全 文 ：作者简介 杜银香(1976－ ) ，女，湖北江陵人，实验师，研究方向:中草药的抗菌试验。
恩施地枇杷水提取物及其萃取成分的
抑菌活性研究
杜银香1，2
1．武汉大学基础医学院(湖北 武汉 430071)
2．湖北民族学院医学院(湖北 恩施 445000)
【摘要】目的 对恩施民间药用植物地枇杷的水提取物及其萃取成分的抑菌活性进行研究，为其进一步开发利用提
供依据。方法 采用水煎煮法得到地枇杷水提取物，并依次用乙酸乙酯，正丁醇对水提取物进行萃取，得到不同样
品，以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌作为待测菌，采用牛
津杯法和琼脂稀释法测定各样品对待测细菌的影响。结果 ①水提取物及其萃取成分对大肠埃希菌无抑菌活性。
②水提取物的抑菌圈直径为 8．7～14．6 mm，乙酸乙酯萃取部分的抑菌圈直径为 8．7 ～ 12．7 mm，正丁醇萃取部分的抑
菌圈直径为 8．6～9．4 mm，水层部分的抑菌圈直径为 8．8～11．3 mm。③水提取物的最低抑菌浓度为 25～ 50 g /L，乙酸
乙酯萃取部分的最低抑菌浓度为 0．5～1．0 g /L，正丁醇萃取部分的最低抑菌浓度为 1．0 g /L，水层部分的最低抑菌浓
度为 2．5～5．0 g /L。综合比较抑菌效果:乙酸乙酯萃取部分＞正丁醇萃取部分＞水层部分＞水提取物。结论 地枇杷
水提取物及其萃取成分有一定的广谱抑菌活性，具有一定的药用开发价值。
【关键词】地枇杷;水提取物;萃取成分;抑菌活性
【中图分类号】Ｒ285．5 【文献标识码】A 【文章编号】1008－8164(2016)02－0037－03
Study on Antibacterial Activity of Extract and its Extractions
from Ficus Tikoua Bur Water in Enshi
Du Yinxiang1，2
(1．Basic Medical Sciences School of Wuhan University，Wuhan 430071，China;
2．Medical College of Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China)
【Abstract】Objective To investigate the antibacterial activity of extract and its extractions from
Ficus Tikoua Bur water in Enshi and provide scientific basis for further development and use．
Methods The Ficus Tikoua Bur water was extracted by the water decocting，and the water was
extracted by ethyl acetate and n－butyl alcohol into different samples．The Staphylococcus au-
reus，epidermal Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Enterobacter aerogenes，Proteus and
Pseudomonas aeruginosa bacteria were regarded as the bacteria to be tested．The impact of the
samples on the six kinds of bacteria was tested by methods of Oxford cup and agar dilution．Ｒe-
sult ①The extractions of Ficus Tikoua Bur had no antibacterial activity to E．coli ．②The diameter
of inhibition zone of total extract，ethyl acetate extract，n－butyl alcohol extract and water ex-
tract were 8．7～14．6，8．7～12．7，8．6～9．4，8．8～11．3mm．③The MIC of total extract，ethyl acetate
extract，n－butyl alcohol extract and water extract were 25 ～ 50，0．5 ～ 1．0，1．0，2．5 ～ 5．0 g /L．After
comparison of antibacterial effect:ethyl acetate extract＞n－butyl alcohol extract＞water extract＞
