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白背叶提取物的抑菌活性研究



全 文 :湖北农业科学 !#$% &’(%)*+(&* ,)%$-)$, -./0,0112
文章编号:134567883(0112)1061172614
收稿日期:0113688600
作者简介:骆焱平(85946),男,湖北鄂州人,讲师,在读博士生,(电话)1096:05::212(电子信箱);<=>?@.A08B=/B.C。
白背叶 !##$%&’ ()#%(*.@D)E@F??/&DG 又名白
叶野桐、白面戟,属大戟科($@>H.DIJ物,生长在路边、丘陵、山坡的灌木草丛间;广泛分
布于河南、安徽、浙江、江西、湖南、广东、广西、海南
等省区。白背叶的叶具有清热利湿、止痛解毒和止
血的功效,可用于治疗中耳炎、口疮、跌打损伤、湿
疹、外伤出血等;根具有柔肝活血、健脾化湿、收敛
固脱的作用,可用于治疗慢性肝炎、肝脾肿大、水肿
等疾病;同时也用于治疗胃痛呕水、外伤出血和皮
肤湿痒等疾病 K863L。目前,白背叶的研究主要集中在
药理方面。骆焱平等 K2L对 807 种南药植物提取物的
抑菌活性进行了筛选,发现白背叶的丙酮提取物有
很强的抑菌活性。为了进一步研究白背叶的抑菌作
用,本文以真菌为供试菌种,用生长速率法测定了
白背叶的抑菌活性,结果报道如下。
! 材料与方法
!! 供试菌种
供试菌种为香蕉枯萎病菌M*&’+,&- $./’($+&-
N>/0&1)2’) M$ O ,CJPHQ ,;=/FP!<=Q、西瓜枯萎病菌
M*&+,&- $./’($+&- R/N>/2,3)&- ,=;SFDFP !<=NF=Q、
香蕉炭疽病菌M4$##)%$%+,05&- -&’) M#FDT U )@DPQ
&DVQ、芒果炭疽病菌(4$##)%$%+,05&- 6#$)$’($+,$,7)’
WF=X)、水稻稻瘟病菌M8/+,0&#+, $+/9)/)自寄主上分离并用马铃薯培养基M马铃薯 01Z,葡萄
糖 8/7Z,琼脂 8/7ZQ培养,在 3[保存,备用。
!# 植物样品
采摘白背叶的新鲜叶片,用清水洗净,室内阴
干,然后置于电热恒温鼓风干燥箱中,控温在(31\8)[,
烘干至发脆。用微型植物试样粉碎机粉碎,过 31目
筛,得到植物干粉,密封于塑料袋中备用。
!$ 植物样品的提取方法
溶剂冷浸提取法:取 01 G 白背叶干粉用不同极
性溶剂(石油醚、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇)分别充分
浸泡,置于回旋式振荡器上振荡 4 S,0 S,8 S,合并
滤液,用旋转蒸发仪浓缩成黏稠状,倒于培养皿内,
放在干燥器内待其干燥成块状物,备用。
系统溶剂提取法:取 01 G 白背叶干粉,先用甲
醇浸提 4 S,过滤,滤渣用丙酮浸提 0 S,过滤,最后
用氯仿对滤渣浸提 8 S,合并滤液,用旋转蒸发仪浓
缩成黏稠状,置于干燥器内干燥备用。
!% 生长速率法
在无菌条件下,将培养基(分别为每瓶装 55
C*、87 C*)融化,用丙酮溶解白背叶提取物,配成各
自不同浓度的药剂,取 8 C*、0 C* 的母液提取液,
分别注入 55 C*、87 C* 三角瓶中,此时母液浓度分
别被稀释 811 倍、81 倍,将其充分摇匀后迅速倾倒
于直径为 : BC 的培养皿中,制成平板培养基,备用
(用丙酮作对照)。然后用灭菌的小钢管打菌饼(直
径为 2 CC),将菌饼接种到凝固的培养基中央,每皿
8 块,将含菌丝的一面朝下放置。每一处理重复 4
次,每一浓度分别接 2 种菌种。接种好的培养皿用
保鲜袋装好,置于恒温培养箱内(0:\0)[培养,每隔
03 H 用十字交叉法测量菌丝的直径,并用下述公式
计算抑菌率:
菌落直径(CC)]测量菌落直径平均值62/1
白背叶提取物的抑菌活性研究
骆焱平 8,0,郑服丛 0,徐 燕 0,杨光富 8
M8/华中师范大学农药化学研究所,武汉 341195;0/华南热带农业大学植保学院,海南 儋州 298949Q
摘要:采用浸泡法和系统溶剂法对白背叶进行提取,以抑制菌丝生长速率法测定了提取物对香蕉枯萎
病菌、西瓜枯萎病菌、香蕉炭疽病菌、芒果炭疽病菌、水稻稻瘟病菌 2种植物病原真菌的生物活性。结果
表明:浸泡提取法中,不同溶剂的提取物间抑菌作用差异不显著;白背叶的系统溶剂提取物对香蕉炭疽
病菌的毒力最强,$)21值为 1/190 1 CG·C*68,对水稻稻瘟病菌的毒力最差,$)21值为 1/500 8 CG·C*68。
