全 文 ：有机化学
Chinese Journal of Organic Chemistry ARTICLE

* E-mail: gyap@hust.edu.cn; zhangyh@mails.tjmu.edu.cn
Received March 31, 2013; revised April 28, 2013; published online May 31, 2013.
Project supported by the Scientific Research Foundation for the Returned Oversea Chinese Scholars, Ministry of Education (No. 2010-1561, 40th) and the
Program for New Century Excellent Talents in University, Ministry of Education (No. NCET-2008-0224).
教育部留学回国人员科研启动基金(No. 2010-1561, 第 40 批)、教育部新世纪优秀人才计划(No. NCET-2008-0224)资助项目.

Chin. J. Org. Chem. 2013, 33, 1273～1278 © 2013 Chinese Chemical Society & SIOC, CAS http://sioc-journal.cn/ 1273

DOI: 10.6023/cjoc201303055 研究论文
川桂皮中具有免疫调节活性的甾体和苯丙素类化学成分
魏夏兰 a 舒朋华 a 刘婷婷 a 向 明 a 张锦文 b
薛永波 a 罗增伟 a 姚广民*,a 张勇慧*,a
(a华中科技大学同济医学院药学院 武汉 430030)
(b华中科技大学同济医学院附属同济医院 武汉 430030)
摘要 对川桂 Cinnamomum wilsonii 皮的化学成分进行了研究 , 从中分离并鉴定出 1 个新的甾体类化合物 ,
(3S,22R,24R)-stigmast-5-ene-3β,22α-diol (1), 和 10 个已知化合物, stigmast-5-ene-3β,7α,22α-triol (2), 24-ethylcholest-5-ene-
3β,4β,22α-triol (3), stigmast-5-ene-3β,7α-diol (4), β-谷甾醇(5), β-胡萝卜苷(6), (1R,2R)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-
1,2,3-propanetriol (7), (1S,2S)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,2,3-propanetriol (8), 丁子香酚(9), 甲氧基丁子香酚(10)和
methyl (E)-ferulate (11). 通过波谱分析和 Cu 靶单晶 X 射线衍射方法确定了新化合物 1 的结构及其绝对构型. 测试了化
合物 1～11 的体外免疫调节活性, 1, 5 和 6 能显著抑制刀豆 A 诱导的小鼠 T 细胞增殖, 6 和 9 能显著抑制脂多糖诱导的
小鼠 B 细胞增殖.
关键词 川桂; (3S,22R,24R)-stigmast-5-ene-3β,22α-diol; 单晶 X 射线衍射; 绝对构型; 免疫调节活性
Steroids and Phenylpropanoids with Immunomodulatory
Activities from the Stem Barks of Cinnamomum wilsonii
Wei, Xialana Shu, Penghuaa Liu, Tingtinga Xiang, Minga Zhang, Jinwenb
Xue, Yongboa Luo, Zengweia Yao, Guangmin*,a Zhang, Yonghui*,a
(a School of Pharmacy, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030)
(b Tongji Hospital Affiliated to Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030)
Abstract A new steroid, (3S,22R,24R)-stigmast-5-ene-3β,22α-diol (1), together with ten known compounds, stig-
mast-5-ene-3β,7α,22α-triol (2), 24-ethylcholest-5-ene-3β,4β,22α-triol (3), stigmast-5-ene-3β,7α-diol (4), β-sitosterol (5),
β-daucosterol (6), (1R,2R)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,2,3-propanetriol (7), (1S,2S)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-
1,2,3-propanetriol (8), eugenol (9), methoxyeugenol (10), and methyl (E)-ferulate (11) were isolated from the stem barks of
Cinnamomum wilsonii. The structure including the absolute configuration of 1 was determined by spectroscopic data interpre-
tation and X-ray single-crystal diffraction analysis with Cu Kα irradiation. Compounds 1～11 were evaluated for immuno-
modulatory activities against murine lymphocytes. 1, 5 and 6 significantly inhibited the proliferation of murine ConA-induced
T cells, and 6 and 9 significantly inhibited the proliferation of LPS-induced murine B cells.
Keywords Cinnamomum wilsonii; (3S,22R,24R)-stigmast-5-ene-3β,22α-diol; X-ray single-crystal diffraction; absolute
configuration; immunomodulatory activity

