全 文 ：白背叶根药材的HPLC指纹图谱研究
彭 妹1， 王立升1， 刘帅兵2， 李婉媚1， 薛井中2
（1.广西大学化学化工学院， 广西 南宁 530004； 2.广西中医学院药学院， 广西 南宁 530001）
摘 要：采用高效半制备液相色谱法分离 ，并以 13C 谱法（13C-NMR）和 1H 谱法（1H-NMR）确定结构；采用
HPLC梯度洗脱进行色谱分离。 对不同产地的 10批白背叶根药材指纹图谱的相似度进行比较分析。 结果表明，分离
得到 3-O－甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖苷，纯度>98.50%（面积归一化法）；各批药材共建立了 15 个共有峰，不
同产地的白背叶根药材指纹图谱相似度良好。 说明高效半制备液相色谱法制备 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L吡喃鼠
李糖苷的方法简单、高效，指纹图谱分析方法稳定性、精密度、重现性较好，用于白背叶根的质量评价切实可行。
关键词：白背叶根；指纹图谱；3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L吡喃鼠李糖苷；HPLC
中图分类号：R282.5 文献标识码：A 文章编号：1004-874X（2014）02-0116-04
Study on HPLC fingerprint of the root of Mallotus apelta
PENG Mei1, WANG Li-sheng1, LIU Shuai-bing2, LI Wan-mei1, XUE Jing-zhong2
(1.School of Chemistry & Chemical Engineering, Guangxi University, Nanning 530004, China;
2.Faculty of Pharmacy, Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning 530001, China)
Abstract: Semi-preparative HPLC was used to isolate and purify 3-O-methyl-ellagic acid-4-O-α-L-rhamnopyra-
noside from the root of Mallotus apelta. Its chemical structure was elucidated by 13C-NMR and 1H-NMR; 10 batches of the
roots of Mallotus apelta samples from different sources were analyzed by HPLC gradient elution method. The results showed
that the purity of 3-O-methyl-ellagic acid-4-O-α-L-rhamnopyranoside reached 98.50% by using area normalization
method, 15 common peaks were selected in chromatograms, all the common peaks were separated effectively, and 10
batches of the roots of Mallotus apelta fingerprint had good similarity. The results indicated that semi-preparative HPLC
was a simple, quick and efficient method to prepare 3-O-methyl-ellagic acid-4-O-α-L-rhamnopyranoside. Fingerprint
analytical method, being with good precision and repeatability, could be useful in the quality control of the root of Mallotus
apelta.
Key words: root of Mallotus apelta; fingerprints; 3-O-methyl-ellagic acid-4-O-α-L-rhamnopyranoside; HPLC
白背叶根为大戟科（Euphorbiaceae）野桐属（Mallo-
tus）白背叶（Mallotus apelta）植物的干燥根，又名白背
桐、酒药子树、白面戟等，广泛分布于我国安徽、江西、
广西、海南等南方地区。 其味微苦、性平，具有清热解
毒、利湿止痛止血等功效，常用于治疗慢性肝炎、外伤
出血、子宫脱垂等，是一种民间常用的中草药[1]。 研究表
明，白背叶根具有较好的抑菌 [2-3]、抗肿瘤 [4]和抗肝纤维
化[5-6]等作用。另外，白背叶根提取物在体内外都具有一
定的抗乙型肝炎病毒作用[7]。 国内外学者从白背叶根中
分离出了酚类、香豆素、鞣质和糖类化合物 [8-10]，但对白
背叶根的质量控制研究尚未见报道。 中药指纹图谱分
析技术广泛应用于中药材的质量评价[11-12]。 本研究采用
高效半制备液相色谱法从白背叶根药材中分离制备
3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖苷，并对 l0 个
不同产地的白背叶根药材指纹图谱进行研究， 以期为
进一步综合开发利用白背叶根药材的鉴别、 质量评价
