溃疡的复发[4]。PPI可有效治疗消化性溃疡和根除幽
门螺杆菌,并已广泛用于临床。目前治疗Hp感染的方
案较多,理想的方案应具备根除率高,不良反应少,依
从性好,价格低廉等优点。埃索美拉唑是新一代质子
泵抑制剂,为单一的S型异构体,口服后的生物利用度
和血药浓度较奥美拉唑或P型异构体高,药效持久。
本试验结果显示,疗程结束时,埃索美拉唑组Hp根除
率和溃疡的愈合率分别为91.7%和95.8%;明显高于
奥美拉唑组60%和70%。疼痛消失时间亦明显短于奥
美拉唑;不良反应发生率,埃索美拉唑组为6.2%,奥美
拉唑组为8%,差异无显著意义。综上所述,埃索美拉
唑能迅速缓解消化性溃疡的症状,并能有效根除 Hp
和促进溃疡愈合,不良反应少,依从性好,是作用安全
的新一代质子泵抑制剂,具有良好的应用前景。
参考文献
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(收稿日期:2006-09)
论 著
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中国药物应用与监测 2007年第 1期
增生性瘢痕(Hypertrophicscars,HS)是烧创伤愈
合后所遗留的皮肤异常病变,他的防治尚无有效方法。
临床药物治疗上主要以激素类为主,毒副作用大,疗效
欠佳。本人通过文献查阅,选取了十余种中草药进行
筛选,得到了抑制作用较强的中草药猫眼草,猫眼草
(EuphorbiaEsula)为大戟科大戟属植物猫眼的全草。本
实验观察猫眼草提取物对增生性瘢痕成纤维细胞形
态和增殖的影响,为其在临床防治增生性瘢痕上提供
实验依据[1]。
1材料与方法
1.1材料
猫眼草(SteleraChamaefasmeL.)生药:北京同仁
堂;DMEM、胰蛋白酶:美国 Gibco公司;胎牛血清:中
国天津血清厂;MTT:美国 Sigma公司;DMSO:美国进
口分装。
1.2方法[2]
1.2.1细胞培养与药物配制
手术中取下的增生性瘢痕组织,患者年龄在30岁
以下,病程半年~2年。在无菌培养皿中漂洗,去除血污
及脂肪,剪碎成约1mm3的小块,培养于含胎牛血清
10%、100IU/L的青霉素、100!g/L的链霉素的 DMEM
培养液中,置37℃CO2培养箱中培养。细胞长成致密
单层后,用2.5g/L胰蛋白酶消化,以1:3传代,第3代~
9代细胞用于实验。猫眼草生药500g,65%的乙醇冷浸
24h,浓缩至干,称量提取物重量,每克提取物相当于生
药26.5g。
1.2.2乳酸脱氢酶(LDH)的测定
取对数生长期的细胞,以105个/mL细胞浓度接
种于 24孔培养板培养,每孔接种 500!L,置 CO2箱培
养 7d,3d换液一次。加条件培养基分为实验组(加
500μL猫眼草提取物,浓度分别为15.63、31.25、62.5、
125、250、500μg/mL)和对照组(加 500μL的 DMEM)
继续培养24h,取上清液,用全自动生化分析仪测定
LDH活性值。
1.2.3细胞形态学观察
取对数生长期的细胞,以105个/mL细胞浓度接
种于 24孔培养板培养,每孔接种 500μL,置 CO2箱培
养8h后分为实验组(加500μL猫眼草提取物,浓度分
别为15.63、31.25、62.5、125、250、500μg/mL)和对照组
(加 500μL的 DMEM)继续培养 24h,于倒置显微镜下
观察、照相。
1.2.4MTT比色法测定细胞增殖状况
取对数生长期的细胞,以105个/mL细胞浓度接
种于96孔培养板培养,每孔接种 100μL,加 100μL培
养液,置 CO2箱培养 12h,吸弃上清液,按分组加条件
培养液(浓度分别为15.63、31.25、62.5、125、250、500、
0μg/mL)200μL继续培养 24h,吸弃上清液 10μL,加
5g/L的MTT液10μL/孔继续培养4h,吸弃上清液每孔
加DMSO200μL,不时振荡显色,自动酶联免疫分析仪
测定吸光度 A(波长 492nm)。 计算抑制率:抑制率=
(1-实验组吸光度均值/对照组吸光度均值)×100%,实
验数据用T检验统计学方法并用ORIGIN软件处理。
2结果
2.1猫眼草提取物对人瘢痕成纤维细胞的毒性作用
由表1可见,加入猫眼草提取物作用24h后培养
上清液中乳酸脱氢酶(LDH)与对照组 A~F无显著性
差异(P>0.05,见表 1),说明药物浓度在 500μg/mL以
下无细胞毒作用。
2.2猫眼草提取物对人瘢痕成纤维细胞形态学的影响
由图1可见,成纤维细胞在用药前伸展良好,折光
性较弱,有方向性、呈放射状;而加猫眼草提取物 24h
后(见图 2),成纤维细胞数目减少,形状变的不规则,
突起变短,细胞排列混乱,细胞内代谢产物增多。
图1空白对照组(HE×100) 图2药物组(HE×100)
2.3猫眼草提取物对人瘢痕成纤维细胞增殖的影响