川桂(Cinnamomum wilsonii)为樟科樟属植物, 常绿
乔木, 生长在山谷或山坡阳处、沟边, 疏林或密林中, 是
我国特有植物, 主产陕西、四川、湖北、湖南、广西、
广东及江西等地[1]. 川桂是一种具有较高经济利用价值
的药食两用植物. 川桂的叶、枝和皮都可用作烹饪香料,
烹制各种肉类、鱼类等食品, 具有去腥增香的作用. 川
桂皮入药, 功效补肾和散寒祛风, 治疗风湿筋骨痛、跌
打及腹痛吐泻等症[2]. 但是迄今为止, 川桂皮的化学成
分还未见文献报道. 为了充分挖掘和利用我国丰富的川
桂资源, 我们首次对川桂皮的化学成分进行了系统研

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究, 从中分离并鉴定出 11 个化合物, 其中化合物 1 为新
化合物, 并测试了所得 11 个化合物的体外免疫调节活
性, 发现化合物 1, 5 和 6 具有显著的免疫抑制活性. 本
文将报道化合物 1～11 的提取、分离、结构鉴定及其免
疫调节活性.
1 结果与讨论
川桂皮用 95%乙醇提取, 乙醇提取物减压浓缩后得
浸膏, 用温水混悬后用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯部位.
乙酸乙酯部位经硅胶、反相硅胶和凝胶 Sephadex LH-20
等反复柱层析分离得到 1 个新的甾体类化合物 1, 5 个已
知甾体类化合物 2～6 和 5 个苯丙素类化合物 7～11(图
1).
1.1 新化合物 1 的结构鉴定
化合物 1 为无色针状结晶, 易溶于氯仿, 微溶于甲
醇. HRESIMS 在 m/z: 453.3686 处给出[M＋Na]＋准分子
离子峰, 推测其分子式为 C29H50O2 (calcd. for C29H50O2-
Na＋, 453.3703), 计算得其不饱和度为 5. 化合物 1 的 1H
NMR 谱(表 1)中在 δH 0.99 (s, H3-19)和 0.68 (s, H3-18)处
显示 2个单峰甲基信号, 在 δH 0.89 (d, J＝6.7 Hz, H3-21),
0.87 (d, J＝7.0 Hz, H3-27)和 0.76 (d, J＝6.8 Hz, H3-26)处
显示 3 个两重峰甲基信号, 在 0.86 (d, J＝7.0 Hz, H3-27)
处显示 1 个三重峰甲基信号, 在 δH 3.49 (dddd, H-3)和
3.68 (br d, H-22)处显示两个连氧次甲基信号, 在 δH 5.32
(d, J＝5.0 Hz, H-6)处显示 1 个烯质子信号.
结合 1H NMR, DEPT 和 HSQC 谱图, 13C NMR(表 1)
谱图中出现的 29 个碳信号可以归属为 6 个甲基(δC 12.0,
OH
OH
OH
O
HO
HO
O
O
O
O
HO
HO OH
O
OH
R1O
R4
H
H
R2
R3
H
HO
R
O
7 (1R,2R)
8 (1S,2S)
11
= Glc
R1 R2 R3 R4
1 H H H OH
2 H H OH OH
3 H OH H OH
4 H H OH H
5 H H H H
6 Glc H H H