及质量标准的制定提供依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试 10 批白背叶根药材分别取自广西柳州、金
秀、来宾、象州、武宣等地，均由广西花红药业股份有限
公司提供， 经广西中医大学辛宁教授鉴定为大戟科野
桐属植物白背叶根〔Mallotus apelta (Lour.) Muell. Arg.〕
药材的干燥根。 乙腈与甲醇为色谱纯，液相用水为娃哈
哈纯净水，冰乙酸为分析纯。
UC-3282 型半制备高效液相色谱仪 （北京优联电
工）， 威玛龙色谱工作站、UV-2550 型紫外分光光度计
收稿日期：2013-08-12
基金项目：广西科技攻关项目（11107010-3-5）
作者简介：彭妹（1987-），女，在读硕士生，E-mail：pengmei06
15@163.com
通讯作者：王立升（1965-），男，博士，教授，E-mail：w_lsheng
@163.com
广东农业科学 2014 年第 2期116
C M Y K
DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2014.02.045
表 1 梯度洗脱
时间（min）
0
30
50
65
流动相 A（%）
10
20
30
40
流动相 B（%）
90
80
70
60
流速（mL/min）
0.8
0.8
0.8
0.8
（日本岛津公司），Bruke 600MHz 超导核磁共振仪、KQ-
50B 型超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司），电
子天平 FA1104B（上海越平科学仪器有限公司）。
1.2 试验方法
1.2.1 前期试验 分别对回流、超声、冷浸 3 种提取方
法以及不同提取溶剂 （甲醇、20%甲醇、50%甲醇、80%
甲醇、50%乙醇和纯水）进行考察，最终确定在 50%甲
醇超声法所得图谱信息比较丰富。 同时试验了多种流
动相体系，甲醇-水、甲醇-0.2%冰乙酸、乙腈-水、乙腈-
0.2%冰乙酸体系，确定在乙腈-0.2%冰乙酸水体系下有
较好的分离效果。 另外， 试验比较了在不同波长 254、
275、365 nm 下的图谱，结果表明，在 254 nm 波长处测
得的图谱显示峰信息量大， 故以 254 nm 作为检测波
长。
1.2.2 内含物提取分离 取白背叶根粉末 100 g，加入
50%甲醇 1 500 mL，超声提取 60 min，同法提取数次，
过滤，合并滤液，滤液分别用石油醚、乙酸乙酯萃取。 取
乙酸乙酯萃取层浸膏， 用适量甲醇溶解，0.45 μm微孔
滤膜过滤（滤液为供试液）。 半制备色谱条件：苏州环
球-C18 半制备色谱柱（250 mm×10 mm，10 μm），流动
相为甲醇 ∶0.20%冰乙酸（3∶7，V/V），流速 3.00 mL/min，
检测波长 254 nm，进样量 3.00 mL。 收集馏分，减压浓
缩。
1.2.3 指纹图谱分析色谱条件 苏州环球 C18 分析色
谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈 （A）-
0.20%冰乙酸（B）梯度洗脱，梯度条件见表 1。 检测波长
254 nm，柱温 35℃，进样量 20 μL。 在上述色谱条件下
进样分析，记录 65 min色谱图。
1.2.4 对照溶液制备 精密称取 3.00 mg 的 3-O-甲
基鞣花酸-4-O-α-L吡喃鼠李糖苷对照品，加 50%甲醇
定容于 10 mL 容量瓶中摇匀，0.45 μm 微孔滤膜过滤，
即得。
1.2.5 供试品溶液的制备 精密称取 1.50 g 白背叶根
粉末（过 250 μm筛）置于 25 mL 容量瓶中，加入 12 mL
的 50%甲醇溶液，超声提取 60 min，用 50%甲醇补足减
少的质量。 冷却至室温后，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，
即得。
2 结果与分析
2.1 方法学考察
2.1.1 精密度试验 精密吸取同一白背叶根供试溶
液，连续进样 5 次，检测指纹图谱，计算主要色谱峰的
相对保留时间和相对峰面积的 RSD值， 结果表明各色
谱峰相对保留时间的 RSD<1.40% ， 相对峰面积的
RSD<3.40%，符合指纹图谱的要求，表明仪器的精密度
良好。
2.1.2 稳定性试验 精密吸取同一白背叶根供试溶
液，分别在 0、4、8、12、24 h时进样，检测指纹图谱，计算
主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD，结
果表明各色谱峰的相对保留时间的 RSD<1.30%， 相对
峰面积的 RSD<3.60%，表明供试溶液在 24 h内稳定。
2.1.3 重复性试验 取同一白背叶根溶液 5 份， 同法
制备成供试溶液， 按 1.2.2 中色谱条件分别进样检测，
记录色谱图，结果表明，各共有峰的相对保留时间 RSD
均<1.00%，相对峰面积 RSD 均<2.50%，说明本试验方
法的重复性良好，符合指纹图谱要求。
2.2 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖苷结构
鉴定
对获得的白色针晶状固体进行结构鉴定： 分子式
为 C21H19O12。 1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：1.10（d，J=
6.6 Hz，3H，H-6），3.25 （t，J=9.6 Hz，1H，H-4），3.74
（m，1H，H-3），3.68 （m，1H，H-5），3.91 （m，1H，H-
2），3.98（s，3H，OCH3），5.52-5.46（d，J=1.2 Hz，1H，H-
1），7.34 （s，1H，H-4），7.43 （s，1H，H-5）；13CNMR