total extract．Conclusion The extractions of Ficus Tikoua Bur had antibacterial activity，so it had
medical development values．
【Key words】Ficus Tikoua Bur;water extract;extractions;antibacterial activity
第 33卷第 2期(第 37页)
2016年
湖北民族学院学报·医学版
Journal of Hubei University for Nationalities·Medical Edition
Vol．33 No．2 P．37
2016
DOI:10.13501/j.cnki.42-1590/r.2016.02.010
地枇杷(Ficus tikoua Bur．)为桑科榕属植物，又
名地瓜藤，地石榴，地胆紫，地果，过山龙等，主要分
布在陕西南部、湖北、湖南、云南等地，生长在海拔
500～2650m的山坡、草坡或岩石缝中［1］，是土家族、
苗族、傣族等少数民族常用的民族药。全株可入药，
味苦、性寒，清热利湿，活血通络，解毒消肿，主治肺
热咳嗽，痢疾，小儿消化不良，风湿疼痛，带下，跌倒
损伤［2］。国内外对该属植物的研究表明，该属植物
有降血糖、松弛平滑肌、抗肿瘤、抗菌等作用［3］。目
前对地枇杷的研究主要集中在对其化学成分的分离
及鉴定［4］，鲜有其体外抑菌作用方面的报道。恩施
本地野生地枇杷资源丰富，为了解本地野生地枇杷
的抑菌作用，本文对地枇杷水提取物及其萃取成分
进行了体外抑菌试验，以期为地枇杷中抑菌活性成
分的进一步筛选和药用开发提供理论依据。
1 材料与方法
1．1 主要仪器及试剂 CL－32L型自动高压蒸汽灭
菌器(日本 ALP 公司) ，XMT－9017 型电热恒温恒湿
培养箱(重庆永恒试验仪器厂) ，SSW型微电脑电热
恒温水槽(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。
MH 琼脂 (杭州微生物试剂有限公司，批号
20150309) ，营养琼脂(杭州微生物试剂有限公司，
批号 20150308) ，庆大霉素(4 万 IU /mL，济南利民
制药有限责任公司，批号 14120403) ，二甲基亚砜
(分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号
T20100908)。地枇杷于 2015年 10月采自湖北民族
学院校园内，经湖北民族学院中医药学院胡泽华博
士鉴定为桑科榕属植物地枇杷(Ficus tikoua Bur．)。
大肠埃希菌 CMCC44102，产气肠杆菌 CMCC45103，
金黄色葡萄球菌 CMCC26003，表皮葡萄球菌 CM-
CC12228，普通变形杆菌 CMCC49027 均为湖北民族
学院医学院微生物实验室保存菌种，铜绿假单胞菌
为临床分离菌株，由湖北民族学院附属医院检验科
提供。
1．2 地枇杷不同提取物的制备
1．2．1 水提取物的制备 称取地枇杷 200 g，加 10
倍水浸泡 30 min后，加热至沸腾，文火保持 1 h，用 6
层纱布过滤;药渣加 5 倍水，加热至沸腾后，文火保
持 30 min，6层纱布过滤，合并 2 次的滤液，经 100℃
恒温水浴浓缩至 200 mL，药液浓度为 1 000 g /L。经
6 000 r /min离心 15 min，取上清液，即得水提取物。
1．2．2 萃取成分的制备 将制备的水提取物原液
依次用乙酸乙酯，水饱和正丁醇萃取，分别得到不同
萃取成分和水层部分，取乙酸乙酯、正丁醇萃取成分
适量，先用适量二甲基亚砜(DMSO)溶解后，配置成
浓度为 20 g /L 的溶液(含 DMSO 为 1%) ，水层部分
配置成 100 g /L的溶液。各药液用孔径 0．2μm无菌
薄膜滤菌器过滤后备用。
1．3 阳性和阴性对照溶液的制备 将庆大霉素注
射液稀释成 100 IU /mL，作为阳性对照溶液，水提取
物及萃取后水层部分阴性对照为无菌蒸馏水，乙酸
乙酯、正丁醇萃取成分阴性对照为 1%DMSO 水溶
液。各药液用孔径 0．2 μm 无菌薄膜滤菌器过滤后
备用。
1．4 菌种准备 将各种待测菌接种到营养琼脂平
板上，挑取培养了 18 h 的各种纯菌，直接用生理盐
水稀释比浊到 0．5 号麦氏标准浓度，再 1 ∶ 10 稀释
成 107cfu /mL，15 min内，将上述被检菌株悬液接种
到 MH琼脂平板上。
1．5 体外抑菌活性的测定
1．5．1 牛津杯法［5］测定抑菌活性 首先在直径
90 mmMH琼脂平板上加入 0．1 mL 菌液后用无菌 L
型玻棒涂布，其次在涂菌后的平板上均匀放置 7 个
牛津杯，每个小杯中加入药液 100 μL(其中 4 个小
杯中分别加入待试样品，2 个小杯中分别加入无菌
水和 DMSO 溶液作阴性对照，1 个小杯中加入阳性
对照。) ，最后放入 37℃恒温恒湿培养箱中培养 18 ～
24 h后观察结果。每个药液重复 3 次。用十字交叉