9 R = H
10 R = OCH3
1
2
1 ~ 6

图 1 化合物 1～11 的结构
Figure 1 Structures of compounds 1～11
表 1 化合物 1 的 1H NMR (CDCl3, 400 MHz 和 13C NMR 数据(CDCl3, 100 MHz)
Table 1 1H NMR (CDCl3, 400 MHz) and 13C NMR (CDCl3, 100 MHz) data of compound 1
Position δH, mult, J in Hz δC Position δH, mult, J in Hz δC
1α 1.44～1.45, m 32.1 15α 1.59～1.60, m 24.7
1β 1.94～1.96, m 15β 1.08～1.10, m
2α 1.47～1.49, m 31.9 16α 1.94～1.96, m 40.0
2β 1.81～1.82, m 16β 1.15～1.16, m
3α 3.49, dddd, 10.7, 10.5, 4.8, 4.4 72.0 17α 1.07～1.08, m 53.2
4α 2.27, dd, 12.9, 5.2 42.5 18 0.68, s 12.0
4β 2.21, dd, 12.9, 10.7 19 0.99, s 19.6
5 141.0 20 1.24～1.26, m 41.6
6 5.32, d, 5.0 121.8 21 0.89, d, 6.7 12.5
7α 1.00～1.02, m 30.1 22 3.68, br d, 10.0 71.5
7β 1.22～1.23, m 23a 1.80～1.82, m 37.5
8β 1.95～1.97, m 32.1 23b 1.05～1.07, m
9α 0.90～0.92, m 50.4 24 1.69～1.72, m 42.7
10 36.7 25 1.76～1.78, m 29.0
11α 1.48～1.49, m 21.3 26 0.76, d, 6.8 17.8
11β 1.49～1.51, m 27 0.87, d, 7.0 20.8
12α 1.34～1.35, m 27.7 28a 1.33～1.35, m 23.8
12β 1.69～1.70, m 28b 1.23～1.24, m
13 42.9 29 0.86, t, 7.0 12.1
14α 0.97～0.99, m 56.5


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C-18; 12.1, C-29; 12.5, C-21; 17.8, C-26; 19.6, C-19; 20.8,
C-27), 10 个亚甲基(δC 21.3, C-11; 23.8, C-28; 24.7, C-15;
27.7, C-12; 30.1, C-7; 31.9, C-2; 32.1, C-1; 37.5, C-23;
40.0, C-16; 42.5, C-4); 7 个次甲基(δC 29.0, C-25; 32.1,
C-8; 41.6, C-20; 42.7, C-24; 51.4, C-9; 53.2, C-17; 56.5,
C-14), 2 个连氧次甲基(δC 71.5, C-22; 72.0, C-3), 1 个 sp2
杂化次甲基(δC 121.8, C-6); 2 个 sp3 杂化季碳(δC 36.7,
C-10; 42.9, C-13), 1 个 sp2杂化季碳(δC 141.0, C-5). 双键
占去 1 个不饱和度, 剩余的 4 个不饱和度说明化合物 1
中应该有 4 个环. 因此, 1 是一个四环 C29甾体类化合物.
通过分析化合物 1 的 HSQC 和 1H-1H COSY 谱, 可
以推测出化合物含有以下几个结构片段: a (C-1～C-4),
b (C-6～C-9–C-11–C-12), c (C-8–C-14～C-17–C-20–
C-21), d (C-20–C-22 ～ C-24–C-28–C-29), e (C-24 ～
C-26), 和 f (C-25–C-27)(图 2). 在 HMBC 谱中, H-4 与双
键 C-5 和 C-6, 烯质子 H-6 与 C-4 的相关峰说明 C-4 接
在双键的 C-5 上. H3-19 与 C-1, C-5, C-9 和 C-10 的
HMBC 相关信号说明季碳 C-10 分别与 C-1, C-5, C-9 和
C-19 相连. H3-18 与 C-12, C-13, C-14, C-17 的 HMBC 相
关信号说明季碳 C-13 分别与 C-12, C-14, C-17 和 C-18
相连. H3-21与次甲基C-17和C-20以及连氧次甲基C-22
的 HMBC 相关信号说明分子中的另一个羟基应该连在
C-22 上(图 2).
1H-1H COSY:
HO
OH
H CHMBC:
1
3
5 7
8
910
11 13 17
20
21 22
24 25
26
27
28
29
15
18
19