关键词:白背叶;提取物;抑菌活性
中图分类号:^ 535/924/2;^ 535/5: 文献标识码:#
72
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2005.02.031
湖北农业科学 !#$% &’(%)*+(&* ,)%$-)$, -./0,0112
抑菌率3
利用 ,4,, 51/5/1 6.7 89:;.<=软件分析数据。
! 结果与分析
!# 不同溶剂白背叶提取物对病原菌的抑制作用
以氯仿、甲醇、乙醇、丙酮为溶剂,在 1/2 >?·>*@5
下测试白背叶提取物对 2 种病菌的抑制作用(表
5)。运用邓肯氏方法,对提取溶剂进行比较,发现甲
醇、乙醇、氯仿提取物之间的差异也不显著;氯仿与
丙酮提取物之间的抑菌作用差异不显著;对供试菌
种进行比较,发现香蕉枯萎菌与西瓜枯萎菌间抑菌
作用差异不显著,其余菌种间差异显著(表 0)。
A511B
表 C 白背叶不同溶剂提取物对植物病原菌菌丝的毒力测定结果
提取溶剂(提取率)
石油醚(5/2DB)
氯仿(C/C5B)
甲醇(50/12B)
乙醇(D/EFB)
丙酮(0/CDB)
供试菌种
香蕉枯萎病菌
西瓜枯萎病菌
香蕉炭疽病菌
芒果炭疽病菌
水稻稻瘟病菌
香蕉枯萎病菌
西瓜枯萎病菌
香蕉炭疽病菌
芒果炭疽病菌
水稻稻瘟病菌
香蕉枯萎病菌
西瓜枯萎病菌
香蕉炭疽病菌
芒果炭疽病菌
水稻稻瘟病菌
香蕉枯萎病菌
西瓜枯萎病菌
香蕉炭疽病菌
芒果炭疽病菌
水稻稻瘟病菌
香蕉枯萎病菌
西瓜枯萎病菌
香蕉炭疽病菌
芒果炭疽病菌
水稻稻瘟病菌
*G@4线(!3)
2/51HI1/C2E
2/C22I1/CJ0
F/JD2I1/225
2/HDHI1/CH0
2/5FFI1/CC2
2/DF5I1/D2J
2/F5DI1/D10
F/E02I1/DHE
2/H1JI1/C2E
2/00HI1/DCF
2/C50I1/D5J
2/CJCI1/CJF
F/H20I1/2H2
2/J5CI1/D1H
D/H2CI1/C0D
2/220I1/D5J
2/D2HI1/D2E
F/HE5I1/FCF
2/FJCI1/CFC
2/1HHI1/C2D
2/E15I1/DF0
2/FFEI1/DD5
F/JFJI1/2CF
2/H22I1/CE1
2/DFEI1/D2C
相关系数
1/JJE
1/JJH
1/JJH
1/JJE
1/JJE
1/JJJ
1/JJJ
1/JJH
1/JJH
1/JJJ
1/JJJ
1/JJH
1/JJE
5/111
5/111
1/JJH
5/111
1/JJE
1/JJH
1/JJJ
1/JJH
1/JJJ
1/JJH
1/JJE
1/JJH
#值
5E5/J10
02H/CDF
C0J/F5J
5FH/CJ2
50J/0DJ
CD1H/E52
JD1/12C
0HD/5EC
00E/EEE
D1D/D1D
D2J/F15
C50/JDC
5FC/FDH
5 DFH/5J2
02 DCJ/EC
055/0D0
F2 H0D/F5
5E2/0E5
0H0/FJF
CFE/1D5
012/JDD
CD5/0FF
0EE/52C
52J/HJH
0E2/CH1
$)21 K >?·>*@5
1/ECJ 1
1/D1D C
1/10J C
1/51H F
1/F1J C
1/CFFC
1/05E 5
1/10J 1
1/51C E
1/2J0 H
1/DED J
1/CE1 E
1/1D0 0
1/51F E
5/2ED 5
1/0FE H
1/CFE 5
1/120 H
1/5DH 0
1/EEJ J
1/05J C
1/001 D
1/102 D
1/1JJ 0
1/C2F E
注:#测验均达到极显著水平。
对照菌落直径@处理菌落直径
对照菌落直径
表 5 白背叶不同溶剂提取物对供试菌种的抑制作用(C;后)
溶剂
氯仿
甲醇
乙醇
丙酮
浓度 K >?·>*@5
1/2
1/2
1/2
1/2
抑菌率 K B
香蕉枯萎病菌
2F/1D
25/HH
F5/HF
FE/01
西瓜枯萎病菌
FC/HC
22/JC
22/E0
F2/02
香蕉炭疽病菌
J0/CC
J5/FE
J5/CC
JD/11
芒果炭疽病菌
E1/5H
EC/1J
F2/JJ
E5/0C
水稻稻瘟病菌
DH/0C
C2/D1
D0/EJ
2E/20
表 0 溶剂、菌种因子间的多重比较
溶剂
甲醇
乙醇
氯仿
丙酮
概率
$
2
2
2
2
,LM=NO
5
F5/2JD 1
