全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 刘德文］
［收稿日期］ 20131120(009)
［基金项目］ 国家“十二五”重大新药创制专项(2011zx09102-007-03) ;国家自然科学基金项目(81202885) ;广东省科技计划项目
(2011A030100013) ;广州市科技计划项目(12A062131631) ;广东省教育厅高层次人才项目(2010)
［第一作者］ 汤文伟，硕士生，从事中药及复方化学成分研究，Tel:15919659800，E-mail:tanyweit@ 163. com
［通讯作者］ * 沈志滨，博士，教授，从事中药及复方化学成分研究，Tel:13724866019，E-mail:szb8113@ 126. com
UPLC测定香鳞毛蕨中绵马素 BB的含量
汤文伟，沈志滨* ，尹永芹，吴洁莹，张慧，黄永昌
(广东药学院，广州 510006)
［摘要］ 目的:建立超高效液相色谱法测定香鳞毛蕨药材中绵马素 BB 的含量。方法:采用 XBridgeTM BEH C18(4. 6
mm ×100 mm，2. 5 μm)色谱柱，以乙腈-0. 1%三氟乙酸水溶液(90∶ 10)为流动相，流速 0. 80 mL·min －1，检测波长 290 nm，柱温
40 ℃，进行测定。结果:绵马素 BB 在 0. 050 28 ～ 0. 301 68 μg 线性关系良好(r = 0. 999 8) ，平均回收率为 98. 87%(ＲSD
0. 44%)。结论:该方法快速、准确、重复性好，可用于香鳞毛蕨的含量测定和质量控制。
［关键词］ 超高液相色谱;香鳞毛蕨;绵马素 BB;含量测定
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)10-0051-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014100051
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /doi /10． 13422 / j． cnki． syfjx． 000091． html
［网络出版时间］ 2014-03-07 10:59
Determination of Aspidin BB in Dryopteris fragrans by UPLC
TANG Wen-wei，SHEN Zhi-bin* ，YIN Yong-qin，WU Jie-ying，ZHANG Hui，HUANG Yong-chang
(Guangdong Phmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
［Abstract］ Objective:To establish an UPLC method for the content determination of aspidin BB in
Dryopteris fragrans． Method:Determination was performed on XBridgeTM BEH C18 column (4. 6 mm × 100 mm，
2. 5 μm)with mobile phase consisted of acetonitrile-0. 1% trifluoroacetic acid with detection wavelength at 290
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 10
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nm． The flow rate was set to 0. 8 mL·min －1，while the column temperature was set at 40 ℃ ． Ｒesult:The linear
range of aspidin BB was 0. 050 28-0. 301 68 μg (r = 0. 999 8)with an average recovery of 98. 87% (ＲSD
0. 44%，n = 6)． Conclusion:The method is fast，accurate and reproducible，which can be used to control the
quality of D． fragrans．
［Key words］ UPLC;Dryopteris fragrans;aspidin BB;determination
香鳞毛蕨是鳞毛蕨科鳞毛蕨属落叶多年生草本
植物［1］。根据民间验方记载，其对多种皮肤病均有
良好的治疗作用，尤其是对由真菌引起的脚气、脚癣
治疗效果非常显著［2］。由于其对皮肤病有良好的
疗效，近年来国内外学者对其化学成分，药理药效方
面的研究越来越多［3-5］。香鳞毛蕨中化学成分主要
有间苯三酚类、萜类、黄酮类、苯丙素类和挥发油
类［6-8］。其中间苯三酚类衍生物是鳞毛蕨属特征性
化学成分。Ito-H［9］等人已从香鳞毛蕨中分离得到
间苯三酚类化合物 aspidin BB，dryofragin，aspidionl，
aspidin PB，aspidin BB 和 aspidin AB。并且，有国外
研究者发现，间苯三酚类衍生物 Aspidin BB 具有广
泛的抗肿瘤活性［10］。 Ito-H 等［11］ 发现化合物
Aspidin BB 对非洲淋巴瘤病毒(EBV-EA)的早期抗
原有潜在的抑制效果，并明显表现出对小鼠皮肤的
癌细胞发生有抑制作用。
本实验采用超高效液相色谱仪(UPLC)建立了
香鳞毛蕨中间苯三酚类化合物绵马素 BB 的含量测
定方法，可为香鳞毛蕨药材的质量控制提供依据。
1 材料
Waters Acquity Uplctm H-Class UPLC 超高效液
相色谱仪，包括四元高压梯度泵、自动进样器、柱温
箱、二级管阵列检测器及 Empower 3 工作站(美国
Waters 公司) ，DS-8510DT型超声波清洗器(上海生
析超声仪器有限公司) ，AB135-S 型 1 /10 万电子天
平(瑞士 Mettler公司) ，对照品(绵马素 BB 实验室
自制，纯度 ＞ 98%) ，乙腈为色谱纯，其余试剂为分
析纯。
香鳞毛蕨药材采自黑龙江省五大连池，由哈尔
滨商业大学药学院张德连副教授鉴定为鳞毛蕨科鳞