图 2 化合物 1 的 1H-1H COSY 及关键的 HMBC 相关图
Figure 2 1H-1H COSY and key HMBC correlations of com-
pound 1
化合物1的环上部分的相对构型可以通过偶合常数
和 NOESY 实验(图 3)确定. H-3 为 dddd 峰, 它与 H-2 和
H-4 的偶合常数为 J＝10.7, 10.5, 4.8, 4.4 Hz, 说明 H-3
处在环己烷构象的直立键(a 键)上, 应该为 α构型, 3-OH
相应地处在 β 方向. H3-19 与 H-2β, H3-19 与 H-8β, H3-19
与 H-11β, H3-18 与 H-8β, H3-18 与 H-11β, H-8β 与 H-11β
的NOE相关信号表明H3-19, H-2β, H-8β, H-11β与H3-18
的空间取向是一致的. H-20 与 H3-18, H-20 与 H-16β 的
NOE相关信号表明侧链的空间取向应该为 β位. H-9α与
H-14α, H-14α 与 H-17α 的 NOE 相关信号表明 H-9α,
H-14α 与 H-17α 是空间同向的. 仅仅根据 NOESY 分析
还无法确定侧链上 C-20, C-22 和 C-24 的构型.
CH3
CH3
CH3
HO
H
H
CH3
CH3
H
H
H
H
H
H
OH
H3C
H
H
H
H
H
H
H
H
H
9
11
1
8 14 16
17
18
19
21
20 22 24
NOESY: H
3

图 3 化合物 1 的关键的 NOE 相关图
Figure 3 Key NOE correlations of compound 1
文献调研发现, 化合物 1 的平面结构与文献[3]报道
的已知化合物 itesmol 一致. Itesmol 首次由墨西哥学者
Dominguez 等[4]于 1963 年从仙人掌科植物 Thelocactus
bicolor 中分离得到, 但是文献仅报道了其平面结构.
1973 年, Zanno 等[3]采用化学办法, 结合 CD 和 MS, 确
定了 itesmol 的大部分构型, 仍未确定 C-24 的构型. 近
年来, 从楝科鹧鸪花属植物 Trichilia quadrijuga 和桑科
拓属植物拓树中也报道了 itesmol, 但是同样没有确定
C-24 的构型[5,6]. 虽然化合物 1 与文献报道的 itesmol 的
理化常数和 NMR 波谱数据都比较接近, 但是甾体侧链
可以自由旋转, 侧链上 C-24 的构型对化合物的旋光度
和 NMR 数据等影响较小, 更重要的是, 1 与 itemsmol 的
来源不同, 所以根据上述数据也不能完全确定化合物 1
就是已知化合物 itesmol.
为了确定 1 的绝对构型, 特别是甾体侧链上 C-20,
C-22 和 C-24 的绝对构型, 我们尝试了在不同条件下培
养单晶. 化合物 1 在甲醇和氯仿混合溶液(V∶V＝3∶1)
中室温放置, 最终获得了适合于单晶X射线衍射实验晶
体. 挑取 0.12 mm×0.10 mm×0.10 mm 的晶体在 Bruker
SMART APEX-II CCD 衍射仪上采用 Cu Kα 射线(λ＝
1.54178 Å)衍射, 得到了 1 的单晶 X 射线衍射结构图(图
4), 验证了其平面结构和相对构型. 经计算, 与绝对构
型相关的 Flack 参数为 0.1 (7), 由此确定 1 的绝对构型
为 3S,10R,13S,17R,20S,22R,24R.
综上所述, 化合物 1 的结构确定为(3S,22R,24R)-
stigmast-5-ene-3β,22α-diol.
1.2 已知化合物 2～11 的结构鉴定
经 1H NMR, 13C NMR, 旋光等波谱学方法分析, 并
与文献对照, 确定已知化合物 2～11 的结构分别为 stig-
mast-5-ene-3β,7α,22α-triol (2)[7], 24-ethylcholest-5-ene-
3β,4β,22α-triol (3)[8], stigmast-5-ene-3β,7α-diol (4)[9], β-谷
甾醇 (5)[10], β-胡萝卜苷 (6)[11], (1R,2R)-1-(4-hydroxy-3-
methoxyphenyl)-1,2,3-propanetriol (7)[12], (1S,2S)-1-(4-
hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,2,3-propanetriol (8)[13], 丁
子香酚 (9)[14], 甲氧基丁子香酚 (10)[14], methyl (E)-
ferulate (11)[15].