（150 MHz，DMSO-d6）δ：160.3 （C-7），159.4 （C-7），
151.9 （C-4），149.1 （C-4），142.6 （C-3），139.6 （C-3），
137.8（C-2，C-2），115.6（C-6），115.1（C-1），113.8（C-
6，C-5），112.9（C-1），110.1(C-5），98.9（C-1），72.3（C-
4），70.6 (C -3），70.2 （C -2)，69.2 （C -5），60.70
（OCH3-4），17.98（C-6）。 以上波普数据与文献报道一
致 [13]，经面积归一法测得纯度>98.50%，故鉴定化合物
为 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L吡喃鼠李糖苷。
2.3 指纹图谱的建立及共有峰的确定
2.3.1 共有峰的标记 分别制备 10 批白背叶根供试
品溶液和对照物溶液， 按 1.2.2 中色谱条件进行测定，
记录色谱图。 对 10 批白背叶根药材进行指纹图谱分
析，标定了 15 个共有峰，分别是 1 号（3.728 min）、2 号
（5.761 min）、3 号 （9.322 min）、4 号 （14.875 min）、5 号
（15.325 min）、6 号 （19.764 min）、7 号 （20.685 min）、8
号（21.367 min）、9 号（28.920 min）、10 号（30.679 min）、
11 号 （32.557 min）、12 号 （40.381 min）、13 号（43.262
min），14 号（45.819 min）和 15号（50.017 min）。其中 13
号峰为 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖苷，见
117
C M Y K
表 2 各共有峰相对保留时间
峰号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
S1
0.0855
0.1107
0.1326
0.2320
0.3449
0.3548
0.4582
0.4791
0.6701
0.7104
0.7552
0.9343
1.0000
1.0601
1.1558
S2
0.0862
0.1114
0.1326
0.2308
0.3411
0.3518
0.4539
0.4575
0.6658
0.7072
0.7289
0.9323
1.0000
1.0581
1.1568
S3
0.0857
0.1112
0.1335
0.2347
0.3472
0.3559
0.4600
0.4806
0.6724
0.7105
0.7540
0.9331
1.0000
1.0600
1.1574
S4
0.0859
0.1112
0.1332
0.2330
0.3438
0.3559
0.4587
0.4801
0.6698
0.7101
0.7547
0.9345
1.0000
1.0587
1.1561
S5
0.0860
0.1112
0.1329
0.2322
0.3440
0.3542
0.4563
0.4780
0.6681
0.7089
0.7520
0.9336
1.0000
1.0588
1.1561
S6
0.0855
0.1106
0.1319
0.2408
0.3394
0.3508
0.4534
0.4749
0.6673
0.7084
0.7513
0.9352
1.0000
1.0620
1.1546
S7
0.0854
0.1106
0.1331
0.2344
0.3489
0.3528
0.4617
0.4831
0.6721
0.7114
0.7585
0.9331
1.0000
1.0607
1.1552
S8
0.0857
0.1112
0.1332
0.2347
0.3472
0.3559
0.4600
0.4806
0.6724
0.7105
0.7540
0.9325
1.0000
1.0575
1.1574
S9
0.0869
0.1124
0.1333
0.2302
0.3409
0.3522
0.4543
0.4755
0.6661
0.7078
0.7492
0.9313
1.0000
1.0562
1.1564
S10
0.0860
0.1108
0.1339
0.2307
0.3397
0.3515
0.4525
0.4736
0.6645
0.7071
0.7475
0.9336
1.0000
1.0561
1.1567
平均值
0.0859
0.1001
0.1330
0.2333
0.3437
0.3536
0.457
0.4763
0.6689
0.7092
0.7505
0.9333
1.0000
1.0588
1.1563
RSD
（%）
0.56
0.52
0.45
1.16
1.07
0.61
0.78
1.06
0.48
0.24
1.20
0.13
0.00
0.21
0.08
相对保留时间
250
185
120
55
-10
0 10.8 21.7 32.5 43.3 54.2 65.0
（S）
保留时间（min）
图 1 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖苷的 HPLC 图
0 9.42 18.84 28.26 37.68 47.11 56.53 65.95
保留时间（min）
图 2 白背叶根药材的 HPLC 指纹图谱生成的对照图谱
0 9.42 18.84 28.26 37.68 47.11 56.53 65.95
保留时间（min）
图 3 10 批白背叶根药材的 HPLC 指纹图谱