MTT比色结果显示,猫眼草提取物对增生性瘢痕
成纤维细胞生长增殖呈剂量依赖性抑制,IC50值为
59μg/mL。
论 著
表1乳酸脱氢酶(LDH)的活性(x±s,n=3)
Group ρ(TMP)(ug/mL) Z(LDH)/(U/L)
control 0 25.3±2.2
A 15.63 26.4±1.6
B 31.25 26.8±2.2
C 62.5 27.6±1.8
D 125 27.5±2.3
E 250 27.2±1.4
F 500 27.5±2.3
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10010
0
20
60
80
40
concentrationofmethanolextractionofEuphorbiaLathyrisL.(ug/mL)
论 著
图1 不同浓度的狼毒提取物对人瘢痕成纤维细胞的抑制作用
3讨论
增生性瘢痕是皮肤真皮损伤后局部结缔组织增生
而形成的病理结构,是创伤后,尤其是烧伤后常见的
并发症。现代细胞生物学和分子生物学的研究认为,
成纤维细胞的大量增殖与凋亡抑制及细胞外基质中
胶原合成与降解失衡,部分细胞因子的大量产生构成
了HS的生物学基础,并且有一定的血管依赖性。HS病
因及发病机理目前尚不完全清楚,亦未发现一种对不
同部位、面积、病程的HS都有效而又可靠的药物及制
剂。
中药对HS的防治有着久远的历史,对其机制也
有独特的认识,认为它主要有气血壅滞、经络痹阻所
致,治疗上主要是活血化瘀、软坚散结为主。猫眼草
(EuphorbiaEsula)为大戟科大戟属植物猫眼的全草,且
毒性不大[3]。从本实验结果来看,药物对增生性瘢痕成
纤维细胞抑制作用的IC50值为59μg/mL,效果显著,但
是其有效部位及活性成分还有待于进一步研究。
参考文献
[1] 万鲲,高申,王世岭.增生性瘢痕治疗药物的研究[J].中国临床
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(收稿日期:06-09)
[作者简介] 王晓蕾,女,主管药师,研究方向:主要从事药物分析方面的工作
注射用炎琥宁细菌内毒素检查法
王晓蕾 1,白林 1,陆璐 1,张蕾 2(1解放军总医院药检室,北京,100853;2湖北中医学院中药学专业2002级实习生,湖北,434020)
摘要 目的:建立注射用炎琥宁细菌内毒素检查(BET)方法。 方法:按中国药典[1]2005年版附录细菌内毒素检查法要求进行试
验。 结果:注射用炎琥宁(C=1.6mg/mL)稀释10倍(0.16mg/mL)后采用灵敏度 0.125EU/mL的鲎试剂经干扰实验无增强、抑制作
用。结论:细菌内毒素检查法适用于检测注射用炎琥宁中的内毒素。
关键词 注射用炎琥宁;鲎试剂;细菌内毒素检查
中图分类号:R927.12 文献标识码:A 文章编号:1672-8157(2007)01-0039-03
ABSTRACT Objective:ToestablishamethodfortestingthebacterialendotoxininPotassiumSodiumpehydroandroandro-
grapholideSuccinateforInjection.Methods:ThetestswereconductedaccordingtoappendixIXEofChp2005.Results:Neither
inhibitionnorenhancementwasfoundinthebacterialendotoxintestafterthedrug (PotassiumSodiumpehydroandroandrographolide
SuccinateforInjection0.16mgml-1.)wasdilutedto0.16mg/mL.Conclusion:Bacterialendotoxintestissuitableforthedetection
ofbacterialendotoxininPotassiumSodiumpehydroandroandrographolideSuccinateforInjection.
Bacterialendotoxintestofpotassiumsodiumpehydroandroandrographolideauccinateforinjection
WANGXiao-lei1,BAILin1,IUlu1,ZHANGlei2(1Dept.ofDrugAnalysis,PLAGeneralHospital,Beijing,100853;2TheColegeofHubei
TraditionalChinese,Medicine,Hubei,434020)
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