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图 4 化合物 1 的单晶 X 射线衍射结构图
Figure 4 X-ray single crystal structure of compound 1
1.3 化合物 1～11 的免疫调节活性
文献报道, 已知化合物 β-谷甾醇(5)及其糖苷(6)具
有一定的体内和体外的免疫调节活性[16]. 新化合物 1 是
已知化合物5的 22-羟基衍生物, 考虑到结构相似性, 推
测化合物 1 也有免疫调节活性. 我们采用小鼠脾脏淋巴
细胞为模型, 对化合物 1～11 进行了体外免疫调节活性
测试. 结果表明(表 2), 化合物 1 对 ConA 诱导的小鼠 T
细胞增殖具有显著的抑制活性, 抑制率接近阳性药物环
孢素 A (Cyclosporin A, CsA), 且呈现剂量依赖性. 化合
物 5 和 6 对 ConA 诱导的小鼠 T 细胞增殖具有显著的抑
制活性, 且在低浓度(0.16, 0.032 和 0.0064 µmol/L)下抑
制率高于 CsA. 化合物 6 对 LPS 诱导的小鼠 B 细胞增殖
具有显著的抑制活性, 抑制率接近阳性药物 CsA, 且在
中低浓度下抑制率高于 CsA. 化合物 9 在高浓度(40 和 8
µmol/L)下对 LPS 诱导的小鼠 B 细胞增殖具有一定的抑
制作用. 其它化合物在测试浓度下对 ConA 诱导的小鼠
T和LPS诱导的小鼠B细胞的增殖未表现出显著的抑制
或增强活性.
为了确定活性化合物对 ConA 诱导的小鼠 T 和 LPS
诱导的小鼠 B 细胞的增殖抑制是否与细胞毒性有关, 我
们同时测试了同等浓度下化合物对淋巴细胞的细胞毒
性,发现化合物1～11均无明显细胞毒性(表2). 所以, 化
合物 1, 5, 6 和 9 表现出来的对 T 或 B 细胞的增殖抑制活
性与化合物本身的细胞毒性无关, 免疫抑制活性和作用
机制值得深入研究.
2 结论
本文利用各种柱层析方法对川桂皮的化学成分进
行了系统研究, 分离出11个化合物. 利用波谱方法鉴定
了11个化合物的结构, 分别为1个新的甾体类化合物, 5
个已知甾体类化合物, 5 个已知的苯丙素类化合物. 以
环孢素 A (Cyclosporin A, CsA)为阳性药物, 评价了 11
表 2 化合物 1～11 对小鼠淋巴细胞增殖的影响
Table 2 Effects of compounds 1～11 on murine lymphocyte
proliferation
增殖抑制/增强率 a/%
化合物 浓度/
(µmol•L－1)
淋巴细胞
存活率/% ConA 诱导的
T 细胞
LPS 诱导的
B 细胞
40 109 －44 －19
8 104 －42 －10
0.16 108 －13 －9
0.032 107 －9 －3
1
0.0064 107 －8 －1
40 100 －5 －4
8 101 －5 －4
0.16 102 －4 －2
0.032 101 －4 －1
2
0.0064 101 －1 ＋1
40 100 －6 －3
8 100 －5 －2
0.16 100 －4 －2
0.032 100 －4 －1
3
0.0064 101 －1 0
40 96 －2 －11
8 100 ＋2 －3
0.16 96 ＋2 －4
0.032 95 ＋2 －3
4
0.0064 98 ＋1 －2
40 100 －29 －4
8 100 －27 －6
0.16 100 －27 －5
0.032 99 －26 －4
5
0.0064 99 －15 －3
40 100 －35 －35
8 101 －30 －32
0.16 99 －26 －32
0.032 101 －21 －30
6
0.0064 102 －12 －26