R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
图 1。 10批白背叶根药材共有特征峰见图 2，共有模式
的对照指纹图谱见图 3，相对保留时间与相对峰面积结
果见表 2和表 3。
2.3.2 相似度分析 运用中药色谱指纹图谱相似度评
价软件，将 10 批次白背叶根药材图谱数据导入，生成
对照图谱，并以 10 批样品生成的对照谱图作为对照模
板，计算其相似度，结果表明不同产地白背叶根药材相
似度均在 0.90 以上，说明相似度良好。
3 结论与讨论
前期试验结果表明，50%甲醇超声 1 h 条件下所得
到图谱信息比较丰富，并且乙腈-0.2%冰乙酸流动相系
118
C M Y K
表 3 各共有峰相对峰面积
峰号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
S1
1.1069
0.3054
0.5390
0.4004
0.4457
0.2170
0.6043
0.2280
0.1558
0.2163
0.5862
0.1650
1.0000
0.1444
0.1546
S2
0.5121
0.1605
0.3304
0.2315
0.3757
0.1408
0.4124
0.2137
0.1886
0.2607
0.5666
0.1589
1.0000
0.0928
0.1150
S3
0.7370
0.2280
0.3840
0.2560
0.4330
0.1870
0.3990
0.288
0.1430
0.2050
0.6000
0.1990
1.0000
0.1160
0.1330
S4
0.8159
0.2080
0.3054
0.3772
0.5733
0.2347
0.6118
0.2078
0.1442
0.2889
0.6565
0.1752
1.0000
0.1348
0.1745
S5
0.5009
0.1755
0.2295
0.3018
0.4707
0.2018
0.5422
0.3070
0.2350
0.2900
0.5888
0.1713
1.0000
0.1120
0.1247
S6
0.7572
0.2365
0.3530
0.3573
0.4990
0.1679
0.5610
0.2377
0.1768
0.2187
0.4579
0.1796
1.0000
0.0872
0.1687
S7
1.1070
0.3406
0.3747
0.2951
0.3939
0.1682
0.6164
0.1552
0.1011
0.2256
0.5704
0.1780
1.0000
0.1354
0.1304
S8
0.9900
0.1739
0.2556
0.2098
0.4029
0.1492
0.4193
0.1892
0.1925
0.2514
0.5828
0.1531
1.0000
0.1329
0.1557
S9
0.5500
0.1628
0.2471
0.2798
0.4161
0.1309
0.5220
0.2546
0.1532
0.3302
0.6253
0.2087
1.0000
0.1021
0.1299
S10
0.5429
0.1438
0.1930
0.2519
0.3972
0.1525
0.3659
0.2121
0.2150
0.2557
0.4703
0.1629
1.0000
0.1133
0.1166
平均值
0.7582
0.2135
0.3206
0.2961
0.4408
0.1737
0.5054
0.2293
0.1692
0.2543
0.5705
0.1752
1.0000
0.1171
0.1280
RSD
（%）
33.54
32.74
33.25
23.21
14.75
21.13
20.75
21.23
24.64
16.93
11.85
10.82
0.00
17.94
16.52
相对保留时间
统下色谱峰峰形及分离度较好， 经比较供试品在 254
nm 的波长下色谱峰出峰情况较好，此波长也是该图谱
中的对照峰 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖
苷的最大吸收波长。
采用半制备高效液相色谱法从白背叶根药材中分
离得到高纯度的 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠
李糖苷，研究了分离 3-O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃
鼠李糖苷的一种新工艺。 半高效制备液相色谱法从天
然产物中分离制备化合物， 方法简单易行， 且操作简
单，效率较高，能够得到高纯度的单体化合物，是中药
材中活性成分分离和研究的理想方法。
本试验对不同产地的 10 批药材进行指纹图谱进
行分析发现， 标定的 15 个共有峰中，13 号峰为 3-O-
甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖苷， 为图谱中最大
峰，不同产地指纹图谱之间相似度良好，相对保留时间
RSD<1.16%，所含成分基本相同，但各成分的含量存在
差异，相对峰面积比值差别较大，考虑药材受环境因素
的影响较大， 因此有必要对白背叶根药材的生长环境
进行考察。 本课题组将在 10批白背叶根指纹图谱的差
异研究的基础上，进一步测定各批白背叶根药材中 3-
O-甲基鞣花酸-4-O-α-L 吡喃鼠李糖苷的含量， 以期
为建立白背叶根的质量标准提供科学的依据。
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（责任编辑 刘 翀）
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