法测量其抑菌圈直径。
1．5．2 琼脂稀释法［6］ MIC 根据牛津杯法的结果，
选择抑菌效果明显的细菌，测量其最低抑菌浓度
(MIC)。首先将待测药液进行一系列倍比稀释后，
分别取 2 mL加入直径 90 mm的空培养皿内，再取灭
菌后已在 55℃水浴中平衡 0．5 h以上的 MH琼脂 18
mL加进培养皿内(药物 ∶ MH琼脂= 1 ∶ 9) ，边加边
摇晃平板，使药液和培养基充分混匀，最后用微量加
样器取 1μL菌液接种到平板的划定区域，使接种后
所形成的菌液圈直径约 5 ～ 8 mm，待接种点菌液干
后移动平板，放入 37℃恒温恒湿培养箱中培养 16 ～
20 h后观察结果。
2 结果
2．1 地枇杷水提取物及其萃取成分的抑菌作用
地枇杷水提物及其萃取成分对大肠埃希菌无抑菌作
用，对其他常见细菌均表现出一定的抑菌活性。除
正丁醇萃取部分外，其他各部分都是对金黄色葡萄
球菌的作用最强，见表 1。
83 湖北民族学院学报·医学版 第 2期
表 1 地枇杷水提取物及其萃取成分的抑菌作用(x±s)
试验样品 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 抑菌圈直径
/mm
大肠埃希菌 产气肠杆菌 普通变形杆菌 铜绿假单胞菌
水提取物 14．5±0．1 13．5±0．1 0 9．0±0．3 13．0±0．3 12．5±0．1
乙酸乙酯萃取部分 12．5±0．2 11．3±0．2 0 10．0±0．1 9．0±0．3 11．5±0．3
正丁醇萃取部分 9．0±0．4 9．0±0．1 0 9．0±0．2 9．0±0．1 9．0±0．3
水层部分 11．0±0．3 10．0±0．1 0 9．0±0．2 11．0±0．3 10．5±0．1
阴性对照 0 0 0 0 0 0
阳性对照 19．0±0．2 20．0±0．1 19．5±0．1 19．5±0．3 19．0±0．2 18．0±0．2
2．2 地枇杷水提物及其萃取成分对不同细菌的最
低抑菌浓度 地枇杷水提取物对待测细菌的 MIC
范围为 25～50 g /L。乙酸乙酯萃取部分对金黄色葡
萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌的 MIC 最低，
仅为 0． 5 g /L。正丁醇及水层部分对待测细菌的
MIC范围为 1．0～5．0 g /L，见表 2。
表 2 地枇杷水提取物及其萃取成分
对不同细菌的 MIC(g /L)
试验样品 金黄色葡萄球菌
表皮葡
萄球菌
产气
肠杆菌
普通变
形杆菌
铜绿假
单胞菌
水提取物 25．0 25．0 50．0 25．0 25．0
乙酸乙酯萃取部分 0．5 0．5 1．0 1．0 0．5
正丁醇萃取部分 1．0 1．0 1．0 1．0 1．0
水层部分 2．5 2．5 5．0 5．0 5．0
3 讨论
恩施素有“华中药库”的美誉，药用植物资源丰
富，当地少数民族具有悠久而丰富的医药文化［7］。
地枇杷作为一种当地少数民族常用的中草药，在恩
施民间一般都是服用其水煎剂来治疗疾病，因此本
试验采用了水煎煮法来提取其中的抑菌活性物质。
通过研究发现，地枇杷水提取物及其萃取成分对试
验所选择的 6种细菌的抑菌作用差异较大，其中对
金黄色葡萄球菌作用最强，对大肠埃希菌无抑菌作
用。同时还发现，乙酸乙酯和正丁醇萃取部分对常
见的 5种细菌的 MIC低于水层部分和水提取物，提
示其抑菌活性物质可能主要是一些弱极性或中等极
性的物质，推测可能是黄酮类、生物碱类成分，下一
步将进行地枇杷主要抑菌活性物质的分离纯化与结
构分析研究，从而进一步明确其抑菌作用机理。
目前，由于人类对抗生素的广泛使用，特别是不
合理使用，导致耐药性菌株逐渐增多，很多原来有效
的抗生素都发现了相应的耐药菌株［8］。金黄色葡
萄球菌是常见的致病菌，其耐药菌株也在逐年增加，
对青霉素 G的耐药菌株已达 90%以上［9］，尤其是耐
甲氧西林金黄色葡萄球菌(MＲSA) ，已经成为医院
感染最常见的致病菌。铜绿假单胞菌也具有多重耐
药的特性，能天然抵抗多种抗菌药物。通过研究发
现，地枇杷提取物对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞
菌在体外都具有较好的抑菌活性。虽然体外试验的
环境和体内不一样，但这也为临床上治疗这些耐药
菌株的感染提供了一些新的思路。
中草药是中国的传统资源，它有西药不具备的
优势，是从整体水平发挥抗感染作用，具有副作用
少，不易出现耐药性等特点［10］。在许多中草药中，
已经发现的具有较强抑菌活性化合物的结构与现有
抗生素的化学结构是不相似的，这也为下一步寻找
开发新药带来了很大的空间。本研究表明，地枇杷
具有切实有效的抑菌活性，对于进一步开发利用地
枇杷资源具有一定的指导意义。
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收稿日期:2016－01－08 责任编辑:牟冬生
93第 2期 湖北民族学院学报·医学版