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续表
增殖抑制/增强率 a/%
化合物 浓度/
(µmol•L－1)
淋巴细胞
存活率/% ConA 诱导的
T 细胞
LPS 诱导的
B 细胞
40 100 －10 －9
8 100 －9 －6
0.16 98 －8 －5
0.032 100 －6 －2
7
0.0064 100 －4 ＋1
40 99 －5 －9
8 100 －2 －7
0.16 100 －4 －8
0.032 100 －4 －7
8
0.0064 100 －5 －6
40 103 －12 －24
8 102 －10 －20
0.16 102 －8 －11
0.032 100 －5 －9
9
0.0064 100 －4 －1
40 100 －2 －1
8 100 －1 0
0.16 100 －2 0
0.032 101 －2 0
10
0.0064 100 －1 0
40 101 －15 －8
8 100 －13 －7
0.16 101 －12 －5
0.032 99 －7 －2
11
0.0064 100 －5 ＋1
40 101 －51 －37
8 101 －31 －28
0.16 102 －21 －19
0.032 100 －14 －14
CsA
0.0064 102 －6 －7
a －: 代表抑制作用, ＋: 代表增强作用.
个化合物的体外免疫调节活性, 化合物 1, 5 和 6 能显著
抑制刀豆A (ConA)诱导的T细胞增殖, 化合物 6能显著
抑制脂多糖(LPS)诱导的B细胞增殖, 化合物9对脂多糖
(LPS)诱导的 B 细胞增殖有一定的抑制作用, 为进一步
开发利用川桂皮提供了科学依据.
3 实验部分
3.1 仪器与试剂
旋光度由 Perkin-Elmer 341 型数字旋光仪测定. 熔
点由 Beijing Tech X-5 型熔点仪测定. NMR 由 Bruker
AM-400核磁共振仪测定; 1H NMR位移值以氘代溶剂中
残存的 CHCl3 (δ 7.24)为内标, 13C NMR 位移值以 CDCl3
(δ 77.23)为内标. HRESIMS 由 Thermo Fisher LC-LTQ-
Orbitrap XL spectrometer 质谱仪测定. X 射线晶体衍射
在 Bruker SMART APEX-II CCD 衍射仪上进行, 采用经
石墨单色器单色化的 Cu Kα 射线 (λ＝1.54178 Å).
Sephadex LH-20 由 GE Healthcare Bio-Sciences AB 生产.
层析用硅胶(200～300 目)及 TLC 预制板(G60 F-254)由
烟台江友硅胶开发有限公司提供. 各种溶剂均为分析
纯, 由国药集团化学试剂有限公司提供.
3.2 植物材料
川桂 C. wilsonii 皮 2010 年 7 月采自四川省巫溪, 由
华中科技大学同济医学院药学院张长弓教授鉴定. 样品
标本(No. 2010-0702)保存在中国湖北省华中科技大学同
济医学院药学院天然药物化学教研室.
3.3 提取与分离
干燥川桂皮 15 kg, 粉碎, 用 95%乙醇冷浸提取 3
次, 减压回收乙醇, 得到总浸膏 800 g. 将总浸膏加适量
蒸馏水混悬, 用乙酸乙酯萃取, 减压浓缩, 得到浸膏
348 g. 将此浸膏经硅胶柱, 以石油醚-丙酮(V∶V＝50∶
1～0∶1)进行洗脱, 得到 5 个部分(Fr.1～Fr.5). 经反复
硅胶、反相硅胶、凝胶 Sephadex LH-20 柱层析进一步纯
化, 从 Fr.1 中分离得到化合物 1 (30 mg). 从 Fr.2 得到化
合物4 (22 mg), 5 (208 mg)和11 (5 mg). 从Fr.3得到化合
物 9 (12 mg)和 10 (20 mg), 从 Fr.4得到化合物 2 (20 mg),
3 (11 mg)和 7 (15 mg). Fr.5 经过凝胶柱层析(Sephadex
LH-20, 甲醇)得到化合物 6 (87 mg)和 8 (12 mg).
3.4 (3S,22R,24R)-stigmast-5-ene-3β,22α-diol (1)的
理化常数及波谱数据
无色针状结晶 , 易溶于氯仿 , 微溶于甲醇 . m.p.
175～176 . ℃ 25D[ ]α －21.6 (c 1.3, CHCl3); 1H NMR
(CDCl3, 400 MHz)和 13C NMR (CDCl3, 100 MHz)数据见
表 1. HRESIMS calcd for C29H50O2Na [M ＋ Na] ＋
453.3703, found 453.3686.
3.5 (3S,22R,24R)-stigmast-5-ene-3β,22α-diol (1)的
晶体结构测定
将化合物在甲醇和氯仿(V∶V＝3∶1)混合溶液中
室温放置得结晶 , 得无色晶体 , 该晶体的分子式为
C29H50O2•CH3OH (Mr＝462.73); m.p. 175～176 ; ℃ 属于
斜方晶系, 空间群 P212121; 晶胞参数: a＝6.0951(4) Å,
b＝15.0947(8) Å, c＝33.5288 (19) Å, α＝γ＝β＝90°, V＝
3084.8(3) Å3, Z＝4, F(000)＝1032, Dc＝0.996 Mg/m3.
晶体(0.12 mm×0.10 mm×0.10 mm)结构的测定在
Bruker SMART APEX-II CCD 衍射仪上进行. 采用经石
墨单色器单色化的Cu Kα射线(λ＝1.54178 Å). 于296(2)
K, 在 3.94°＜θ＜40.59°范围内收集 9890 个衍射点; 其
中, 独立衍射点 1881 个(Rint＝0.0366). 晶体结构用直接
法(SIR97[17])解出, 并用全矩阵最少二乘法(SHELXL[18])