FC/2CH 1
FF/500 1
1/5FC
0
FF/500 1
E5/1D1 1
1/55F
菌种
水稻稻瘟病菌
香蕉枯萎病菌
西瓜枯萎病菌
芒果炭疽病菌
香蕉炭疽病菌
概率
$
D
D
D
D
D
,LM=NO
5
D2/JH2 1
5/111
0
2J/0D2 1
F1/5H0 2
1/EEE
C
E1/500 2
5/111
D
J0/CC0 2
5/111
HF
湖北农业科学 !#$% &’(%)*+(&* ,)%$-)$, -./0,0112
!! 不同溶剂提取物的毒力比较
用 2 种不同溶剂(石油醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙
酮)浸泡白背叶,利用菌丝生长速率法对所得提取
物进行抑菌活性毒力测定,结果见表 3。由表 3 可
知,不同溶剂提取物对香蕉炭疽病菌的 $)21最小,
表明白背叶提取物对香蕉炭疽病菌毒力最强;石油
醚对香蕉枯萎病菌的毒力最差,其他 4 种溶剂提取
物对水稻稻瘟病菌的毒力最差。另外不同溶剂提取
物的提取率不一样,总的趋势是随溶剂极性增加,提
取物的提取率增大,其中甲醇的提取率最高,达到
50/126,石油醚的提取率最低,只有 5/246。
!# 白背叶系统溶剂提取物对病原菌的毒力测定
由表 0 可知,不同溶剂提取物的抑菌作用不显
著,所以采用系统溶剂提取法对白背叶进行提取。
把 提 取 物 设 置 成 5/11、1/72、1/21、1/02、1/51、1/12
89·8*:5 ; 个浓度,对不同供试菌种的菌丝进行毒
力测定,结果见表 4。由表 4 可知,白背叶提取物对
香蕉炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、芒
果炭疽病菌、水稻稻瘟病菌 2种供试菌种的毒力分
别为 1/170 1 89·8* :5、1/515 7 89·8* :5、1/01; 4
89·8*:5、1/031 0 89·8*:5、1/<00 5 89·8*:5,其中白
背叶提取物对香蕉炭疽病菌的毒力最强,对水稻稻
瘟病菌的毒力最差。
# 讨论
采用浸泡法和系统溶剂法所得的白背叶提取
物对 2 种供试菌种有明显的抑菌活性,其中对香蕉
炭疽病菌的抑制作用最为明显,对水稻稻瘟病菌的
抑制效果不理想。由于我们主要对白背叶的叶片以
及细小的枝条进行了研究,没有涉及到白背叶的
花、茎、根部;同时试验只对几种供试菌种的毒力进
行了测试,所以抑菌效果还有待进一步研究。另外
试验只是对 2 种供试菌种在室内进行了毒力测试,
没有进行田间药效试验,下一步进行室外试验,为
以后的防治工作提供参考。
参考文献:
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第八届全国农药学科教学科研研讨会论文集=)?/陕西杨凌:西
北农林科技大学出版社,0114/557:500/
表 4 白背叶系统溶剂提取物对植物病原菌菌丝的毒力测定结果
注:!测验均达到极显著水平。
供试菌种
香蕉枯萎病菌
西瓜枯萎病菌
香蕉炭疽病菌
芒果炭疽病菌
水稻稻瘟病菌
*E:F线(G)
;/011H1/202#
2/;1

;/<;2H1/747#
2/23

2/131H1/371#
相关系数
1/<2<
1/<70
1/<<;
1/<74
1/<@<
!值
4;/142
;4@74/@;3
5@3/4@3
$)21 I 89·8*:5
1/515 7
1/01; 4
1/170 1
1/031 0
1/<00 5
$)21标准误($#21)
1/5;5 0
1/517 2
1/12@ 0
1/515 @
1/1@< ;
<26的置信限
1/175 ;:1/5;3 <
1/52< 0:1/07; ;
1/1;0 ;:1/1@4 4
1/57@ @:1/315 7
1/75< 0:5/53< @
0
5/100 1
1/227 4
5/@71 5
1/40; @
1/22< 5
!#$% &’ (’)*#’+,- (.)/))01 &* 20 345,.1 &* !##$%&’ ()#%
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1/170189·8*:5,VJR V9VMJKL ;./1*’&./& (.<&-/ ^VK 1/<00589·8*:5/
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(责任编辑 王 珞)
@7