毛蕨属香鳞毛蕨 Dryopteris fragrans(L．)。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取Aspidin BB对
照品 1. 257 mg，加入乙腈溶解并定容至 25 mL，得
50. 28 mg·L －1的对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 取香鳞毛蕨药材粗粉
0. 2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入乙酸乙酯
20 mL，密塞，称定质量，混匀，静置，充分溶胀
30 min，超声处理(温度 25 ℃，功率 600 W，频率
40 kHz)20 min，摇匀，滤过，取续滤液 10 mL 置蒸发
皿中蒸干，乙腈复溶并定容至适宜浓度，0. 22 μm微孔
滤膜滤过，即制成香鳞毛蕨供试品溶液。
2. 2 色谱条件与系统适用性 XBridgeTM BEH C18
色谱柱(4. 6 mm × 100 mm，2. 5 μm) ，流动相乙腈-
0. 1%三氟乙酸水溶液(90 ∶ 10) ，流速 0. 80 mL·
min －1，柱温 40 ℃，检测波长 290 nm。在此色谱条
件下，供试品色谱中，在与对照品色谱相同的保留时
间处有色谱峰，与其他组分能基本达到基线分离，空
白溶剂无干扰。aspidin BB 对照品、香鳞毛蕨药材
供试品溶液的 UPLC见图 1。
A. 对照品;B. 供试品;1. aspidin BB
图 1 香鳞毛蕨药材 UPLC
2. 3 检测波长的确定 取 aspidin BB 对照品溶液
适量，于 200 ～ 400 nm 扫描。通过对 aspidin BB 的
紫外波长扫描显示，aspidin BB 对照品溶液在 290，
227 nm 处有较强吸收。由于 227 nm 接近末端吸
收，影响较大，故选用 290 nm作为检测波长。
2. 4 线性关系考察 精密称取 aspidin BB 对照品
7. 542 mg，加入乙腈溶解并定容至 25 mL。用乙腈
分别稀释制成 0. 050 3，0. 100 6，0. 150 9，0. 201 2，
0. 251 5，0. 301 8 g·L －1的对照品溶液。上述各对照
品溶液按 2. 2 项下色谱条件，分别进样 1 μL注入液
相色谱仪进行测定，以进样量(μg)为横坐标(X) ，
峰面积为纵坐标(Y) ，绘制标准曲线，得回归方程
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Y = 0. 458 2X + 0. 005 2(r = 0. 999 8)。结果表明，
aspidin BB对照品在 0. 050 3 ～ 0. 301 8 μg线性关系
良好。
2. 5 精密度考察 精密吸取 2. 1. 1 项下对照品溶
液，连续进样 6 次，每次 5 μL，测定峰面积，ＲSD
0. 42%，表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性考察 精密吸取 2. 1. 1 项下对照品溶
液 2 μL，分别在 1，3，5，7，9，11 h 进行检测，记录色
谱峰峰面积，平均值为159 142，ＲSD 0. 58%，表明
aspidin BB在 11 h之内稳定性良好。
2. 7 重复性考察 精密称定同一批香鳞毛蕨药材
粗粉 6份，每份约 0. 2 g，按供试品溶液的制备方法平
行制备 6份样品溶液，分别精密吸取 6 份供试品溶液
2 μL，按上述色谱条件进行测定，记录色谱峰峰面积，
计算其 ＲSD 3. 29%，表明本法重复性良好。
2. 8 加样回收率考察 取已知含量的香鳞毛蕨药
材 6 份，精密称定，每份约 0. 1 g，分别加入对照品适
量，按供试品溶液的制备方法制备。分别取样品供
试液 2 μL，按上述色谱条件进行测定，记录色谱峰
峰面积，计算回收率。结果见下表 1。
表 1 绵马素 BB的加样回收率试验
称样量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
0. 100 2 1. 909 1. 896 3. 762 98. 87
0. 100 1 1. 907 1. 901 3. 743 98. 29
0. 100 0 1. 905 1. 901 3. 799 98. 82
98. 86 0. 43
0. 100 2 1. 909 1. 899 3. 761 98. 77
0. 100 3 1. 911 1. 903 3. 768 98. 80
0. 100 2 1. 909 1. 905 3. 799 99. 61
2. 9 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液、供
试品溶液 2 μL，进样测定，结果 3 份香鳞毛蕨供试
品中 aspidin BB 含 量 分 别 为 19. 15，19. 05，
18. 90 mg·g －1。
3 讨论
在本试验的样品制备中，曾采用甲醇、95%乙
醇、正己烷、乙酸乙酯以及丙酮提取制备供试品溶
液，结果测得用乙酸乙酯提取时，aspidin BB 提取量
最高。选定提取溶剂后，考察了不同的超声温度与
超声时间，结果为在 25 ℃下超声 20 min 时 aspidin
BB具有较好的稳定性并且提取率较高。
aspidin BB在 UPLC测定中易出现拖尾现象，该
试验通过对不同流动相进行试验选择，结果显示加
入三氟乙酸可改善峰形，减少拖尾，该研究还比较了
在不同三氟乙酸浓度下样品的分离情况，结果发现
对香鳞毛蕨而言，选择该试验用流动相，待测成分分
离较好且峰形最佳。所以，该方法适用于香鳞毛蕨
中 aspidin BB含量测定。
间苯三酚类化合物广泛存在于鳞毛蕨属植物
中，具有抗菌作用，对多种皮肤病均有治疗作用，例
如:头皮癣、牛皮癣、干癣等。此外也具有抗炎镇痛、
抗氧化、抗肿瘤的作用，对银屑病亦有药理作用。本
文以间苯三酚类化合物 aspidin BB 为研究对象，建
立了香鳞毛蕨中 aspidin BB 的含量测定方法，为香
鳞毛蕨药材的质量控制以及进一步的应用与开发提
供理论依据。
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［责任编辑 顾雪竹］
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