有机化学 研究论文

1278 http://sioc-journal.cn/ © 2013 Chinese Chemical Society & SIOC, CAS Chin. J. Org. Chem. 2013, 33, 1273～1278
对所有非氢原子各向异性热参数进行修正. 所有非氢原
子都给出了各向异性热参数. 氢原子的位置由理论加氢
得出. R1＝0.0798, wR2＝0.2321 [I＞2σ(I)], Flack 参数为
0.1 (7). 晶体数据保存在英国剑桥数据中心, 保存号
CCDC 931377.
3.6 免疫调节活性测试
3.6.1 实验动物
BALB/c 纯系小鼠, 雄性, 18～20 g, 购自湖北省实
验动物研究中心 , 动物生产许可证号 : SCXK(鄂 )
2008-0005 号. 所有实验均严格按照实验动物有关条例
进行.
3.6.2 小鼠脾脏淋巴细胞的制备
参照文献[19]中的方法制备.
3.6.3 CCK-8 法检测化合物对小鼠脾脏淋巴细胞活
性的影响
小鼠脾脏淋巴细胞悬液 1×106/孔接种于 96 孔板,
同时加入不同浓度化合物, 另设相应的溶媒对照及培养
液本底对照, 总体积为 200 μL. 37 , 5% CO℃ 2培养箱中
培养 48 h. 结束培养前 8～10 h 加入 CCK-8 溶液. 至培
养结束, 于酶标仪 450 nm(参比 650 nm)处测定 OD 值.
3.6.4 CCK-8 法检测化合物对小鼠脾脏 T, B 淋巴细
胞增殖功能的影响
小鼠脾脏淋巴细胞悬液 5×105/孔接种于 96 孔板,
加入 ConA(终浓度 5 μg/mL)或 LPS(终浓度 10 μg/mL),
不同浓度化合物, 并设相应的无 ConA 或 LPS 对照孔作
为阴性对照组, 仅加入 ConA 或 LPS 而无化合物对照孔
作为阳性对照组. 37 , 5% CO℃ 2培养箱中培养 48 h. 结
束培养前 8～10 h 加入 CCK-8 溶液. 至培养结束, 于酶
标仪 450 nm (参比 650 nm)处测定 OD 值.
3.6.5 结果评定
细胞存活率(%)＝[化合物组(OD450)/阴性对照组
(OD450)]×100. 增强/抑制率(%)＝[(化合物组(OD450)－
阳性对照组(OD450))/(阳性对照组(OD450)]×100. 在无细
胞毒性作用的情况下, 增强/抑制率达到 10%或以上, 则
说明该样品有增强/抑制小鼠淋巴细胞的作用.

致谢 感谢华中科技大学同济医学院药学院张长弓教
授鉴定植物材料, 华中师范大学孟祥高老师测试化合物
1 的单晶 X 射线衍射.

辅助材料 (Supporting Information) 化合物 1 的
HRESIMS, 1H NMR, 13C NMR, DEPT, HSQC, HMBC,
1H-1H COSY 和 NOESY 谱图; 晶体堆积图; 晶体学及结
构修正数据; 选择性键长和键角数据; 氢键数据; 扭转
角数据 . 这些材料可以免费从本刊网站 (http://sioc-
journal.cn/)上下载.
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